Индикаторы загрязнения. Бактерии группы кишечной палочки.

Разделы статьи:

Индикаторы загрязнения. Бактерии группы кишечной палочки.

Показатели группы кишечной палочки

В Руководстве ВОЗ по контролю качества питьевой воды [10] для оценки свежего фекального загрязнения рекомендован показатель Escherichia coli (индексный). При определенных обстоятельствах в качестве альтернативного санитарного показателя фекального загрязнения рекомендованы термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) – индексный показатель.

Колиформные бактерии (КБ) рекомендованы как технологический индикаторный показатель для оценки качества водоподготовки. Согласно отечественной нормативной базе [10], колиформные бактерии в терминологии ВОЗ соответствуют показателю ОКБ – общие колиформные бактерии.

После публикации [3] в отечественной нормативной базе появился новый показатель – глюкозоположительные колиформные бактерии (ГКБ). Этот санитарный показатель является ничем иным, как попыткой ряда авторов реанимировать вышедший из употребления показатель – бактерии группы кишечной палочки (БГКП).

Он отличается от ГКБ только нормируемым объемом: БГКП нормируются на 1 л, а ГКБ – на 300 мл. Показатель ГКБ существует только в отечественной нормативной базе и больше нигде в мире, его диагностическая ценность весьма сомнительна.

ГКБ – это грамотрицательные палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, способные расти на среде Эндо (дифференциальная лактозная среда с солями желчи) и сбраживающие глюкозу до кислоты и газа при 37 °С за 24 часа.

Этими свойствами обладают практически все представители семейства Enterobacteriacea, кроме представителей негазообразующих родов Shigella, Hafnia и некоторых других. А поскольку в данное семейство входит много сапрофитов и представителей эпифитной микрофлоры, прекрасно размножающихся в окружающей среде, ГКБ не может рассматриваться в качестве показателя фекального загрязнения.

В определенной степени ГКБ можно принять в качестве технологического показателя, например, при проведении дезинфекционных мероприятий на этапе водоподготовки.

ОКБ (общие колиформные бактерии) – это грамотрицательные палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, которые способны сбраживать до кислоты и газа не только глюкозу, но и лактозу при температуре 37 °С за 48 часов.

На среде Эндо они образуют темные малиновые, бордовые или красные колонии с отпечатком и металлическим блеском или без него. Отпечаток – это изменение (потемнение) среды под колониями ОКБ вследствие интенсивного сбраживания лактозы. В целом ОКБ – более узкая группа микроорганизмов, чем ГКБ.

Тем не менее, группа ОКБ включает достаточно большое число родов семейства Enterobacteriacea, представители которых способны сбраживать лактозу: Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Pantoea, Rahnella и др. Среди этих микроорганизмов также присутствует большое число свободноживущих сапрофитов.

Поэтому санитарный показатель ОКБ также мало пригоден для оценки фекального загрязнения, но является важным технологическим (индикаторным) показателем.

Санитарный показатель ТКБ (термотолерантные колиформные бактерии) – показатель свежего фекального загрязнения. ТКБ – это грам-отрицательные палочки, не обладающие цитохромоксидазой, способные сбраживать лактозу до кислоты и газа не только при температуре 37 °С за 48 часов, но и при 44 °С за 24 часа.

На среде Эндо они также образуют темные малиновые, бордовые или красные колонии с отпечатком и металлическим блеском или без него. Способность сбраживать лактозу при более высокой температуре существенно сужает круг представителей семейства Enterobacteriacea, входящих в нормативный санитарный показатель. Кроме E.

сoli – доминирующего представителя ТКБ, в эту группу входят только отдельные представители родов Citrobacter, Enterobacter и Klebsiella. Санитарный показатель E. coli, на наш взгляд, более корректно было бы называть «предполагаемые E.

coli» (как в первой версии стандарта ISO 9308-1:1990), поскольку перечень предлагаемых подтверждающих тестов не всегда достаточен для достоверной идентификации этого санитарно-показательного микроорганизма. В настоящее время в РФ по E. coli водные объекты пока не нормируются. Санитарный показатель E.

coli определяется только в рамках ГОСТа [11], носящего рекомендательный характер. По версии этого документа, к E. coli должны быть отнесены грамотрицательные палочки, не обладающие ферментом цитохромоксидазой, дающие типичный рост на среде Эндо и способные сбраживать лактозу до кислоты и газа при 44 °С за 24 часа и образовывать индол на среде с триптофаном.

Результаты определения показателей ГКБ, ОКБ, ТКБ и E. coli представляются в виде КОЕ/100 мл; колиформные бактерии не должны обнаруживаться в 100 мл питьевой воды при трехкратном исследовании нормируемого объема [2–4].

Для определения колиформных показателей широко используется мембранный метод посева, хотя не меньшее значение имеет и титрационный метод.

Отечественные методики определения данных санитарно-показательных микроорганизмов сильно варьируют в зависимости от исследуемого объекта и требований нормативно-методических документов. Основной плотной дифференциальной средой для определения колиформных показателей является среда Эндо.

Однако в последней редакции ISO 9308-1:2000 среда Эндо заменена другой лактозной средой – Тергитол 7. Причиной для такой замены послужила потенциальная канцерогенность фуксина – анилинового красителя, входящего в состав среды Эндо.

Для метода НВЧ (наиболее вероятного числа) используют жидкие среды обогащения. Для оценки потенциально чистых объектов используют лактозо-пептонную воду, для потенциально загрязненных – среду Кесслера или ее аналоги.

Питательные среды нового поколения часто именуют хромогенными. В отличие от традиционных сред они позволяют определять не только признак (например, утилизацию лактозы), а непосредственно отдельные ферменты, наличие которых характерно для искомых санитарно-показательных микроорганизмов. Хромогенные среды для идентификации E.

сoli (например, Chromocult или Coli ID) позволяют определять фермент β-глюкуронидазу, высокоспецифичный для эшерихий. Его наличие и способность образовывать индол с 95-процентной вероятностью свидетельствуют о принадлежности энтеробактерий к виду E. coli. Эти же среды позволяют определять и фермент β-галактозидазу, характерную для ОКБ.

Однако ценность этого диагностического теста сомнительна, поскольку данным ферментом обладают и аэромонады, свободноживущие оксидазоположительные палочки, не относящиеся к ОКБ. Компания Merck усовершенствовала хромогенную среду Chromocult ES, введя в нее селективную добавку, ингибирующую рост аэромонад [12].

Из инновационных технологий в области санитарной бактериологии воды следует отметить тест-системы, использующие сухие среды на специальных пластиковых подложках. Примером таких тест-систем являются подложки 3M™ Petrifilm™ линейки Aqua, в частности продукт «Aqua Coliform Count Plate» (AQCC, 3M™ Petrifilm™), предназначенный для определения ОКБ и ТКБ в воде.

Уникальность петрифильмов (готовых сред на подложках) – простота использования. Исключается трудоемкий этап приготовления питательных сред, облегчается их хранение и утилизация.

Однако главное их преимущество (перед традиционными средами и средами на подложках других производителей) – это возможность уже на этапе первичного посева при получении изолированных колоний не только определять их способность утилизировать лактозу до кислоты, но и выявлять газообразование. Это позволяет в большинстве случаев сократить продолжительность анализа до 1–2 суток.

Кроме того, петрифильмы AQCC (в отличие от среды Эндо) можно инкубировать при 44 °С, что позволяет в полной мере использовать селективный фактор высокой температуры уже на этапе первичного посева и тем самым существенно сократить продолжительность и трудоемкость анализа на ТКБ [7; 8]. При посеве на подложки «Aqua Coliform Count Plate» (AQCC, 3M™ Petrifilm™) колонии ОКБ и ТКБ окрашиваются в интенсивный красный цвет с образованием вокруг колонии пузырьков газа [8].

Кишечная палочка и ее значение при санитарной оценке пищевых продуктов

Качество, санитарно-гигиеническая оценка пищевых продуктов устанавливаются на основе комплекса органолептических, физико-химических и микробиологических показателей в соответствии с требованиями ГОСТов, Республиканских и Отраслевых стандартов и другой документации.

Известно, что патогенные микробы попадают во внешнюю среду (в том числе и на пищевые продукты) из организма больных (или бациллоносителей) людей и животных.

Непосредственное выявление патогенных микробов в естественных субстратах (воде, почве, пищевых продуктах) часто связано с большими затруднениями.

Поэтому присутствие этих микроорганизмов устанавливают не прямым, а косвенным путем – по выявлению загрязнения исследуемых объектов выделениями человека и животных.

Индикатором такого загрязнения объектов служит наличие на них санитарно-показательных микробов – возможных спутников болезнетворных микроорганизмов.

Санитарно-показательными микроорганизмами являются постоянные обитатели естественных полостей тела людей и животных.

Вместе с выделениями организма они поступают во внешнюю среду и в течение определенного времени сохраняются в ней жизнеспособными.

Поскольку вместе с ними будут (при наличии) выделяться и патогенные микробы, то обнаружение санитарно-показательных микроорганизмов, специфических для

данного выделения, косвенно указывает на возможное присутствие соответствующих патогенных микробов.

В отношении возбудителей кишечных инфекций (дизентерии, брюшного тифа, паратифа), естественно, роль таких индикаторов принадлежит представителям нормальной микрофлоры кишечника.

Среди массы разнообразных микробов содержимого толстого отдела кишечника в очень больших количествах находятся кишечные палочки (сотни миллионов в 1 г) энтерококки, перфрингенс.

Обнаружение этих бактерий в исследуемых объектах служит показателем их загрязнения кишечными выделениями (фекалиями) человека и свидетельствует о возможном наличии возбудителей кишечных заболеваний, которые выделяются из больного организма или бациллоносителя во внешнюю среду с фекалиями.

В настоящее время в качестве показателя фекального загрязнения объектов внешней среды (в том числе и пищевых продуктов) принята кишечная палочка.

Читайте также:  Холецистэктомия через мини доступ. Техника холецистэктомии от дна желчного пузыря.

Эта бактерия была выделена впервые из испражнений человека Эшерихом (1885г.). Она является одним из представителей группы бактерий, сходных между собой по морфологическим и биологическим признакам.

Всесторонние исследования этой группы бактерий были проведены И. Е. Минкевичем.

На основании неодинаковой способности использовать лимоннокислые соли в качестве источника углерода, способности сбраживать углеводы при повышенной температуре (43–45 °С) и некоторого различия в других биохимических свойствах бактерии группы кишечной палочки отнесены к трем родам семейства Enterobacteriaceae: к роду Escherichia – бактерии, типичные для кишечной микрофлоры человека и теплокровных животных; к родам Citrobacter и Enterobacter–бактерии, встречаемые тоже (особенно Citrobacter) в кишечнике, но чаще в природе (почве, на растениях). В связи с этим показательное значение бактерий этих трех родов в отношении фекального загрязнения объектов внешней среды будет неодинаковым. В ряде случаев в зависимости от целей исследования индикаторным организмом принимается лишь типичная фекальная кишечная палочка – Escherichia coli; в других – все представители группы кишечной палочки.

Экспериментальные исследования и наблюдения в естественных условиях показывают, что Е. coli под влиянием условий внешней среды способна значительно изменять биологические и ферментативные свойства и приобретать признаки цитробак-тера и энтеробактера. Поэтому при санитарных исследованиях чаще учитывают все бактерии группы кишечной палочки.

При санитарно-гигиенической характеристике пищевого продукта необходимо не только установить присутствие в нем кишечной палочки, но и учесть количество этих бактерий. Чем оно больше, тем вероятнее присутствие в объекте патогенных бактерий коли-тифозной группы. Поэтому определяют титр кишечной

палочки (коли-титр) и индекс кишечной палочки (коли-индекс). Под коли-титром понимают наименьшее количество (объем, масса) исследуемого материала, в котором обнаружена кишечная палочка. Коли-индексом называют число кишечных палочек в единице объема (массы) исследуемого материала.

Индикаторы загрязнения. Бактерии группы кишечной палочки.

Методы определения фекального загрязнения по обнаружению бактерий группы кишечной палочки и дифференциации отдельных представителей этой группы описаны в руководствах к лабораторным занятиям.

Для повышения надежности контроля качества пищевых продуктов необходимо «расширить круг» представителей санитар-но-показательных микроорганизмов. В число их, кроме кишечной палочки, предлагается включить и других представителей нормальной кишечной микрофлоры человека – Clostridium perfringens и энтерококков, а для некоторых продуктов – протея и стафилококков.

Санитарно-показательное значение имеет и общая обсеме-ненность исследуемого объекта микроорганизмами – его «микробное число».

Чем оно больше, тем выше вероятность попадания в объект потенциально опасных для человека микроорганизмов.

Этот показатель очень важен при обследовании посуды, столовых приборов^рук, а также готовых блюд, особенно при проверке правильности термической обработки, условий хранения и санитарно-гигиенического состояния производства.

В настоящее время разработаны и введены в соответствующую документацию нормы допустимого содержания общей микробной обсемененности и кишечной палочки в питьевой воде и некоторых пищевых продуктах (см. гл. 6, 7).

Совершенствование нормирования пищевых продуктов по микробиологическим показателям обеспечивает безопасность продуктов в эпидемиологическом отношении, способствует повышению их качества и улучшению санитарного состояния предприятия.

Эффективный индикатор загрязнения воды кишечной палочкой

Индикаторы загрязнения. Бактерии группы кишечной палочки.Небольшое количество резоруфин-β-D-глюкоронида позволяет определить наличие в воде Escherichia coli просто по изменению окраски. Раствор индикатора отличается оранжевой окраской в отсутствии E. coli (слева) и розовеет в присутствии патогенной бактериальной флоры (справа). (Рисунок из Environmental Science & Technology, 2014).

Правильный подбор строения молекулы, меняющей цвет, и её синтез позволил исследователям разработать простой и потенциально недорогой метод обнаружения Escherichia coli (кишечной палочки) в питьевой воде, который может найти применение в развивающихся странах.

Фермент β-глюкоронидаза, который весьма характерен для бактерий E. coli, но при этом не вырабатывается другими типами бактерий, способствует гидролизу глюкуронидов, протекающему с образованием глюкуроновой кислоты и молекулы красителя.

При высвобождении красители либо способствуют изменению цвета раствора, либо способствуют появлению флуоресценции, по которым можно судить о присутствии E. coli.

К сожалению, коммерчески доступные глюкурониды отличаются большой стоимостью, или же для того, чтобы получить сигнал, необходимо дополнительное оборудование.

Чтобы понизить стоимость определения патогенной кишечной палочки в воде, исследователи из группы Дэвиса решили подобрать глюкуронид, фрагментом которого является краситель, дающий особо интенсивное изменение окраски в результате ферментативного гидролиза — такой подход бы позволил понизить количество применяющегося индикатора и, в конечном итоге, сэкономить. Выбор исследователей пал на резоруфин-β-D-глюкоронид [resorufin-β-D-glucuronide (REG)], который ранее применялся для гистохимических анализов. Сам по себе резоруфин-β-D-глюкоронид оранжевый, но при гидролизе он высвобождает розовый при физиологических значениях рН краситель резоруфин.

Для испытания системы исследователи растворили всего 0,1 мг резоруфин-β-D-глюкоронида в 100 мл испытуемого раствора и наблюдали чёткий переход из оранжевой окраски в красную после 20 часов инкубирования. Новый индикатор позволяет обнаружить всего 10 бактерий E. coli в образце.

Бактерии группы кишечной палочки — индикаторы загрязнения

Летом продукты портятся быстро, поэтому в данное время года есть большая вероятность съесть что-либо недоброкачественное.

Бактерии бурно размножаются в жару, попав в мясные, молочные и даже кондитерские изделия. Наиболее интенсивно развиваются при температуре 37 С, но хорошо себя чувствуют при комнатной температуре.

Погибают при +60 С за 15 минут. Также неоспоримый факт, что кишечная палочка является болезнью грязных рук.

Кишечная палочка — эта группа бактерий, которая объединяет более 100 видов микроорганизмов, обитающих в кишечнике человека, животных и птиц. Они обладают высокой устойчивостью к неблагоприятным условиям и могут долго сохраняться в воде, почве, на предметах.

Кишечная палочка – наиболее универсальный микробиологический показатель качества пищевых продуктов.

Пищевое отравление может вызвать продукт с очень большой обсемененностью (содержанием) этих бактерий или же продукт, в котором присутствуют отдельные небезопасные для человека представители этой группы.

В основном наличие БГКП свидетельствует об общем санитарном состоянии производства, в том числе и о чистоте оборудования. С другой стороны обнаружение БГКП в продукте может свидетельствовать о неправильных условиях хранения.

Таким образом, можно сказать, что виновником нахождения и роста этого микроорганизма являются три игрока рынка – производитель, перевозчик и продавец. Кто виноват больше, а кто меньше, с точки зрения потребителя не важно.

Пищевые отравления, вызванные кишечной палочкой, опасны из-за выделяемых ими токсинов. Некоторые из этих токсинов являются потенциально смертельными.

Симптомами кишечной палочки становится развернутая клиническая картина кишечного дисбактериоза: помимо расстройств стула, у больного наблюдается тошнота и рвота, вздутие и боль в животе, появляется неприятный запах изо рта.

Среди симптомов общей интоксикации – повышенная утомляемость, слабость, сонливость, отсутствие аппетита.

Чтобы обезопасить себя и своих близких от воздействия кишечной палочки, соблюдайте следующие правила:

  • Приобретенные или собранные овощи и фрукты необходимо тщательно мыть под проточной водой. Желательно для этих целей использовать хозяйственное мыло. Салат, петрушку или другую зелень перед употреблением замочите на пару часов в холодной воде.
  • Ни в коем случае перед покупкой не пробуйте на рынке ягоды, фрукты или овощи. Откажитесь от приобретения разрезанных арбузов или дынь, не просите надрезать их на улице. Всегда (вернувшись с улицы, после посещения туалета, перед приемом пищи) тщательно мойте руки с мылом. Уделяйте особое внимание области между пальцами и стригите коротко ногти. Пейте только бутилированную (промышленного производства) или кипяченую питьевую воду. Не используйте воду из водоемов даже в технических целях.
  • Тщательно прожаривайте или проваривайте мясо и фарш. Для резки овощей и разделки мяса пользуйтесь отдельными досками и ножами. После употребления тщательно мойте кухонную утварь с помощью горячей воды и хозяйственного мыла. Соблюдайте правила личной гигиены. Принесенные ребенком игрушки из детского сада или с улицы следует тщательно мыть с мылом

Санитарно-показательные микроорганизмы в отношении кишечных инфекций

Индикатором кишечных инфекций является естественная микрофлора кишечника человека и теплокровных животных. Санитарно-показательными микробами могут служить постоянные обитатели кишечника человека, находящиеся там в большом количестве и обладающие определенными признаками, по которым облегчается их количественный учет.

Бактерии группы кишечной палочки.

В качестве показателя фекального загрязнения для воды еще в конце прошлого века предложено использовать бактерии группы кишечной палочки.

За прошедшие сто лет в отношении воды предложены и другие санитарно-показательные организмы, но предпочтение отдается бактериям группы кишечной палочки как надежному показателю фекального загрязнения воды. Такое значение кишечная палочка приобрела по многим причинам.

Прежде всего она преобладает среди микробного населения толстых кишок человека и теплокровных животных, содержится в фекалиях в огромном количестве — сотни миллионов в 1 г.

Эти микробы устойчивы к внешним условиям и по выживаемости превосходят патогенную бактериальную микрофлору кишечника. Обнаружение в объектах среды кишечной палочки указывает на их фекальное загрязнение и возможное присутствие возбудителей желудочно-кишечных заболеваний.

Читайте также:  Сустанон 250 уколы в ампулах для инъекций в растворе - инструкция по применению, формы выпуска, аналоги и отзывы

Все многочисленные бактерии, входящие в группу бактерий кишечной палочки, имеют общие свойства: короткие аэробные или факультативно-анаэробные палочки, не образующие спор, окраска по Граму отрицательная, способны сбраживать глюкозу и другие сахара. На специальных средах растут в виде характерных колоний.

Бактерии группы кишечной палочки ведут себя идентично патогенным кишечным бактериям, поэтому они и сохраняют свое санитарно-показательное значение в качестве основного нормируемого показателя степени фекального загрязнения и одновременно косвенного индикатора эпидемиологической опасности водоемов для различного водопользования. Роль бактерий группы кишечной палочки отражается в официальных документах, и этот показатель нормируется.

Бактерии группы кишечной палочки являются основным критерием при оценке качества воды. Допустимо количество бактерий группы кишечной палочки в 1 л питьевой воды (коли-индекс): не более 3, в поверхностных источниках воды не более 10000.

Понятие «фекальное загрязнение» в значительной степени условно, так как непосредственное попадание каловых масс в продукт происходит редко (например, попадание в молоко частиц навоза при дойке).

Чаще всего бактерии группы кишечной палочки попадают в продукт не прямо (через фекалии), а косвенно — через руки персонала, оборудование, насекомых и т. д. При этом количество жизнеспособных бактерий в продукте на промежуточных этапах производства быстро снижается.

Обсеменение продукта в пределах от 10 палочек и более на 1 г можно наблюдать только в антисанитарных условиях.

За рубежом в качестве санитарно-показательных микроорганизмов используют коли-формы, кишечную палочку Эшерихия коли и «фекальные коли-формы». Все они принадлежат к семейству энтеробактерий, природным местообитанием которых являются фекалии человека и животных.

Кишечная палочка или ее варианты являются индикаторами свежего фекального загрязнения. Другие виды колиформ могут расти или длительно сохраняться в средах фекального происхождения — они являются показателями старого фекального загрязнения, а также низкого санитарного состояния.

Загрязнение пищи палочкой Эшерихия коли указывает на возможность попадания в нее возбудителей желудочно-кишечных заболеваний. Поэтому роль коли-форм состоит в том, что они являются индикаторами загрязнения патогенными микробами.

Кишечные кокки и вирусы.

Во всем мире ведутся поиски новых индикаторных микроорганизмов. Кроме бактерий группы кишечной палочки предлагаются кишечные кокки (энтерококки), кишечные вирусы (энтеровирусы), фаги кишечной палочки и др.

Во многих странах энтерококки признаны дополнительным показателем загрязнения воды микробами фекального происхождения. Энтерококки обладают следующими характерными свойствами: имеют шаровидную форму, располагаются попарно, встречаются мелкие и крупные, а также различаются по форме — круглые, удлиненные, иногда сильно вытянутые.

По Граму красятся положительно, каталазу не образуют. Энтерококки отличаются от других кокков, распространенных в окружающей среде, а также от тех, которые составляют нормальную микрофлору верхних дыхательных путей или патогенных для человека. Основное отличие — повышенная устойчивость к различным физическим и химическим факторам.

Энтерококки очень быстро отмирают в летний период при повышенной температуре воды. Они являются естественными обитателями кишечника, их присутствие указывает на фекальное загрязнение окружающей среды. В окружающую среду энтерококки выделяются в меньших количествах и быстрее отмирают в воде и почве, чем кишечная палочка. Как правило, в этих объектах они не размножаются.

Поэтому обнаружение энтерококков служит показателем свежего фекального загрязнения.

За рубежом энтерококки рассматриваются как наиболее надежные показатели фекального загрязнения воды закрытых источников, в частности колодцев.

Преимуществом энтерококков в качестве санитарно-показательных организмов является большая достоверность их фекального происхождения и отсутствие размножения в воде.

Наличие энтерококков подтверждает фекальное загрязнение воды в сомнительных случаях. Показано, что содержание в воде поверхностных источников кроме кишечной палочки энтерококков и фагов кишечной палочки в количестве более 1 тыс. в 1 л свидетельствует о недавнем поступлении фекального загрязнения, опасного в эпидемиологическом отношении.

Для оценки степени эпидемиологической опасности или степени вирусного загрязнения объекта, особенно при определении качества воды, возникла необходимость обнаружения вирусов кишечной труппы (энтеровирусов).

Так как прямое определение вирусов сложно и длительно, стали искать санитарно-показательные организмы для оценки качества воды в отношении вирусного загрязнения.

Такими микроорганизмами признаны фаги кишечной палочки (коли-фаги), которые в течение длительного времени выживают в воде, устойчивы к воздействию дезинфектантов.

Клостридии.

Некоторые бактерии рода Клостридиум, преимущественно Клостридиум перфрингенс, предложены в качестве санитарно-показательных микроорганизмов в отношении кишечных инфекций. Этот микроб обитает в кишечнике человека в довольно больших количествах и его можно быстро определить.

Благодаря образованию спор рассматриваемые микроорганизмы длительно выживают в окружающей среде и очень устойчивы к внешним воздействиям. Присутствие их в воде расценивается как старое фекальное загрязнение. К действию хлора они чувствительны и при двукратном хлорировании воды на водопроводных станциях теряют термоустойчивость.

Обнаружено, что одновременно с увеличением в воде количества санитарно-показательных клостридий увеличивается число возбудителей ботулизма, столбняка и газовой гангрены, особенно в отсутствие кислорода в процессе гниения и при благоприятной температуре. Это подтверждает индикаторное значение теста в отношении патогенных клостридий.

Для оценки степени инфицирования объектов окружающей среды патогенными клостридиями они имеют первостепенное значение по сравнению с бактериями группы кишечной палочки, так как вызывают пищевые отравления, порчу консервов и т. п.

В используемой на консервных предприятиях воде количество клостридий нормируется: они должны отсутствовать в 100 мл. В ряде стран клостридии включены в стандарты качества воды как дополнительный показатель.

В группу санитарно-показательных клостридий объединяют грамположительные, образующие споры анаэробные палочки. Эта группа на 90-95 % состоит из Клостридиум перфрингенс и Клостридиум спорогенес.

Санитарно-показательные клостридии служат показателем загрязненности объектов окружающей среды. Эти микробы более устойчивы, чем бактерии группы кишечной палочки, так как образуют споры.

Это наиболее показательный тест в отношении патогенных и токсигенных клостридий.

Определение санитарно-показательных клостридий проводят в почве и питьевой воде, на пищевых предприятиях, при выборе новых источников водоснабжения.

В группу БГКП входят представители нескольких родов семейства Enterobacteriaceae, в том числе Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia. Эти микроорганизмы обладают многими общими морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами. Колиформные или колиморные это одно и то же.

Бактерии группы кишечных палочек — короткие (длина 1-3 мкм, ширина 0,5-0,8 мкм) полиморфные подвижные и неподвижные грамотрицательные палочки, не образующие спор. Бактерии этой группы хорошо растут на простых питательных средах: мясопептонном бульоне (МПБ), мясопептонном агаре (МПА).

На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды; осадок небольшой, сероватого цвета, легкоразбивающийся. Образуют пристеночное кольцо, пленка на поверхности бульона обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с серовато-голубым отливом, легко сливающиеся между собой.

На среде Эндо образуют плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным металлическим блеском (Е. coli) или без блеска (Е. aerogenes). Для лактозоотрицательных вариантов кишечной палочки (В. paracoli) характерны бесцветные колонии.

Им свойственна широкая приспособительная изменчивость, в результате которой возникают разнообразные варианты, что усложняет их классификацию.

Большинство бактерий группы кишечных палочек (БГКП) не разжижают желатина, свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода, обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других Сахаров, а также спиртов. Не обладают оксидазной активностью.

По способности расщеплять лактозу при температуре 37°С БГКП делят на лактозоотрицательные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или колиформные, которые нормируются по международным стандартам. Из группы ЛКП выделяются фекальные кишечные палочки (ФКП), способные ферментировать лактозу при температуре 44,5°С. К ним относится Е.

coli, не растущая на цитратной среде.

В соответствии с ГОСТ 32901-2014 «Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа» бактерии группы кишечных палочек (БГКП, коли-формы) — это микроорганизмы семейства энтеробактерий родов эшерихия, цитробактер, энтеробактер, клебсиела, серратия; бесспоровые, грамотрицательные, аэробные и факультативно-анаэробные палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа.

На этих свойствах основано определение БГКП в молочных продуктах в средах Кесслер (в соответствии с 32901-2014 по образованию газа) или Кода (по изменению цвета индикатора) после термостатирования при температуре 37±1°С в течение 24 ч, а для мороженого — 48 ч.

Дифференциально- диагностическая — среда Эндо, на которой Е. coli образует красные колонии с металлическим блеском.

Образование полупрозрачных бесцветных или бледно-розовых колоний говорит о принадлежности микроорганизмов к лакгозоотри- цательным, в том числе патогенным энтеробактериям.

Санитарно-показательное значение родов неодинаково: наличие эшери хий свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении, цитробактер и энтеробактер (иногда их считают измененными эшерихиями под влиянием пребывания во внешней среде) — показатели давнего или нефекального загрязнения.

В молоке БГКП хорошо размножаются, доводя его кислотность до 50- 80°Т и образуя в нем неровный ноздреватый сгусток. Молочнокислые микроорганизмы замедляют развитие БГКП. При режимах пастеризации, принятых в молочной промышленности, БГКП гибнут. Обычные дезинфицирующие средства полностью обеззараживают оборудование, инвентарь, руки от БГКП.

  • Дифференциацию БГКП можно проводить с помощью специальных тестов (комплекс признаков ТИМАЦ + Л):
  • Т — температурный тест (тест Эйкмана, выявляет способность эшери- хий ферментировать глюкозу, лактозу, маннит с образованием газа при 44- 45°С, другие не обладают такой способностью);
  • И— индолообразование (способность эшерихий расщеплять аминокислоту триптофан с выделением индола);
  • М — реакция с метиловым красным, заключается в определении кислотообразования при ферментации глюкозы: если индикатор изменяет светло-желтый цвет на красный, это свидетельствует о снижении рН до 5 и о наличии эшерихий и цитробактер, энтеробактер не изменяет цвет индикатора;
  • А— реакция на ацетилметилкарбинол (ацетоин), выявляет способность микроорганизмов образовывать это вещество в среде с глюкозой; проводится качественная реакция с гидроксидом калия и креатином, дающая розовый цвет, такой способностью обладают только представители рода цитробактер;
  • Ц — цитратный тест (способность микроорганизмов усваивать в качестве единственного источника углерода лимонную кислоту или ее соли, используют среду Козера с цитратами, цитробактер и энтеробактер растут на таких средах, называются цитратположительными бактериями, эшерихии — нет);
  • Л — лактозный тест (способность ферментировать лактозу).
  • Основные (наиболее стабильные) тесты — температурный и цитратный.
Читайте также:  Триттико таблетки 75 мг и 150 мг - инструкция по применению, механизм действия, формы выпуска, аналоги и отзывы

При воздействии факторов внешней среды (например, в присутствии антибиотиков) свойства БГКП могут меняться. Для дифференциации видов дополнительно определяют уреазную активность, рост на средах с цианистым калием, ферментацию различных углеводов, используют специальные таблицы.

Критерии санитарной оценки молочных продуктов и других объектов по присутствию СПМ предусмотрены действующими ГОСТ и СанПиН.

Использовавшийся ранее показатель бродильного титра заменен показателем отсутствия БГКП в определенной массе продукта.

Так, например, в пастеризованном молоке БГКП должны отсутствовать в 0,01 см, в ультрапастеризованном молоке — в 10 см3, ряженке — в 1 г, в кефирной закваске — в 3 мл, в твороге — в 0,001 г.

Бактерии группы кишечной палочки (бгкп)

Основными источниками распространения инфекционных заболеваний являются больные люди и теплокровные животные. Наиболее массовое выделение патогенных микроорганизмов происходит воздушно-капельным путем или с фекалиями.

Непосредственное обнаружение возбудителей инфекций во внешней среде сопряжено с определенными трудностями.

Во-первых, они находятся в окружающей среде непостоянно, во-вторых, их количество существенно меньше, чем сапрофитных микроорганизмов, и, в-третьих, для их культивирования требуются довольно сложные питательные среды.

Одновременно с выделением патогенных микробов во внешнюю среду попадают и представители нормальной микрофлоры человека и животных, как правило, постоянной по составу и мало изменяющейся при инфекционных заболеваниях. Выделяемые при этом сапрофитные микробы являются показателями санитарного неблагополучия, потенциальной опасности объекта, в связи с чем они получили название санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ).

  • Санитарно-показательными могут быть признаны лишь микроорганизмы, отвечающие следующим требованиям:
  • ✵ они должны постоянно содержаться в выделениях человека и теплокровных животных и в больших количествах выделяться во внешнюю среду;
  • ✵ после выделения они должны сохранять свою жизнеспособность в течение времени, близкого к срокам выживаемости патогенных микробов;
  • ✵ они не должны размножаться в окружающей среде и изменять свои биологические свойства;
  • ✵ они должны быть достаточно типичными, чтобы их дифференциальная диагностика не вызывала затруднений.
  • СПМ условно разделяют на три группы.

Первая группа — обитатели кишечника человека и животных (индикаторы фекального загрязнения). В эту группу входят бактерии группы кишечной палочки (БГКП), энтерококки, сульфитредуцирующие бактерии (Clostridium perfingens), колифаги.

Вторая группа — обитатели верхних дыхательных путей и носоглотки, (индикаторы воздушно-капельного загрязнения). В эту группу традиционно включали гемолитические стрептококки и стафилококки, однако в настоящее время к СПМ относят только стафилококки.

Третья группа — обитатели внешней среды (индикаторы процессов самоочищения). В нее входят аммонифицируующие, нитрифицирующие, некоторые спорообразующие бактерии, актиномицеты и грибы.

В табл. 9 показаны объекты внешней среды, в которых определяют санитарно-показательные микроорганизмы.

Таблица 9. Санитарно-показательные микроорганизмы, определяемые в объектах внешней среды

Исследуемые объекты Санитарно-показательные м/о
Вода БГКП, энтерококки, стафилококки, колифаги, сульфитредуцирующие клостридии (С. perfringens)
Почва БГКП, энтерококки, С. perfringens
Воздух Стрептококки, стафилококки
Пищевые продукты БГКП, энтерококки, стафилококки, С. perfringens

14.1. Бактерии группы кишечной палочки (бгкп)

Бактерии этой группы включены в отдел Gracilicutes и объединены в семейство Enterobacteriaceae. Понятие БГКП по международным стандартам идентично «колиформным бактериям».

  1. В настоящее время к этой группе относят грамотрицательные, не образующие спор палочки, не обладающие оксидазной активностью, способные ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа. Колиформные бактерии подразделяют на две подгруппы:
  2. 1) общие колиформные бактерии, расщепляющие глюкозу, лактозу и маннит с образованием кислоты и газа при 37 °С в течение 24 ч;
  3. 2) термотолерантные колиформные бактерии, расщепляющие глюкозу и лактозу с образованием кислоты и газа при 43—44,5 °С.
  4. В группу БГКП входят роды: Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella.

Представители БГКП или «колиформные бактерии» — мелкие грамотрицательные неспорообразующие палочки, в основном подвижные за счет перитрихиально расположенных жгутиков, капсул не образуют. Исключение составляют бактерии рода Klebsiella — они обладают классической полисахаридной капсулой и лишены жгутиков.

Факультативные анаэробы, получают энергию как в процессе дыхания, так и при брожении. При сбраживании углеводов образуют газы — СО2 и Н2.

Энтеробактерии каталазоположительны и оксидазоотрицательны.

Род Escherichia объединяет кишечные палочки, которые обитают в кишечнике человека и теплокровных животных в качестве сапрофитов.

К этому роду относятся также энтеропатогенные кишечные палочки, вызывающие различные заболевания желудочно-кишечного тракта: колиты, энтероколиты, эшерихиозы и др.

Штаммы кишечных палочек, обитающие в толстой кишке, при ослабленном иммунитете могут вызывать гнойно-воспалительные заболевания за пределами пищеварительного тракта: циститы, отиты, коли-сепсис. Типовой вид — Escherichia coli.

Род Enterobacter. Представители этого рода встречаются не только в кишечнике человека и животных, но и в объектах окружающей среды: пресной воде, почве, на растениях. Различные виды энтеробактера в последние годы выделяют при острых желудочно-кишечных заболеваниях, инфекциях желчных и мочевых путей, гнойных поражениях мозговых оболочек, сепсисе у людей и животных. Типовой вид — Е. cloacae.

Оптимальная температура роста 25—37 °С. Характерные биохимические признаки бактерий этого рода: образование ацетоина (положительная реакция Фогес—Проскауэра), расщепление цитрата натрия в среде Симмонса.

Род Citrobacter получил свое название от слова citrus (лимон) благодаря своей способности расти на цитратной среде Симмонса. Представители этого рода присутствуют в фекалиях человека и животных, в почве, сточных водах, пищевых продуктах.

Относятся к группе условно-патогенных микроорганизмов, часто вызывают диарейные заболевания (особенно Citrobacter freundii) и гнойно-септические инфекции. Типовой вид С. freundii. Отличительной особенностью С.

freundii является способность продуцировать сероводород.

Род Klebsiella назван в 1975 г. в честь немецкого бактериолога Э. Клебса, который выделил клебсиеллы от людей, умерших при крупозной пневмонии. Бактерии этого рода широко распространены в окружающей среде, их часто выделяют из воды, почвы, пищевых продуктов. Они могут присутствовать в биоценозах носоглотки, кишечника.

Представители данного рода могут вызывать заболевание — клебсиеллез. Наибольшее число заболеваний клебсиеллезом отмечается у детей в возрасте до 1 года. Заболевание протекает в виде диареи, менингита, бронхопневмонии, гнойно-септических воспалений. Представителями рода являются условно-патогенные виды: К. pneumonia, К. mobilis и сапрофитные виды: К.

planticola, К. terrigena.

В настоящее время для обнаружения и идентификации БГКП учитывают следующие дифференциально-диагностические признаки:

✵ характер роста на среде Эндо (так называемый лактозный тест). Учитываются колонии темно-красные, с металлическим блеском или без него;

✵ оксидазный тест. Колонии на среде Эндо исследуют на наличие оксидазы. Для дальнейшей идентификации оставляют оксидазоотрицательные колонии. Колонии с положительным оксидазным тестом, относящиеся к грамотрицательным бактериям родов Pseudomonas, Aeromonas, Vibrio, не учитываются;

✵ принадлежность к грамотрицательным бактериям. Препараты из характерных колоний окрашивают по Граму и микроскопируют;

✵ бродильная проба на среде Гисса с глюкозой для обнаружения способности бактерий ферментировать ее с образованием кислоты и газа.

Следует отметить, что бактерии группы кишечной палочки не являются идеальными представителями СПМ.

Это связано с тем, что они имеют много аналогов во внешней среде, способны в ней изменяться, размножаются в воде при незначительном содержании в ней органических веществ, неустойчивы к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Все вышеуказанные причины вынуждают искать альтернативу кишечной палочке. В 1910 г. в качестве СПМ были предложены энтерококки.

ПредыдущаяСодержаниеСледующая

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector