Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований.

  • Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований. 1 слайд Санитарная микробиология – направление медицинской микробиологии, изучающее микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и на состояние среды его обитания.Задачи санитарной микробиологии:Исследование объектов внешней среды (воздух, почва, вода) для оценки их воздействия на здоровье человека.Обследование здоровых лиц (работников пищевых, детских, лечебных учреждений) на носительство патогенных микроорганизмов.Исследование пищевых продуктов с целью их гигиенической характеристики и эпидемиологической оценки; проведение специальных анализов на наличие патогенных микробов при пищевых отравлениях.Контроль за дезинфекционными мероприятиями.
  • Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований. 2 слайд Принципы проведения санитарно- микробиологических исследованийПробы отбирают с соблюдением всех условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта. Исследования проводят быстро; допускается хранение материала в холодильнике не дольше 6 — 8 часов.Для получения объективных результатов отбирают несколько проб из разных участков объекта, а также проводят повторные отборы и анализы проб.Используют только стандартные и унифицированные методы исследования.В работе используют комплекс тестов:а) прямые – выявляют патогенные микроорганизмы,б) косвенные – указывают на загрязнение объектов окружающей среды выделениями человека и животных.Интерпретацию результатов санитарно- микробиологических исследований проводят с учетом других гигиенических показателей (химических, физических, органолептических и др.).
  • Методы санитарной микробиологииМикроскопический
Бактериологический
Биологичес... 3 слайд Методы санитарной микробиологииМикроскопическийБактериологическийБиологический (в основном для определения токсинов)МикологическиеВирусологические
  • Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований. 4 слайд Проведение санитарно- микробиологических исследований направлено на:Определение общего микробного числа (ОМЧ) исследуемого объекта;Определение и титрование санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) в исследуемом объекте;Выявление в исследуемых объектах патогенных микроорганизмов.
  • Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований. 5 слайд Общее микробное число (ОМЧ) – это общее количество микроорганизмов в единице объема или массы исследуемого объекта (в 1 мл или в 1 г). Чем выше ОМЧ объекта, тем выше возможность присутствия в нём патогенных микроорганизмов.Методы определения ОМЧ:- прямой подсчет бактерий в счетных камерах с помощью обычного или фазово-контрастного микроскопа,- количественный посев на плотные питательные среды.
  • Определение ОМЧ воздухаПроводится в закрытых помещениях
Используют:
седимента... 6 слайд Определение ОМЧ воздухаПроводится в закрытых помещенияхИспользуют:седиментационный методоткрытые чашки Петри со стерильной питательной средой расставляют в помещении. Бактерии из воздуха оседают на поверхность среды, затем чашки закрывают, инкубируют и подсчитывают количество выросших колоний.
  • Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований. 7 слайд аспирационный методИспользуют специальные аппараты, например, аппарат Кротова. Скорость протягивания воздуха в среднем 25 л/мин. ОМЧ определяют в 100 л воздуха. На пути струи воздуха помещают чашку Петри с питательной средой, в результате чего бактерии из воздуха засеваются на среду. Затем инкубируют посевы и подсчитывают число колоний.Нормы ОМЧ регламентированы для воздуха различных помещений.
  • Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований.
  • Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований. 9 слайд Санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ)- это микроорганизмы, указывающие на загрязнение внешней среды выделениями человека или животных. Присутствие СПМ в объекте внешней среды указывает на возможность наличия в этом объекте других, в т.ч. патогенных для человека, микроорганизмов, непосредственное обнаружение которых затруднено.СПМ являются постоянные обитатели естественных полостей человека или животных, которые постоянно выделяются в окружающую среду.
  • СПМ делят на 3 группы:
группа А включает обитателей кишечника человека и жив... 10 слайд СПМ делят на 3 группы:группа А включает обитателей кишечника человека и животных, их расценивают как индикаторы фекального загрязнения (эшерихии, энтерококки, протеи, клостридии и др.),группа В включает обитателей верхних дыхательных путей, их расценивают как индикаторы орального загрязнения (стрептококки, стафилококки),группа С включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде, их расценивают как индикаторы процессов самоочищения (бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, грибы, актиномицеты, синезеленые водоросли).
  • 11 слайд СПМ различных объектов внешней среды
  • 12 слайд При количественном определении СПМ результаты исследований выражаются в 2 величинах: — Индекс СПМ (например, коли-индекс)- это количество СПМ, обнаруженное в единице объема или массы исследуемого объекта. Для определения индекса СПМ используют: 1) метод мембранных фильтров,2) метод бродильных проб.- Титр СПМ (например, коли-титр)- это наименьшее количество исследуемого объекта, в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.
  • 13 слайд Сущность метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры, на которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируют при + 37°, а затем подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и проводят перерасчет на 1 л, 1 кг или 1 г в зависимости от исследуемого материала.Сущность метода бродильных проб заключается в посеве определенных объемов исследуемого субстрата на глюкозопептонную среду с индикатором и поплавком (для определения ферментации глюкозы), которые выдерживают при + 37°. Из всех помутневших пробирок делают высевы на среду Эндо с последующей идентификацией выросших колоний. Коли-титр — величина, обратная коли-индексу.
  • 14 слайд Патогенные микроорганизмы (ПМ)Обнаружение ПМ в объектах внешней среды производится:путем прямого посева на питательные средыпутем посева после предварительной концентрации микроорганизмов с помощью фильтрации, центрифугирования, осаждения коагулянтами и т.д.Идентификация ПМ производится согласно общепринятым схемам.Согласно ГОСТу: “патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в питьевой воде и пищевых продуктах”.
  • 15 слайд КлассификацияСемейство EnterobacteriobacteriaceaeРод Klebsiella включает в себя 4 вида: K.pneumoniae, K.oxytoca, K.planticola, K.terrigena.В патологии человека наибольшее значение имеют K.oxytoca и K.pneumoniae, состоящий из трех подвидов: K.pneumoniae, K. ozaenae и K.rhinoscleromatis.Относятся к V группе по Берджи (гр- мелкие палочки с закругленными концами, факультативный анаэроб).Не имеют спор, неподвижны, имеют микрокапсулу
  • 16 слайд Оппортунистические инфекции (от лат. opportunus — удобный, выгодный, и лат. infectio — заражение, также англ. opportunity — возможность) — заболевания, вызываемые патогенами (бактерии, вирусы, грибы, простейшие), которые обычно не приводят к болезни у здоровых особей (с нормальной иммунной системой). Например, оппортунистическими инфекциями заражаются лица с иммунодефицитными состояниями. Внутрибольничные инфекции (также госпитальные, нозокомиальные) — согласно определению ВОЗ, любые клинически выраженные заболевания микробного происхождения, поражающие больного в результате его госпитализации или посещения лечебного учреждения с целью лечения, а также больничный персонал в силу осуществления им деятельности, независимо от того, проявляются или не проявляются симптомы этого заболевания во время нахождения данных лиц в стационаре
  • 17 слайд К факторам внутрибольничной среды, способствующим распространению ВБИ относятся:- наличие невыявленных носителей внутрибольничных штаммов среди медперсонала и пациентов; — нарушение медперсоналом правил асептики и антисептики, личной гигиены; — несвоевременное проведение текущей и заключительной дезинфекции, нарушение режима уборки; — недостаточное оснащение ЛПУ дезинфекционными средствами; — нарушение режима дезинфекции и стерилизации медицинских инструментов, аппаратов, приборов и т. д.; — неудовлетворительное состояние пищеблоков, водоснабжения; — отсутствие фильтрационной вентиляции. Госпитальный штамм — это микроорганизм, изменившийся в результате циркуляции в отделении по своим генетическим свойствам, в результате мутаций или переноса генов (плазмид) обретший некоторые несвойственные «дикому» штамму характерные черты.Основные черты приспособления — это устойчивость к одному или нескольким антибиотикам широкого спектра действия, устойчивость в условиях внешней среды, снижение чувствительности к антисептикам. Госпитальные штаммы очень разнообразны, в каждой больнице или отделении возможно появление своего характерного штамма со свойственным только ему набором биологических свойств.
  • 18 слайд Klebsiella pneumoniae классифицируется как условно-патогенный микроб, находящийся в норме в определенных органах (например, в ЖКТ) в симбиотическом отношении с человеческим организмом, а в иных ситуациях являющийся причиной инфекционных заболеваний (например, при снижении общего и местного иммунитета). Может вызвать пневмонию, плевриты, перикардиты, гаймориты, инфекции мочевыводящих путей, мозговых оболочек, суставов, абсцессы различной локализации, пищевые токсикоинфекции и даже сепсис.
  • 19 слайд Klebsiella rhinoscleromatis вызывает склерому — гранулематозное поражение слизистой оболочки носа (риносклерома) и верхних дыхательных путей. Характерно появление плотных узлов красного, розового, бледного цвета, сливающихся в опухоль хрящевой плотности. Поражению подвергаются ноздри, мягкое нёбо, язычок укорачивается, глотка и гортань стенозируются.Klebsiella ozaenae вызывает озену — зловонный насморк, характеризующийся атрофическим процессом слизистой оболочки и костных стенок полости носа, сопровождающийся образованием секрета, засыхающего в зловонные корки, плотным слоем покрывающие слизистую оболочку. Могут поражаться глотка, гортань, трахея.
  • 20 слайд Klebsiella pneumoniae (окраска по Бурри-Гинсу)
  • 21 слайд Клебсиеллы не требовательны к питательным средам. В МПБ образуют диффузное помутнение, а на МПА растут в виде слизистых, блестящих колоний.
  • 22 слайд Принципы микробиологической диагностики клебсиелл основаны на выделении и идентификации возбудителя. Материал для исследований клебсиелл — кровь, СМЖ, гнойное отделяемое, испражнения, смывы и др. Образцы засевают на селективно-дифференциальную среду К-2 (с мочевиной, рафинозой и бромтимоловым синим). Колонии клебсиелл сочные и блестящие, имеют цвет от жёлтозеленого до голубого. Культуральные и биохимические особенности клебсиелл определяют на минимальном дифференцировочном ряду Антигенную структуру клебсиелл исследуют в РА живой культуры диагностическими К-антисыворотками. Для выявления AT применяют РСК {в качестве Аг используют суточную культуру) или реакцию О-агглютинации (Аг служит суточная бескапсульнан культура).
  • 23 слайд ЛечениеДля лечения клебсиеллезов применяются антибиотики: ампициллин, аминогликозиды, тетрациклины, левомицетин, рифаксимин, нифуроксазид и т.п., однако в последнее время широко распространились штаммы клебсиелл, резистентных к антибиотикам. Также используются бактериофаги: Бактериофаг клебсиелл пневмонии очищенный жидкий и Бактериофаг клебсиеллезный поливалентный жидкий очищенный, Пиобактериофаг (комбинированный препарат). Бактериофаги действуют избирательно, только на клебсибелл (на комплекс бактерий для комбинированных бактериофагов,), не имеют противопоказаний, но они значительно менее эффективны, чем антибиотики. При избыточном росте клебсиелл пневмонии Приказом Минздрава РФ № 231 от 9 июня 2003 г. Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» рекомендованы бактериофаги «Бактериофаг клебсиелл пневмонии», «Пиобактериофаг поливалентный очищенный жидкий» и «Бактериофаг клебсиелл поливалентный». Бактериофаг принимают 3 раза в сутки натощак за 1 час до еды.
  • 24 слайд Род Proteus относится к семейству Enterobacteriaceae и включает в себя три вида. Важную роль в патологии, особенно в качестве возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний и пищевых токсикоинфекций, играют два вида: P. vulgaris и P. mirabilis.Все представители рода Proteus – грамотрицательные палочки с закругленными концами, размером 0,4 – 0,6 х 1 – 3 мкм, спор и капсул не образуют. Склонны к полиморфизму, наблюдаются кокковидные и нитевидные формы. Иногда встречаются и неподвижные варианты, лишенные жгутиков (О-форма). Факультативные анаэробы. Температурный оптимум 37 °С, рН 7,2 – 7,4; температурные пределы роста от 20 до 38 «С.
  • 26 слайд Proteus vulgaris (окраска по Граму)
  • 27 слайд Культуральные свойстваНетребователен к питательным средам, хорошо растет на простых питательных средах.При посеве материала, содержащего палочку протея, в конденсационную воду свежескошенного агара (метод Шукевича) через несколько часов Н-форма (жгутиковая) протея дает характерный ползучий рост в виде нежной вуали голубовато-дымчатого цвета с образованием дочерних отростков (феномен роения). О-форма протея (без жгутиков) дает на МПА крупные с ровными краями колонии. На МПБ отмечается диффузное помутнение среды с густым белым осадком на дне и нежной пленкой на поверхности. Растет на определенных питательных средах, содержащих желчные кислоты – среда Плоскирева. На ней протей дает прозрачные, нежные, блестящие колонии с характерным запахом, слегка щелочащие среду, которая окрашивается вокруг них в желтоватый цвет.
  • 28 слайд Бактерии рода Proteus (P. vulgaris, P. mirabilis) классифицируется как условно-патогенные микробы, находящиеся в норме в определенных органах (например, в ЖКТ) в симбиотическом отношении с человеческим организмом, а в иных ситуациях являющийся причиной инфекционных заболеваний (например, при снижении общего и местного иммунитета). Могут вызвать острые кишечные инфекции у детей, инфекции мочевыводящих путей, раневые инфекции, пищевые токсикоинфекции, менингит, сепсис.
  • 29 слайд Санитарно-показательное значение бактерий рода Proteus. Микроорганизмы этой группы, в частности вид Pr. vulgaris, в небольшом количестве встречается как в кишечнике человека и животного, так и во внешней среде. Он является возбудителем гнилостных процессов в природе. Вид Pr. mirabilis — обитатель кишечника человека и животных. Протеи считаются санитарно-показательными бактериями. Количество обнаруживаемых proteus mirabilis рассматривают как показатель фекального загрязнения, а proteus vulgaris —  как показатель загрязнения объекта органическими веществами. Обнаружение протея в пищевых продуктах свидетельствует о гнилостном процессе. Степень обсеменения мясных продуктов (мяса, колбас и др.) бактериями рода Proteus устанавливают по титру протея.
  • 30 слайд ЛечениеПриказом Минздрава РФ № 231 от 9.06.2003 г. об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» при избыточном росте протея (p. mirabilis, p. vulgaris) рекомендованы бактериофаги «Интести-бактериофаг жидкий», «Бактериофаг протейный жидкий», «Бактериофаг колипротейный жидкий», «Колипротеофаг в таблетках», «Пиобактериофаг комбинированный жидкий», «Пиополифаг в таблетках», «Пиобактериофаг поливалентный очищенный жидкий». Антибиотики рекомендовны после проведения антибиотикограммы
Читайте также:  Классификация вирусных вакцин. Типы вирусных вакцин.

Теоретические и практические основы санитарной микробиологии — международный журнал экспериментального образования (научный журнал)

1

Нуралиев Н.А. 1, 2

Сагдуллаева Б.О. 1, 2

Курбанова С.Ю.

1, 2
1 НИИ санитарии, гигиены и профессиональных заболеваний МЗ РУз2 Ташкентская медицинская академия

Данное учебно-методическое пособие предназначено для профессорско-преподавательского состава и студентов II–III курсов медико-профилактических факультетов медицинских высших образовательных учреждений.

Учебно-методическое пособие освещает все стороны санитарной микробиологии и составлено на основании типовой программы по предмету микробиология, вирусология и иммунология. В нем приведены особенности санитарно-микробиологического исследования воды, почвы, воздуха, пищевых продуктов, лечебно-профилактических учреждений.

Известно, что санитарная микробиология – раздел медицинской микробиологии, изучающий микроорганизмы, содержащиеся в окружающей среде и способные оказывать неблагоприятное воздействие на состояние здоровья человека.

Она разрабатывает микробиологические показатели гигиенического нормирования, методы контроля над эффективностью обеззараживания объектов окружающей среды, а также выявляет в объектах окружающей среды патогенные, условно-патогенные и санитарно-показательные микроорганизмы (СПМ).

Обнаружение патогенных микроорганизмов позволяет дать оценку эпидемической ситуации и принять соответствующие меры по борьбе и профилактике инфекционных заболеваний.

  • Основные задачи санитарной микробиологии: изучение биоценозов, в которых существуют микроорганизмы, патогенные для человека, и изучение его места в их накоплении; разработка методов микробиологических исследований внешней среды, микробиологических нормативов и мероприятий по оздоровлению объектов окружающей среды.
  • При проведении санитарно-микробиологических исследований следует придерживаться следующих основных принципов: пробы следует отбирать с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта; для получения объективных результатов следует отбирать несколько проб из разных участков объекта; более адекватные результаты можно получить проведением повторных отборов и анализов проб; при проведении исследований следует использовать только стандартные и унифицированные методы исследования; в работе необходимо использовать комплекс тестов – прямых и косвенных; интерпретацию результатов следует проводить с учетом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических и других).
  • Базовые санитарно-микробиологические методы направлены на определение общей микробной обсемененности (общее микробное число), определение СПМ, выявление в исследуемых объектах патогенных микроорганизмов и их метаболитов, определение степени недоброкачественности продуктов, вызванной деятельностью микроорганизмов.
  • Практическая санитарная микробиология использует 2 основных метода оценки санитарно-эпидемического состояния внешней среды: прямое обнаружение патогенных микроорганизмов и выявление косвенных признаков пребывания патогенных микроорганизмов во внешней среде.

СПМ используют в основном для косвенного определения возможного присутствия в объектах окружающей среды, в том числе продуктах питания, патогенных микроорганизмов, они непосредственно могут свидетельствовать о загрязнении объекта выделениями человека и животных, содержащими микроорганизмы.

В данном учебно-методическом пособии подробно дана информация о СПМ, методы определения, их подробные характеристики, отдельно описаны основные группы СПМ (бактерии группы кишечной палочки (БГКП), энтерококки, протеи, сальмонеллы, C.perfringens, термофильные бактерии и бактериофаги энтеробактерий – колифаги).

В продуктах питания регистрируют количество кишечной палочки, БГКП, энтерококка, золотистого стафилококка, протея.

Кроме того, подробно описаны санитарно-микробиологические исследования пищевых продуктов.

В продуктах питания различают специфическую и неспецифическую микрофлору. Специфическая микрофлора пищевых продуктов представлена микроорганизмами, используемыми для приготовления различных продуктов и являющихся обязательным звеном в технологии их приготовления.

Санитарный бактериолог должен знать специфическую микрофлору для того, чтобы уметь отличить ее от неспецифической, загрязняющей продукты. Неспецифическая микрофлора пищевых продуктов включает микроорганизмы, случайно попадающие на пищевые продукты из окружающей среды.

Ее составляют сапрофиты, патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, а также виды, вызывающие порчу пищевых продуктов.

Наиболее часто изучают 2 основных показателя – наличие, степень обсемененности продуктов микроорганизмами и наличие патогенных микроорганизмов. Выявление патогенных микроорганизмов более точное, но и более трудоемкое, поэтому его используют лишь при первичной переработке мяса, а также при проведении некоторых анализов молока, мясных продуктов и контроле консервного производства.

Исследование преследует 3 цели: контроль качества сырья, используемого в производстве пищевых продуктов и оценка санитарно-гигиенических условий их изготовления; контроль режимов хранения пищевых продуктов и оценка санитарно-гигиенических условий их транспортировки, реализации; контроль над обеспечением эпидемической безопасности пищевых продуктов.

Читайте также:  Свинка. Эпидемический паротит. Вирус эпидемического паротита. Эпидемиология эпидемического паротита.

При проведении исследований используют качественные и количественные методы. Качественными методами определяют характер технологической микрофлоры и возбудителей порчи продуктов.

Количественными методами в сочетании с другими показателями определяют сроки хранения и реализации продуктов. Общее количество микроорганизмов исследуют в 1 грамме или 1 см3 продукта методом кратных разведений.

Конкретные виды определяют с использованием специфичных тестов.

  1. На обсемененность пищевых продуктов влияют некоторые особенности технологии их производства и хранения: механическая переработка увеличивает вероятность обсемененности и способствует гомогенному распространению микроорганизмов по всему продукту; химическая обработка способствует резкому уменьшению числа микроорганизмов; на рост микроорганизмов влияет температурный режим их производства и хранения.
  2. Гигиенические нормативы по микробиологическим показателям включают контроль над 4 группами микроорганизмов:
  3. – СПМ, к которым относят мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы (МАФАМ) и БГКП. МАФАМ дают рост после инкубирования при 30 °С в течение 72 часов при глубинном методе посева;

– условно-патогенные микроорганизмы, к которым относят E.coli, S.aueus, B.cereus, протеи и сульфит редуцирующие клостридии;

– патогенные микроорганизмы, в первую очередь сальмонеллы;

– микроорганизмы, вызывающие порчу продуктов, в первую очередь дрожжи и плесневые грибы.

В завершении учебно-методического пособия приведены новые педагогические технологии, применяемые на занятиях по теме «Теоретические и практические основы санитарной микробиологии»: игры «Тур по галерее», «Кто больше? Кто быстрее?»; органайзер «Ступень»; тесты I, II и III уровня сложности, ситуационные задачи по теме, 3 практические работы для выполнения во время занятий под реководством преподавателя и темы для самостоятельной работы студентов.

Библиографическая ссылка

Сагдуллаева Б.О., Курбанова С.Ю., Нуралиев Н.А. ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ САНИТАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ // Международный журнал экспериментального образования. – 2016. – № 6-1. – С. 101-103;
URL: https://expeducation.ru/ru/article/view?id=10152 (дата обращения: 23.04.2022). Санитарная микробиология. Принципы санитарно-микробиологических исследований.

Принципы санитарно-микробиологических исследований — Информационный портал о пищевом и кондитерском производстве

Принципы санитарно-микробиологических исследований

Принципы, которыми руководствуются микробиологи при санитарно-микробиологических исследованиях, исходят из основной задачи, разрешаемой ими: определение возможности присутствия в исследуемом объекте патогенных микроорганизмов или токсинов, образующихся при их жизнедеятельности, а также обнаружение и оценка степени порчи изучаемого объекта (особенно пищевых продуктов). Эти принципы можно охарактеризовать следующим образом:

1. Правильное взятие проб для санитарно- микробиологических исследований с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта, и правил стерильности. Ошибки, допущенные при взятии проб, приводят к получению неправильных результатов, и исправить их уже нельзя.

При упаковке и транспортировке проб необходимо создавать такие условия, чтобы не допустить гибели или размножения исходной микрофлоры в исследуемом объекте. Сохранение материала допускается только в условиях холодильника и не более 6-8 ч.

Каждая проба сопровождается документом, в котором указывают название исследуемого материала, номер пробы, время, место взятия, характеристику объекта, подпись лица, взявшего пробу.

2. Проведение серийных анализов. Этот принцип исходит из особенностей исследуемых объектов.

Как правило, вода, почва, воздух и другие объекты содержат разнообразные микроорганизмы, распределение которых неравномерно, к тому же микроорганизмы, находясь в биоценотических отношениях, подвергаются взаимному влиянию, что ведет к гибели одних и активному размножению других.

Поэтому берут серию проб из разных участков исследуемого объекта, по возможности большее количество проб, что позволит получить более достоверную характеристику объекта. Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала — среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.

3. Повторное взятие проб. Данная операция необходима для получения сопоставимых результатов. Это связано прежде всего с тем, что исследуемые объекты весьма динамичны (вода, воздух и т.п.), сменяемость микрофлоры в них во времени и пространстве очень велика.

Патогенные микроорганизмы попадают в окружающую среду, как правило, в небольшом количестве, к тому же и распределяются в ней неравномерно. Поэтому повторное взятие проб позволяет более точно определить биологическую контаминацию объектов окружающей среды.

4. Применение стандартных методов исследования, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями, что дает возможность в различных лабораториях получать сравнимые результаты.

5. Использование одновременно комплекса тестов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики. Применяют прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов и косвенный, позволяющий судить о загрязнении объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени.

К косвенным тестам относится определение общего микробного числа, количественного и качественного состава санитарно- показательных микроорганизмов.

Применение косвенных методов оценки потенциальной возможности загрязнения объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, использование обходного пути для изучения обсемененности материалов, является особенностью санитарно- микробиологических исследований.

6. Проведение оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов при использовании санитарно-микробиологических тестов с учетом других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т. д.).

Всегда необходимо учитывать, что развитие микробов тесно связано с другими факторами окружающей среды, которые могут оказывать как благоприятное, так и неблагоприятное влияние, усиливая или ограничивая возможности размножения патогенных микроорганизмов и накопления их токсинов.

Следует учитывать и то, что почти любой объект исследования имеет собственную микрофлору, которая вызывает специфические биохимические процессы, и те изменения в объектах, которые обусловлены посторонними микроорганизмами.

Грамотный микробиолог должен хорошо знать ход биохимических процессов, происходящий в норме в исследуемом объекте (почва, вода), технологию производства, уметь определить характер вредного воздействия попавших микробов, возможные последствия такого воздействия и рекомендовать конкретные мероприятия по их предупреждению.

7. Ответственность специалистов за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов.

При санитарно-микробиологическом исследовании выявляется степень порчи пищевых продуктов (или других объектов), пригодность их к употреблению, возможная опасность для здоровья населения. Запрещение использовать пищевые продукты, воду водоемов и др.

, закрытие предприятия из-за санитарного неблагополучия наносят определенный экономический ущерб. Ответственность за такое решение несет врач санитарной службы.

В целях предотвращения попадания и развития патогенных микроорганизмов на пищевые продукты на предприятиях пищевой и перерабатывающей промышленности, общественного питания постоянно проводят санитарно- микробиологический контроль всех объектов, контактирующих с продукцией — воздуха, воды, оборудования, тары, упаковочных материалов, рук обслуживающего персонала, а также непосредственных источников обсеменения продукции — сырья, вспомогательных материалов.

Общая характеристика методов саиитарио-микробиологических исследований

При организации планового санитарно-микробиологического контроля на предприятиях пищевого профиля используют, прежде всего, косвенные методы определения присутствия патогенных микроорганизмов. При этом для оценки санитарного состояния объектов окружающей среды используют количественные и качественные микробиологические показатели.

Количественные показатели характеризуют степень обсемененности данного объекта микроорганизмами, т.е общее микробное число в единице веса (объема) — обычно в 1г (1см3). Существует два метода определения микробной обсемененности: метод прямого подсчета и метод количественного посева проб исследуемого объекта или его разведений на питательные среды.

Прямой подсчет микроорганизмов в исследуемом объекте проводится под микроскопом в счетных камерах Горяева или в камерах, специально сконструированных для счета бактерий.

Предварительно пробу исследуемого объекта подвергают обработке, чтобы получить гомогенную взвесь. Для лучшего учета бактерий в исследуемую суспензию добавляют краситель, чаще всего эритрозин.

Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь.

Метод прямого подсчета применяется в экстренных случаях, когда необходимо срочно дать ответ о количественном содержании бактерий, например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и т. п.

Читайте также:  Грыжи: Приобретенная косая паховая грыжа. Классификация паховых грыж.

Метод прямого подсчета кажется простым и удобным, однако он имеет ряд существенных недостатков, снижающих его ценность и из-за этого довольно редко используется.

Существенным недостатком его является невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата, не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах.

И наконец, метод прямого подсчета не дает возможности отличить живые микроорганизмы от погибших. Создание автоматических приборов для регистрации общей микробной обсемененности, таких как фотоэлектрические и электронные счетчики, делает метод прямого подсчета более перспективным.

Метод количественного посева исследуемого материала на плотные питательные среды применяется наиболее часто.

Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри (начиная с большего разведения, каждое разведение отдельной пипеткой) и заливают расплавленным и остуженным до 45—50 °С мясопептонным агаром — МПА (глубинный посев). Для равномерного смешивания чашки слегка двигают по поверхности стола и после застывания агара помещают в термостат.

После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведения высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. Если посевы выращивали при 30°С, то показателем общей обсемененности исследуемого материала является КМАФАнМ (или МАФАнМ).

КМАФАнМ не определяют только у продуктов, при производстве которых используют заквасочные культуры.

В зависимости от вида продукта и способа его производства этот показатель может свидетельствовать об общем санитарно- эпидемиологическом состоянии продукта, свежести или начальной стадии порчи внешне доброкачественного продукта, хотя во многих случаях метод считается приблизительным из-за невозможности выявить все микроорганизмы в объекте на одной питательной среде, т.к. их физиолого-биохимические свойства различны. Кроме того, режим инкубации также не соответствует требованиям всех микроорганизмов в ассоциации, не дают роста микробы, находящиеся в комочках исследуемого объекта, а если и наблюдается рост колоний, то, возможно, не из одной особи. Наконец, часть микроорганизмов теряет способность к размножению в силу антагонизма, конкуренции и других причин. Несмотря на недостатки этого показателя, для многих продуктов КМАФАнМ нормируется.

В обязательном порядке контролируются санитарно- показательные микроорганизмы, обнаружение которых также является косвенным показателем биологической контаминации исследуемого материала патогенными микроорганизмами. Превышение нормативов по допустимому содержанию санитарно-показательной микрофлоры свидетельствует о возможном присутствии тех или иных патогенных микробов.

Для количественной характеристики применяются две группы методик: определения титра и индекса.

Титр — это тот наименьший объем исследуемого материала (в миллилитрах) или весовое количество (в граммах), в котором обнаружена хоть одна особь санитарно-показательного микроорганизма.

Например, для определения титра кишечной палочки в воде засевают несколько разных объемов (от 100 до 0,1 или до 0,01 мл в зависимости от предполагаемой степени загрязнения объекта) в жидкие сахарные питательные среды. Размножение в них кишечных палочек регистрируется по наличию брожения-расщепления углевода до кислоты и газа.

Пересев на плотные дифференциально-диагностические среды и идентификация выросших колоний позволяют выяснить те объемы, в которых присутствовала кишечная палочка. Затем с помощью специальных таблиц, определяют ко ли-титр. Набор таблиц входит в ГОСТ.

Индекс — количество особей санитарно-показательного микроба, обнаруженного в определенном объеме (количестве) исследуемого объекта. Для воды, молока, других жидких продуктов — в 1 л, для почвы, и пищевых продуктов — в 1 г. Индекс — величина, обратная титру, поэтому перерасчет титра в индекс и обратно можно производить по формуле:

  • 1000 . 1000 (1)
  • титр =———- ;индекс =——-
  • индекс титр
  • Соответственно для почвы и пищевых продуктов:
  • титр =———— ; индекс = —-—. (2)
  • индекс титр
  • Индекс чаще определяют путем применения мембранных фильтров или посева различных разведений исследуемых субстратов на питательные среды.

Выбор того или иного санитарно-показательного микроорганизма зависит от исследуемого объекта и конкретной задачи. Соответственно говорят, например, о титре или индексе протея или маслянокислых бактерий и т.п.

Нередко (и во многих ГОСТах это узаконено) одновременно исследуется и ведется количественный учет двух или более санитарно-показательных микроорганизмов.

Качественные показатели указывают на отсутствие (присутствие) микробов конкретных видов в определенной массе продукта.

Прямое выявление в пищевых продуктах патогенных или условно-патогенных микробов и их ядов проводится в соответствии с существующими нормативными документами. Обычно проверяют наличие микроорганизмов p.p.Salmonella, Staphylococcus, Cl.

botulinum и их токсинов, Cl.perfringens, Bac.cereus и др. Согласно требованиям ГОСТов патогенные микроорганизмы и их токсины должны отсутствовать в определенном объеме (массе) материала, подвергнутого исследованиям (25, 50 г и т.д.).

  1. Санитарно-микробиологическое исследование объекта на присутствие патогенных микроорганизмов проводится работниками СЭС в плановом порядке, а также внепланово — по эпидемическим показаниям. Для определения патогенных микроорганизмов могут быть использованы следующие методы :
  2. • прямой посев исследуемого материала в питательные среды;
  3. • предварительная концентрация патогенных микроорганизмов пропусканием исследуемого объекта (жидкой консистенции) через мембранные фильтры или посевом в среды накопления;
  4. • обнаружение патогенных микроорганизмов методом заражения чувствительных животных (биопроба);
  5. • применение ускоренных методов: серологических, люминесцентно-серологических и радиоизотопного.

Для иллюстрации последней группы методов ниже представлена общая характеристика ускоренных методов исследования воды. Наибольшее применение получил метод люминесцентно-серологический, который в настоящее время рекомендуется для обнаружения в воде микроорганизмовp.p.Escherichia, Salmonella, Shigella, Vibrio и др.

Метод иммунофлюоресценции основан на способности антител, предварительно обработанных различными флюорохромами (флюоресцеина изотиоцианат, родамина сульфохлорид, родамина сульфофторид и др.), адсорбироваться на поверхности микробной клетки и вызывать ее свечение. Метод флюоресцирующих антител применяется в трех модификациях: прямой, непрямой и непрямой метод с добавлением комплемента.

При прямом методе_капшо исследуемой воды, в которой предполагается наличие патогенных бактерий, помещают на предметное стекло, обрабатывают специфической к искомому микроорганизму люминесцирующей сывороткой и наблюдают под люминесцентным микроскопом. На темном фоне препарата при положительном результате видна яркая флюоресценция по периферии клеток.

При непрямом методе обработка препаратов происходит в два этапа: специфической иммунной сывороткой выявляют присутствие соответствующих бактерий, на следующем этапе обнаруживают образовавшийся комплекс обработкой меченой иммунной сывороткой, содержащей антитела к глобулинам специфической сыворотки.

Этот метод имеет существенное преимущество перед прямым, так как для выявления любых бактерий используется одна меченая сыворотка против антител — глобулинов, содержащихся в специфической сыворотке (как правило, глобулинов кролика).

При непрямом методе с добавлением комплемента препарат обрабатывают в 3 этапа: сначала специфической к искомому микробу иммунной сывороткой, затем — комплементом, который адсорбируется на комплексе антиген — антитело, и, наконец, иммунной противокомплементарной флюоресцирующей сывороткой.

Для повышения эффективности метода следует предварительно концентрировать бактерии в исследуемой воде на мембранных фильтрах центрифугированием или посевом в среды обогащения. В этом случае люминесцентно- серологическим методом удается обнаружить энтеробактерии при наличии в пробах воды даже единичных клеток в 1 мл.

Метод флюоресцирующих антител рекомендуется применять при индикации в воде возбудителей туляремии, чумы, бацилл сибирской язвы.

Однако люминесцентно-серологический метод является только сигнальным методом индикации патогенных бактерий в воде, и при положительном его результате должно проводиться тщательное бактериологическое исследование воды.

Для ускоренного обнаружения БГКП в воде был предложен радиоизотопный метод (Корш J1.E., 1978). Принцип метода заключается в определении количества БГКП по количеству метаболической двуокиси углерода, выделяемой при жизнедеятельности бактерий из элективных сред, меченных 14С. Результат можно получить через 5-6 ч.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector