Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха.

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха. Микрофлора воздуха.

Микрофлора воздуха закрытых помещений o более однообразна и относительно стабильна o Среди микроорганизмов доминируют обитатели носоглотки человека, o Основной источник загрязнения воздуха патогенными видами — бактерионосители.

Микрофлора воздуха закрытых помещений o Уровень микробного загрязнения зависит главным образом от: n плотности заселения, n активности движения людей, n санитарного состояния помещения, в том числе пылевой загрязнённости, n вентиляции, частоты проветривания, n способа уборки, n степени освещённости и других условий. o Так, регулярные проветривания и влажная уборка помещений снижает обсеменённость воздуха в 30 раз (по сравнению с контрольными помещениями). Самоочищения воздуха закрытых помещений не происходит.

Патогенные микроорганизмы попадают в воздух: o от больных людей, o от животных, o от бактерионосителей. 13

Микрофлору воздуха условно разделяют на: o резидентную (более часто обнаруживаемую), o временную, менее стойкую к воздействию различных факторов (обнаруживают спорадически). Наибольшее количество микробов содержится в приземных слоях атмосферы. 14

Постоянная микрофлора воздуха формируется за счёт почвенных микроорганизмов. В её состав, как правило, входят: o Micrococcus roseus, M. flavus, M. candicans, o Sarcina flava, S. alba, S. rosea, o Bacillus subtilis, B. mycoides, B. mesentericus, o виды Actinomyces, o Penicillium, Aspergillus, Mucor и др. 15

Временная микрофлора воздуха формируется преимущественно: o за счёт микроорганизмов почвы, o за счёт видов, поступающих с поверхности водоёмов. 16

В атмосферном воздухе на микроорганизмы действуют: o o солнечные лучи, колебания температуры, изменения скорости и направления ветра, атмосферные осадки и т. д. Поэтому микрофлора воздуха динамична и подвергается непрерывному обновлению. 17

Контаминация воздуха патогенными микроорганизмами o происходит в основном капельным путём в составе аэрозоля, образующегося при разговоре, кашле, чихании; o со слущивающимся эпителием кожных покровов, с пылью загрязнённого постельного белья, заражённой почвы 18

Аэрозоль коллоидная система, состоящая из: o воздуха, o капелек жидкости или твёрдых частиц, включающих различные микроорганизмы. Размер аэрозольных частиц может быть различным (от 10 -100 до 2000 нм). При чихании может образовываться до 40 000 капель. 19

Фазы аэрозоля o капельная фаза, o пылевая фаза, o капельные ядрышки. Фаза аэрозоля зависит от: o размера капель, o их электрического заряда, o скорости движения воздуха. 20

Капельная фаза o Представлена мелкими каплями, длительно сохраняющимися в воздухе и испаряющимися до оседания. 21

Капельная (крупноядерная фаза) состоит из бактериальных клеток, окружённых водно-солевой оболочкой. Диаметр частиц около 0, 1 мм и более. Частицы оседают довольно быстро: длительность пребывания в воздухе составляет несколько секунд, а скорость перемещения — в среднем 30 см/с.

Пылевая фаза (Мелкоядерная фаза) o Представлена крупными, быстро оседающими и испаряющимися каплями; o В результате образуется пыль, способная подниматься в воздушную среду. 23

o образуется при высыхании частиц первой фазы и состоит из бактериальных клеток, сохранивших только химически связанную воду на своей поверхности и свободную воду внутри клеток.

o В этой фазе частицы имеют наименьшие размеры, легко перемещаются потоками воздуха, длительное время находятся в нём во взвешенном состоянии.

o Это наиболее устойчивая фаза, так как диаметр большинства частиц не превышает 0, 05 мм, а скорость оседания частиц составляет, в среднем, 0, 013 см/с. При этом скорость их передвижения превышает 30 см/с, поэтому они могут рассеиваться на большие расстояния.

Эта фаза представляет наибольшую эпидемиологическую опасность, так как в её составе распространяется большинство возбудителей воздушно-капельных инфекций, особенно малоустойчивых к внешним воздействиям (например, возбудитель коклюша).

Капельные ядрышки (Фаза «бактериальной пыли» ) o Мелкие капельки аэрозоля (до 100 нм), высыхая, остаются в воздухе во взвешенном состоянии и образуют устойчивую аэродисперсную систему. o В них частично сохраняется влага, поддерживающая жизнеспособность микроорганизмов. Микробы в составе капельных ядрышек могут переноситься на значительные расстояния. 25

o В зависимости от размера частиц и скорости воздушных течений, скорость их перемещения находится в пределах 0, 5 -30 см/с.

o Вследствие длительного пребывания во взвешенном состоянии и способности частиц проникать в дистальные отделы лёгких, мелкодисперсная «бактериальная пыль также представляет эпидемиологическую опасность.

o Эта фаза бактериального аэрозоля преобладает в воздухе жилых помещений и с ней рассеиваются патогенные микроорганизмы, устойчивые к высушиванию (микобактерии, клостридии, стафилококки, стрептококки, грибы).

o Наибольшую опасность для заражения представляют микроорганизмы в мелких частицах (до 100 нм), способные проникать глубоко в дистальные отделы лёгких. 27

o Здоровый человек при каждом акте чихания выделяет в воздух 10000— 20000 микробных тел, а больной — во много раз больше. o Эти мельчайшие капельки могут часами удерживаться в воздухе во взвешенном состоянии, образуя стойкие аэрозоли. 28

Воздушно-капельным путем происходит заражение многими острыми респираторными заболеваниями, в том числе: o гриппом, o корью, o коклюшем, o дифтерией, o туберкулезом легких и т. д. 29

Пылевой путь o Находящиеся в выделениях больных (мокроте, слизи и т. п. ) микроорганизмы окружены белковым субстратом; o Когда такие капли высыхают, они превращаются в «бактериальную пыль» (внутри белкового субстрата сохраняются и выживают многие патогенные бактерии). 30

Пылевой путь o Частицы бактериальной пыли обычно имеют диаметр от 1 до 100 мкм. o У частиц с диаметром более 100 мкм сила тяжести превышает сопротивление воздуха и они быстро оседают. o Скорость переноса бактериальной пыли зависит от интенсивности сил воздушных перемещений. 31

Пылевой путь играет особенно важную роль в эпидемиологии: o туберкулеза, o дифтерии, o туляремии и других заболеваний. 32

Количество микробов в воздухе o варьирует в широком диапазоне — от нескольких бактерий до десятков тысяч в 1 м 3. o В 1 г пыли может содержаться до 1 млн бактерий. 33

Санитарно-микробиологические исследования воздуха Основные задачи: o гигиеническая и эпидемиологическая оценка воздушной среды, o разработка комплекса мероприятий, направленных на профилактику аэрогенной передачи возбудителей инфекционных болезней. 34

o В связи с развитием биотехнологической промышленности, использующей различные микроорганизмы-продуценты БАВ, существенно возрос риск выброса в атмосферу больших концентраций микробов, в том числе с изменённым генотипом. o Технология производства некоторых веществ включает периодический выпуск микроорганизмов. Высокая актуальность контроля за микрофлорой атмосферного воздуха и обеззараживания выбросов биотехнологических предприятий

При оценке санитарного состояния закрытых помещений определяют: o ОМЧ, o наличие СПМ (стафилококков, альфа- и бетагемолитических стрептококков, являющихся показателями контаминации микрофлорой носоглотки человека). 36

Методы исследования микрофлоры воздуха Седиментационный метод применяется обычно для качественной характеристики микробного загрязнения воздуха (на чашку Петри в течение 5 мин оседают частицы биологического аэрозоля из 10 л воздуха) o чашки Петри с элективными средами без крышек помещают на горизонтальные поверхности и выдерживают установленное время: o 10— 30 мин чашки с МПА для определения ОМЧ, o 15 мин чашки с ЖСА для выявления стафилококков, o до 2 ч — для выделения НГОБ. o В месте забора используют не менее 2 чашек с одной питательной средой. После экспозиции чашки помещают в термостат при 37± 1°С в течение 24± 2 ч. После инкубации проводят учет количества колоний выросших микроорганизмов и при необходимости идентификацию микроорганизмов до рода и вида. o 37

Методы исследования микрофлоры воздуха o Аспирационный метод — наиболее точный метод по сравнению с седиментационным. o Для выбора проб воздуха пользуются пробоотборными устройствами (пробоотборниками). o Они обеспечивают отбор проб биологического аэрозоля с величиной частиц диаметром до 1, 4 мкм на питательную среду. 38

Типы пробоотборников o Импакторы — приборы, в которых происходит принудительное осаждение микроорганизмов из прокачиваемого через прибор воздуха на поверхность плотной питательной среды (прибор Кротова, ПАБ-1, ПАБ-2 и др.

). o Импинджеры — группа приборов, в которых воздух проходит через жидкость (питательную среду, стерильную воду, физиологический раствор), в результате чего микроорганизмы задерживаются в ней и могут быть обнаружены.

39

Аспирационный метод o o o Объем исследуемого воздуха составляет от 50 до 1000 л при скорости прохождения до 250 л/мин. Отбор проб воздуха в помещениях стационара производят на уровне дыхания лежащего больного или на высоте рабочего стола. Для определения общего количества бактерий в 1 м воздуха отбор производят на МПА.

Для определения золотистого стафилококка используют ЖСА Для определения плесневых и дрожжевых грибов — среду Сабуро. После отбора проб чашки термостатируют при 37± 1°С в течение 24± 2 ч, посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре 20— 22°С в течение 3— 4 сут.

После инкубации проводят учет количества колоний выросших микроорганизмов. 40

Пробоотборники воздуха микробиологические 41

Фильтрационный метод o Используются мембранные фильтры из нитроцеллюлозы или ацетата целлюлозы.

o При отборе пробы, проходя через фильтр, воздух вызывает его электризацию, поэтому улавливание микроорганизмов происходит только в самом поверхностном слое фильтра толщиной около 0, 3 мкм.

o Это не только обеспечивает высокую эффективность улавливания, но и позволяет элюировать (десорбировать) задержанные частицы, бактерии и вирусы для дальнейшего исследования 42

СПМ воздуха o Общее количество микроорганизмов воздуха (общее микробное число – ОМЧ). o Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) o Грамотрицательные бактерии. При исследовании воздуха ЛПУ дополнительно рекомендуется определять принадлежность выявленных микроорганизмов к родам Escherichia, Pseudomonas, Proteus, Klebsiella, Serratia, Enterobacter. 43

СПМ воздуха o Гемолитическая микрофлора – количество микроорганизмов, образующих на 5% кровяном агаре в течение 24 ч. при 37°С колонии, окруженные зонами альфа- или бета-гемолиза. Основную массу гемолитической микрофлоры воздуха составляют гемолитические стрептококки.

o Грибы (дрожжеподобные и плесневые) – количество дрожжей и плесневых грибов, вырастающих на питательном агаре или на агаре Сабуро за 96 ч. инкубации при 22 — 28°С. o По эпидемиологическим или специальным показаниям в воздухе ЛПУ определяют наличие и количество патогенных микроорганизмов (Salmonella spp. , Mycobacterium spp.

), а также вирусную (чаще энтеровирусную) контаминацию. 44

Воздух в ЛПО o Большое значение имеет чистота воздуха в операционных, реанимационных и перевязочных отделениях хирургических стационаров. o Общее количество микробов в операционной до операции не должно превышать 500 в 1 м 3, а после операции — 1000 в 1 м 3. 45

Исследование воздуха в ЛПО o проводят один раз в квартал при текущем санитарном надзоре центром Государственного санитарноэпидемиологического надзора; o один раз в месяц бактериологическими лабораториями больниц и по эпидемиологическим показаниям.

o В системе гигиенических и противоэпидемических мероприятий при текущем санитарном надзоре определяют количество СПМ в 1 м 3 воздуха. o При текущем надзоре к СПМ относят золотистый стафилококк, стрептококки, грамотрицательные бактерии и грибы (в аптеках).

Читайте также:  Микразим - инструкция по применению, аналоги, отзывы и формы выпуска (капсулы или таблетки 10 000 ед, 25 000 ед и 40 000 ед) ферментного лекарства для лечения хронического панкреатита, муковисцидоза у взрослых, детей и при беременности

o ОМЧ— нормируемый, но всё-таки относительный показатель.

Бактериологические показатели, рекомендуемые для санитарногигиенической оценки воздуха ЛПО Допустимые показатели Наименование объекта Операционные Условия До операции После операции содержание микробное число в 1 м 3 патогенных стафилококков патогенных стрептококков До 500 До 1000 Не должно быть До 750 Не должно быть До 1500 Не должно быть Послеродовые палаты До 2000 До 16 суммарно Палаты новорожденных До 1500 До 12 суммарно До 750 До 3500 До 5000 Не должно быть До 24 До 52 Послеоперационн ые платы, отделение реанимации Родильный дом, родильные залы Перевязочные, предоперационные палаты При поступлении рожениц и приеме родов До начала работы Летом Зимой Не должно быть 47 До 16 До 36

В воздухе больничных помещений o доминируют золотистый стафилококк и стрептококки. Соотношение микроорганизмов составляет в среднем 70 и 30% соответственно. При этом в 1 м 3 воздуха операционных залов, послеоперационных палат, перевязочных, отделениях реанимации, родильных залов они должны отсутствовать.

o В связи с ростом частоты заболеваний, вызываемых грамотрицательными бактериями, в нормативы включено определение их количества в 1 м 3 воздуха помещений ЛПО.

Воздух аптечных помещений o из-за наличия антимикробных препаратов могут быстро погибать бактерии, но сохраняться грибы, поэтому их обязательно необходимо выявлять при исследовании воздуха аптек.

Дополнительные критерии o Показатель запылённости и отсутствия влажной уборки — присутствие спорообразующих палочек o Показатель повышенной влажности — плесневые грибы. o Показатель плохой освещённости — отсутствие пигментообразующих форм бактерий (иногда этот показатель может быть определён по заданию фтизиатров).

Способы очистки и обеззараживания воздуха o Физические o химические

Физические способы очистки и обеззараживания воздуха o вентиляция, o фильтрация, o ультрафиолетовое облучение.

Вентиляция — высокоэффективный способ снижения микробного обсеменения воздуха. Загрязненный воздух удаляется из помещений, а на его место поступает более чистый воздух из атмосферы. Фильтрация повышает эффективность вентиляции. Фильтры, пропитанные специальной пылесвязывающей жидкостью, задерживают до 90— 95% микробов и частиц пыли, содержащихся в воздухе.

Свет губительно действует на микроорганизмы. Наибольшей бактерицидностью обладают лучи с короткой волной и сильным фотохимическим действием (ультрафиолетовая часть спектра).

Высокое бактерицидное действие УФ широко используют для обеззараживания воздуха производственных цехов, холодильных камер на предприятиях мясной, молочной, биологической и бродильной промышленности, для стерилизации воздуха в операционных, боксах и других больничных помещениях. Для этого применяют бактерицидные увиолевые лампы разной мощности.

Химический способ очистки и обеззараживания воздуха Дезинфекция. Пригодны только те химические вещества, которые вызывают быструю гибель микробов, безвредны для человека, не портят оборудования и других предметов, бесцветны, не имеют запаха.

Они не должны воспламеняться или взрываться. Из химических веществ для обеззараживания воздуха наиболее часто применяют триэтиленгликоль, молочную кислоту, хлорсодержащие препараты.

Указанные дезинфектанты не только уничтожают патогенных микробов в воздухе, но и снижают общее количество микроорганизмов более чем на 90%.

Микрофлору воздуха условно разделяют на резидентную (постоянно обнаруживаемую) и временную (обнаруживаемую спорадически). Наибольшее количество микроорганизмов со­держится в околоземных слоях атмосферы. По мере удаления от земной поверхности воздух становится чище.

Постоянная микрофлора атмосферного воздуха формирует­ся почвенными микроорганизмами. В ее состав входят М. rоseus, M. luteus, S. maxima, В. subtilis, В. mycoides, В. mesentericus, виды Acinomyces, грибы рода Pénicillium, Aspergillus, Mucor и др.

Временная микрофлора атмосферного воздуха также фор­мируется за счет микроорганизмов почвы и видов, поступаю­щих с поверхности водоемов. Находящиеся в атмосферном воздухе микроорганизмы подвергаются солнечному и темпера­турному воздействию, атмосферным осадкам и ветру. Поэтому микрофлора воздуха весьма динамична, непрерывно меняется и обновляется.

Патогенные микроорганизмы попадают в воздух с мокротой и слюной при кашле, разговоре и чиханье. Даже здоровый чело­век при каждом акте чиханья выделяет в воздух 10 000 –                 20 000 микробных тел, а больной – во много раз больше.

Эти мельчай­шие капельки могут часами удерживаться в воздухе во взвешен­ном состоянии, образуя стойкие аэрозоли. В этих капельках за счет влаги микроорганизмы выживают дольше.

Таким капельно-воздушным путем происходит заражение многими острыми рес­пираторными заболеваниями, в том числе гриппом, корью, кок­люшем, дифтерией, туберкулезом легких и т.д.

Помимо капельного способа, распространение патогенных микробов через воздух может осуществляться «пылевым» пу­тем. Находящиеся в выделениях больных (мокроте, слизи и т.п.) микроорганизмы окружены белковым субстратом; когда такие капли высыхают, они превращаются в своеобразную бактериальную пыль (внутри белкового субстрата сохраняются и выживают многие патогенные бактерии).

Частички бактери­альной пыли обычно имеют диаметр от 1 до 100 мкм. У частиц с диаметром более 100 мкм сила тяжести превышает сопротивле­ние воздуха, и они быстро оседают. Скорость переноса бактери­альной пыли зависит от интенсивности сил воздушных переме­щений. Пылевой путь играет особенно важную роль в эпидеми­ологии туберкулеза, дифтерии, туляремии и других заболеваний.

Количество микробов в воздухе варьирует в широких диа­пазонах – от нескольких бактерий до десятков тысяч в 1 м3. В 1 г пыли может содержаться до 1 млн бактерий.

Большое значение имеет чистота воздуха в операционных, реанимаци­онных и перевязочных отделениях хирургических стационаров.

Общее количество микробов в операционной до операции не должно превышать 500 в 1 м3, а после операции – 1000 в 1 м3.

Для исследования микрофлоры воздуха используют различ­ные методы.

  • Седиментационный метод (метод Коха[1]), при котором чаш­ки Петри с элективными средами без крышек помещают на горизонтальные поверхности и выдерживают установленное время: 10–30 мин чашки с мясопептонным агаром для определения общего числа микроорганизмов, 15 мин чашки с желточно-солевым агаром для выявления стафилококков, до 2 ч – для выделения грамотрицательных неферментирующих бактерий. В месте забора используют не менее 2 ча­шек с одной питательной средой. После экспозиции чашки закрывают, переворачивают, помещают в термостат и инку­бируют при температуре 37±1 °С в течение 24±2 ч. После инкубации проводят учет количества колоний выросших микроорганизмов и при необходимости идентификацию микроорганизмов до рода и вида.
  • Аспирационный метод – это наиболее точный метод по срав­нению с седиментационным. В настоящее время при санитарно-бактериологическом и эпидемиологическом контроле воздушной среды для выбора проб воздуха пользуются пре­имущественно отечественными пробоотборными устройства­ми (ПУ) нескольких технологических марок, производимых НПО «Химавтоматика», ЗАО «Химка». ПУ-1Б (рис. 20.1 -см. вклейку) обеспечивает отбор проб биологического аэрозо­ля с величиной частиц диаметром до 1,4 мкм на плотную питательную среду импакционным, т.е. ударным (от англ. слова impact), осаждением. Принцип действия прибора зало­жен в основе его конструкции. Аспирация воздуха в пробоотборное устройство многосопловую (сопла – суживающиеся, конической формы насадки с диаметром отверстий около 0,8 мм) пластину, непосредственно под которой устанавливают чашки Петри с плотной питательной средой.
  • При прохождении через сопла решетки поток воздуха с находящимися в нем частицами аэрозоля разделяется на множество струек, скорость течения которых существенно возрастает, вследствие чего взвешенные в воздухе частицы биологического аэрозоля с силой ударяются о питательную среду, фиксируясь на ее поверхности.
  • Объем исследуемого воздуха прибором ПУ-1Б составляет от 50 до 1000л при скорости прохождения до 250 л/мин.
  • Отбор проб воздуха в помещениях стационара производят на уровне дыхания лежащего больного или на высоте рабочего стола.

Для определения общего количества бактерий в 1 м3 воздуха отбор производя на 2% питательный агар (рецепты 87-89). Для определения золотистого стафилококка используют желточно-солевой агар (рецепт 81), для определения плесневых и дрожжевых грибов – среду Сабуро (рецепт 136).

После отбора пробы чашки с питательными средами термостатируют при температуре              37±1 °С в течение 24±2 ч, посевы на среде Сабуро инкубируют при температуре 20-22 °С в течении 3 – 4 сут. После инкубации проводят учет количества колоний выросших микроорганизмов.

Санитарно-гигиеническая оценка воздуха лечебно-профилактических учреждений по бактериологическим показателям приведена в табл. 20.1.

[1] Седиментационный метод применяется обычно для качественной характеристики микробного загрязнения воздуха. Однако М.Н.

Лебедева в 40—50-е годы XX столетия приняла условно, что на открытую чашку Петри с питательной средой в течение каждых 5 мин оседают частицы биологического аэрозоля из 10 л воздуха, придав таким образом этому методу возможность ориентировочного количественного учета микроор­ганизмов в воздушной среде исследуемого объекта.

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха можно разделить на 4 этапа:

  1. отбор проб;
  2. обработка, транспортировка, хранение проб, получение концентрата микроорганизмов (если необходимо);
  3. бактериологический посев, культивирование микроорганизмов;
  4. идентификация выделенной культуры.

Отбор проб, как и при исследовании любого объекта, является наиболее ответственным. Правильное взятие проб гарантирует точность исследования.

В закрытых помещениях точки отбора проб устанавливаются из расчета на каждые 20 м2 площади — одна проба воздуха, по типу конверта: 4 точки по углам комнаты (на расстоянии 0,5 м от стен) и 5-я точка — в центре.

Пробы воздуха забираются на высоте 1,6—1,8 м от пола — на уровне дыхания в жилых помещениях. Пробы необходимо отбирать днем (в период активной деятельности человека), после влажной уборки и проветривания помещения.

Читайте также:  Крестцово-копчиковая тератома. Диагностика и лечение крестцово-копчиковых тератом.

Атмосферный воздух исследуют в жилой зоне на уровне 0,5—2 м от земли вблизи источников загрязнения, а также в зеленых зонах (парки, сады и т.д.) для оценки их влияния на микрофлору воздуха. Для отбора воздуха на уровне 0,5-2м от земли используют специальные штативы.

Следует обратить внимание на то, что при отборе проб воздуха во многих случаях происходит посев его на питательную среду.

Все методы отбора проб воздуха можно разделить на седиментационные и аспирационные

Седиментационный — наиболее старый метод, широко распространен благодаря простоте и доступности, однако является неточным. Метод предложен Р.

Кохом и заключается в способности микроорганизмов под действием силы тяжести и под влиянием движения воздуха (вместе с частицами пыли и капельками аэрозоля) оседать на поверхность питательной среды в открытые чашки Петри. Чашки устанавливаются в точках отбора на горизонтальной поверхности.

При определении общей микробной обсемененности чашки с мясопептонным агаром оставляют открытыми на 5—10 мин или дольше в зависимости от степени предполагаемого бактериального загрязнения.

Для выявления санитарно-показательных микробов применяют среду Гарро или Туржецкого (для обнаружения стрептококков), молочно-солевой или желточно-солевой агар (для определения стафилококков), суслоагар или среду Сабуро (для выявления дрожжей и грибов). При определении санитарно- показательных микроорганизмов чашки оставляют открытыми в течение 40—60 мин.

По окончании экспозиции все чашки закрывают, помещают в анаэростат или термостат для культивирования в оптимальной для развития выделяемого микроорганизма среде, затем (если этого требуют исследования) на 48 ч оставляют при комнатной температуре для образования пигмента пигментообразующими микроорганизмами.

Седиментационный метод имеет ряд недостатков: на поверхность среды оседают только грубодисперсные фракции аэрозоля; нередко колонии образуются не из единичной клетки, а из скопления микробов; на применяемых питательных средах вырастает только часть воздушной микрофлоры. К тому же этот метод совершенно непригоден при исследовании бактериальной загрязненности атмосферного воздуха.

Более совершенными методами являются аспирационные, основанные на принудительном осаждении микроорганизмов из воздуха на поверхность плотной питательной среды или в улавливающую жидкость (мясо-пептонный бульон, буферный раствор, изотонический раствор хлорида натрия и др.).

В практике санитарной службы при аспирационном взятии проб используются аппарат Кротова, пробоотборное устройство ПУ-1Б, бактериоуловитель Речменского, прибор для отбора проб воздуха (ПОВ-1), пробоотборник аэрозольный бактериологический (ПАБ-1), бактериально-вирусный электропреципитатор (БВЭП-1), прибор Киктенко, приборы Андерсена, Дьяконова, МБ и др. Для исследования атмосферы могут быть использованы и мембранные фильтры № 4, через которые воздух просасывается с помощью аппарата Зейтца. Большое разнообразие приборов свидетельствует об отсутствии универсального аппарата и о большей или меньшей степени их несовершенства.

Пробоотборное устройство ПУ-1Б. В настоящее время этот прибор широко применяется при исследовании воздуха закрытых помещений и имеется в лабораториях СЭС.

Принцип работы ПУ-1Б основан на том, что воздух, просасываемый через отверстия в крышке аппарата, ударяется о поверхность питательной среды, при этом частицы пыли и аэрозоля прилипают к среде, а вместе с ними и микроорганизмы, находящиеся в воздухе.

Чашку Петри с тонким слоем среды укрепляют на вращающемся столике аппарата, что обеспечивает равномерное распределение бактерий на ее поверхности. Работает аппарат от электросети. После отбора пробы с определенной экспозицией чашку вынимают, закрывают крышкой и помещают на 48 ч в термостат.

Обычно отбор проб проводят со скоростью 200 л/мин в течение 0,5-5 мин. Таким образом, определяется флора в 100-1000 л воздуха.

Приемник перед забором пробы воздуха заполняется 3—5 мл улавливающей жидкости (водой, мясопептонным бульоном, изотоническим раствором хлорида натрия).

Пробоотборник аэрозольный бактериологический (ПАБ-1) (в настоящее время снят с производства).

Механизм действия ПАБ-1 основан на принципе электростатического осаждения частиц аэрозоля (а следовательно, и микроорганизмов) из воздуха при прохождении его через прибор, в котором эти частицы получают электрический заряд и осаждаются на электродах с противоположным знаком.

На электродах для улавливания аэрозолей помещают в горизонтальном положении металлические поддоны с твердыми средами в чашках Петри или жидкой питательной средой (15—20 мл). Прибор переносной с большой производительностью 150-250 л/мин, т.е. за 1 ч можно отобрать 5—6 м3 воздуха.

Его рекомендуют применять для исследования больших объемов воздуха при обнаружении условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, например, при выявлении в воздухе палат больниц возбудителей внутрибольничных инфекций (Pseudomonas aeruginosa. Staph, aureus и др.), определении сальмонелл и эшерихий в атмосферном воздухе в местах дождевания при орошении земледельческих полей сточными водами.

При использовании любого из перечисленных приборов получаемые результаты являются приблизительными, однако они дают более правильную оценку обсемененности воздуха в сравнении с седиментационным методом.

Поскольку и отбор и санитарно-микробиологические исследования воздуха не регламентированы ГОСТ, то можно использовать любой прибор для оценки бактериальной загрязненности воздуха.

Во многих случаях отбор проб совмещен с этапом посева.

Для снижения численности микроорганизмов в воздухе закрытых помещений применяют следующие средства:

  1. химические — обработка озоном, двуокисью азота, распыление молочной кислоты,
  2. механические — пропускание воздуха через специальные фильтры,
  3. физические — ультрафиолетовое облучение.

Определение общей численности сапрофитных бактерий

Общая бактериальная обсемененность воздуха или микробное число — это суммарное количество микроорганизмов, содержащихся в 1 м3 воздуха.

Для определения общего количества бактерий в воздухе закрытых помещений забирают две пробы (объемом по 100 л каждая) на чашки Петри с МПА при помощи Пу-1Б, либо седиментационным методом, расставляя чашки с питательной средой по принципу конверта. Чашки с посевом помещают в термостат на сутки, а затем на 48 ч оставляют при комнатной температуре.

Экспозиция чашек с посевами на свету дает возможность подсчитать раздельно количество пигментных колоний (желтых, белых, розовых, черных, оранжевых и др.), количество спорообразующих бацилл, грибов и актиномицетов.

Подсчитывают количество колоний на обеих чашках, вычисляют среднее арифметическое и делают перерасчет на количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха. Бациллы образуют колонии, как правило, крупные, круглые, с неровными краями, сухие, морщинистые.

Колонии грибов с пушистым налетом (Мисог и Aspergillus) и плотные — зеленоватые или сероватые (Penicillium). Актиномицеты образуют беловатые колонии, вросшие в агар.

Количество каждой группы колоний (пигментных, беспигментных, плесеней, бацилл, актиномицетов) выражают в процентах по отношению к общему числу.

При определении микробного числа методом седиментации по Коху подсчитываются колонии, выросшие на МПА в чашках Петри, и расчет ведется по B.Л. Омелянскому. Если придерживаться этой методики, на чашку площадью 100 см2 за 5 мин оседает такое количество микробов, которое содержится в 10 л воздуха.

Определение стафилококков

Стафилококки являются одним из наиболее распространенных микроорганизмов в воздухе закрытых помещений, что обусловливается значительной устойчивостью их к различным факторам окружающей среды.

Обнаружение патогенных стафилококков в воздухе закрытых помещений имеет санитарно-показательное значение и свидетельствует об эпидемическом неблагополучии. Отбор проб воздуха проводится в количестве 250 л на 2—3 чашки с молочно-желточно-солевым агаром (или молочно- солевым, желточно-солевым) и на чашку с кровяным агаром.

Чашки инкубируют при температуре 37°С в течение 48 ч. Изучают культуральные признаки всех видов колоний, из подозрительных готовят мазки и окрашивают по Граму.

Помимо качественной характеристики отдельных колоний, подсчитывают количество выросших колоний стафилококков в 1 м3 воздуха.

Определение стрептококков

Стрептококки также являются санитарно-показательными микроорганизмами воздуха, в который они попадают от больных скарлатиной, тонзиллитами, ангиной и носителей стрептококков.

Отбор проб воздуха при исследовании на наличие а- и р-гемолитических стрептококков производят на чашки с кровяным агаром, средами Гарро и Туржецкого.

Забирают 200—250 л воздуха, чашки с посевами выдерживают в термостате 18—24 ч и затем еще 48 ч при комнатной температуре (после предварительного просмотра и учета). Идентификацию проводят по общепринятой методике.

Определение патогенных микроорганизмов в воздухе

Ввиду малой концентрации патогенных микроорганизмов в воздухе закрытых помещений, их выделение является достаточно трудной задачей.

При расшифровке внутрибольничных инфекций определяют в воздухе присутствие стафилококков, стрептококков, синегнойной палочки, сальмонелл, протеев и др. Отбор проб воздуха производят в объеме не менее 1000 л.

Посев производят на соответствующие элективные среды.

Если используется жидкая среда как улавливающая жидкость, то пробирку с жидкостью помещают в термостат на сутки для подращивания (получение накопительной культуры), а затем высевают на элективную среду.

При исследовании воздуха на наличие микобактерий туберкулеза отбор проб производят в объеме 250—500 л воздуха. В качестве улавливающей жидкости берут среду Школьниковой, которую затем обрабатывают 3% раствором серной кислоты (для подавления сопутствующей микрофлоры) и центрифугируют.

Осадок засевают в пробирки на одну из яичных сред, чаще среду Левенштейна — Иенсена. Инкубируют при 37°С до 3 мес. Отсутствие роста в течение 3 мес дает возможность выдать отрицательный ответ. Пробирки первый раз просматривают через 3 нед, затем каждые 10 дней.

Выделенную культуру идентифицируют, определяют ее вирулентность (заражением морских свинок — биопроба) и при необходимости определяют устойчивость к лекарственным препаратам.

При определении в воздухе коринебактерий дифтерии для посева воздуха используют чашки со средой Клауберга.

В последние годы определяют в атмосферном воздухе в районах дождевания земледельческих полей, при орошении их сточными водами, сальмонеллы в случае появления заболевания среди персонала станций орошения или населения. Отбор проб производят с помощью аспиратора ПУ-1Б на чашки с висмут-сульфитным агаром. Исследуют не менее 200 л воздуха. Выделенная культура идентифицируется по обычной схеме определения сальмонелл.

В связи с развитием микробиологической промышленности возникла необходимость исследования воздуха с целью обнаружения грибов-продуцентов при производстве антибиотиков, ферментных препаратов, при изготовлении кормовых дрожжей и др.

Читайте также:  Природа вирусов. Этапы исследования вирусов.

Для исследования воздуха на плесневые грибы рода Candida отбор проб производят в объеме от 100 до 1000 л на чашки со средой Чапека, суслоагаром (для обнаружения плесневых грибов) и с метабисульфит-натрий- агаром (МБС-агар) с добавлением антибиотиков (для обнаружения дрожжеподобных грибов рода Candida).

Чашки инкубируют в термостате при температуре 26—27°С в течение 3—4 сут (для плесневых грибов) и при 35—37°С в течение 2—3 сут (для грибов — продуцентов и дрожжеподобных рода Candida). Идентификация проводится с учетом особенностей плодоносящих гиф и характера мицелия.

Считают, что концентрация дрожжеподобных грибов в количестве 500—600 клеток в 1 м3 воздуха рабочего помещения является предельной, превышение ее ведет к развитию аллергических реакций у рабочих.

17.06.2017

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха; методы и критерии оценки

  • .
  • 1. Метод естественной седиментации так называемый «чашечный» метод Коха с пассивным осаждением микробного аэрозоля из воздуха под действием силы
  • тяжести на поверхность плотной питательной среды за определенное время.

Открытую чашку Петри с питательной средой оставляют на горизонтальной поверхности на определенное время . Затем чашку закрывают и после инкубации в термостате проводят подсчет выросших колоний. метод прост и доступен, однако малочувствителен и малоинформативен, т.к.

на поверхность плотной среды быстро оседают только крупные фракции микробного аэрозоля. Тем не менее, с помощью этого метода ориентировочно определяют количество микроорганизмов в 1 кв.м. воздуха. Пользуются формулой академика BJI.

Омелянского, на поверхность среды в чашке Петри площадью 100 см2 за 5 минут оседает микробный аэрозоль, содержашийся в 10 литрах воздуха.

2. Метод принудительной сдиментации микроорганизмов из воздуха онован на использовании импакторов, которые осаждают частицы на поверхность плотных питательных сред. Этот прием позволяет осадить микробы из легких фракций аэрозоля, и более полно определить степень микробного загрязнения воздуха.

Метод импакции с использованием аппарата Кротова заключается в прокачивании воздуха через щель в крышке, расположенной над поверхностью вращающейся чашки Петри с питательной средой.

При этом происходит равномерное осаждение микробного аэрозоля воздуха на всей поверхности питательной среды.

Недостатком метода является малая производительность (25 л/мин) и все-таки неполное обнаружение микроорганизмов из воздуха.

3. Фильтрационный метод основан на пропускании исследуемого воздуха через жидкость или мембранные фильтры, с последующим мерным высевом в питательные среды, а при вирусологическом исследовании — в культуру клеток.

Для фильтрации через жидкость используют импинджеры — специальные приборы, в которых воздух проходит через питательную среду, стерильную воду, физиологический раствор, в результате чего микроорганизмы задерживаются в

жидкости. Затем они могут быть обнаружены после культивирования в соответствующих средах.

Использование мембранных фильтров целесообразно при отборе воздуха в труднодоступных местах.Недостатком мембранных фильтров является значительное сопротивление фильтров воздушному потоку, что требует применения мощных воздуходувок, а также низкая производительность — от 8 до 10 л/мин.

  1. Критериями оценки санитарно-микробиологического состояния воздуха
  2. общее микробное число (ОМЧ) — количество бактерий в пересчете на 1 м3 воздуха, выросших при посеве на поверхности питательного агара через 48 часов
  3. индекс санитарно-показательных бактерий — количество бактерий в пересчете на воздуха условно-патогенных микробов дыхательных путей — гемолитических стрептококков, золотистого стафилококка, грамотрицательных бактерии, дрожжеподобных и плесневых грибов.
  4. № 33 Методы санитарно-микробиологического исследования воды.
  5. Загрязненность воды определяется по общей микро­бной обсемененности и обнаружению санитарно-показательных микроорганизмов — ин­дикаторов наличия выделений человека или животных. В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), энте­рококк, стафилококки;

На основании количественного выявле­ния этих санитарно-показательных бак­терий вычисляются индекс БГКП (число БГКП в 1 л воды), перфрингенс-титр,титр энтерококка и т.д. Так, например, титр энтерококка воды — это наименьшее ко­личество воды, в котором определяется энтерококк.

К бактериям группы кишечной палочки относят грамотрицательные палочки, сбра­живающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу при температуре 37°С в течение 24-48 ч и не обладающие оксидазной активностью. Наиболее часто этот показатель применяют как индикатор фекального за­грязнения воды.

Другой сходный показатель фекального загрязнения — общие колиформные бактерии: грамотрицательные, оксидаза-отрицательные палочки, ферментирующие лактозу или маннит (глюкозу) с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 часов.

Вместо последнего термина предлагается использовать термин «бактерии семейства Enterobacteriaceae», так как все бактерии этого семейства имеют ин­дикаторное значение.

К бактериям семейства Enterobacteriaceaeотносятся грамотрицатель­ные, оксидазаотрицательные палочки, расту­щие на лактозосодержащих средах типа среды Эндо и ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 ча­сов; колиформные бактерии (палочки).

При бактериальном загрязнении воды свыше допустимых норм следует провести дополни­тельное исследование на наличие бактерий — показателей свежего фекального загрязнения.

К таким бактериям относят термотолерантные колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24 часов и не растущие на нитратной среде. О свежем фекальном загрязнении свидетельствует также выявлениеэнтерококка.

На давнее фекальное загрязнение указывают отсутствие БГКП и на­личие определенного количества клостридий перфрингенс, т. е. наиболее устойчивых спорообразующих бактерий.

  • В соответствии с нормативными докумен­тами регламентируются следующие нормати­вы микробиологических показателей питьевой воды при централизованном водоснабжении:
  • 1. Общее микробное число водыне должно пре­вышать 100 микробов в 1 мл исследуемой воды;
  • 2. Общие колиформные бактериидолжны от­сутствовать в 100 мл исследуемой воды;
  • 3. Термотолерантные колиформные бактериидолжны отсутствовать в 100 мл исследуемой воды;
  • 4. Колифагине должны определяться в 100 мл исследуемой воды (учет по бляшкообразующим единицам);
  • 5. Споры сульфитредуцирующихклостридий не должны определяться в 20 мл исследуемой воды;

6. Цисты лямблийне должны определяться в 50 мл исследуемой воды.

Кроме того, загрязненность воды оценива­ется по обнаружению патогенных микробов с фекально-оральным механизмом переда­чи (энтеровирусы, энтеробактерии, холерные вибрионы и др.).

Исследование питьевой воды на присутствие возбуди­телей брюшного тифа, холеры и лептоспирозов.

В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки).

Кбактериям группы кишечной палочки относят грамотрицательные палочки, сбра­живающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу. Этот показатель применяют как индикатор фекального загрязнения воды. Колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки – показатели свежего фекального загрязнения.

Определение колиформных бактерий. Общие колиформные бактерии — это Гр- аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и сбраживающие лактозу с образовани­ем кислоты и газа. Их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.

Общие колиформные бактерии должны отсутствовать в 100 мл. воды.

Микрофлора воды. Факторы, влияющие на количество ми­кробов в воде.

Микрофлора воды отражает микробный состав почвы, так как микроорганизмы, в основном, попадают в воду с ее частичками. В воде формируются определенные биоцено­зы с преобладанием микроорганизмов, адап­тировавшихся к условиям местонахождения, освещен­ности, степени растворимости кислорода и диоксида углерода, содержания органических и минеральных веществ.

В водах пресных водоемов обнаруживаются различные бактерии: палочковидные (псевдо­монады, аэромонады), кокковидные (мик­рококки) и извитые. Загрязнение воды органи­ческими веществами сопровождается увеличе­нием анаэробных и аэробных бактерий, а также грибов.

Микрофлора воды выполняет роль активного фактора в процессе самоочищения ее от органических отходов, которые утилизируют­ся микроорганизмами.

Вместе с сточными водами попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтеро­кокки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизен­терии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций).

Таким образом, вода является фактором передачи возбудителей многих инфек­ционных заболеваний. Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный виб­рион, легионеллы).

Микрофлора воды океанов и морей также содержит различные микроорганизмы, в том числе светящиеся и галофильные вибрионы,

поражающие рыб, при употреблении которых в пищу раз­вивается пищевая токсикоинфекция.

Вода является одним из самых важных элементов для жизнедеятельности человека. Основными проблемами экологии, которые связаны с гидросферой планеты, являются условия обеспечения населения водой, еекачество и возможности ее повышения.

До недавних пор эти проблемы не стояли так остро, в связи с относительной чистотой природных источников водоснабжения и их достаточным количеством. Но в последние годы ситуация резко изменилась.

Значительная концентрация городского населения, резкое увеличение промышленных, сельскохозяйственных, транспортных, энергетических и других антропогенных выбросов привели к нарушению качества воды, появлению в источниках водоснабженияотличных от естественной природной среды химических, радиоактивных и биологических агентов. Все это ставит проблему эффективного водообеспечения качественной водой населения на первое место среди остальных проблем.

Состав природных вод весьма разнообразен и представляет собой сложную, непрерывно изменяющуюся систему, которая содержит минеральные и органические вещества во взвешенном, коллоидномиистинно растворенном состоянии.

Показатели качества воды подразделяются на: физические(температура, содержание взвешенных веществ, цветность, запах, вкус и др.);химические(жесткость, щелочность, активная реакция, окисляемость, сухой остаток и др.); биологические и бактериологические (общее количество бактерий, коли-индекс и др.).

Качество воды для хозяйственно-питьевых нужд определяется целым рядом показателей (физических, химических и санитарно-бактериологических), предельно допустимые значения которых, задаются соответствующими нормативными документами.

При этом, хорошо изучено вредное влияние предельно допустимых концентраций (ПДК) примесей химических элементов в воде, но недостаточно (или вообще не изучено) недостаточная концентрация таких примесей для нормальной жизнедеятельности живого организма.

Так, минерализация воды (количество растворенных в воде солей) является неоднозначным параметром. Исследования, проведенные в последние годы, показали неблагоприятное воздействие на организм человека питьевой воды с минерализацией свыше 1500 мг/л и ниже 30-50 мг/л.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector