Методы выделения микроорганизмов из воздуха. Исследование воздуха.

Воздух является неблагоприятной средой для микроорганизмов. Отсутствие питательных веществ, влаги, оптимальной температуры, губительное действие солнечных лучей и высушивания обуславливают быструю гибель микробов в воздухе. Но некоторые виды могут сохраняться в воздухе достаточно долго.

В воздухе постоянно присутствуют определённые микроорганизмы. Их распространение в воздухе связано с образованием в нём аэрозоля – системы из воздуха, капель жидкости и твёрдых частиц. Устойчивость аэрозоля зависит от размера частиц, поверхностной энергии и др.

Адсорбированные на частицах микроорганизмы оказываются надёжно защищёнными от губительного действия УФ-лучей.

Видовой состав воздуха довольно многообразен. В естественных условиях в воздухе могут встречаться до 100 видов сапрофитных микроорганизмов: пигментообразующие бактерии (микрококки, жёлтая сарцина, палочка чудесной крови и др.

), спорообразующие микробы (дрожжи, плесневые грибы, актиномицеты), споровые палочки (B. subtilis, B. megaterium, B. cereus), которые наиболее устойчивы к действию прямого солнечного света и высушивания.

Количество микробов в воздухе открытого воздушного пространства и их состав колеблется в больших диапазонах (от нескольких тысяч до нескольких десятков тысяч в 1 мм3) в зависимости от степени загрязнённости воздуха частицами пыли или капельками жидкости, от температуры (следовательно, от характера местности, осадков, влажности и др.

метеорологических условий), от населённости, от времени года и т.д. Чем выше концентрация в воздухе пыли, дыма, копоти, тем больше микробов, т.к. каждая частица адсорбирует на поверхности множество микроорганизмов. Микрофлора открытого воздушного бассейна в основном отражает почвенную микрофлору, т.к.

в воздух микроорганизмы попадают с поверхности почвы с пылью.

Воздух больших городов содержит большие количества микроорганизмов, а воздух лесов, гор, полей, лугов и также воздух над водной поверхностью отличается сравнительной чистотой. Особенно мало микроорганизмов в воздухе хвойных лесов, над ледяными и снежными просторами Арктики. Летом воздух загрязнён больше, чем зимой. Атмосферные осадки способствуют очищению воздуха от микробов.

Много микроорганизмов содержится в воздухе закрытых помещений. Обсеменённость воздуха закрытых помещений зависит от их объёма, частоты проветривания, качества уборки, степени освещённости, нахождения в них людей и др.

Воздух закрытых помещений отражает, в основном, микрофлору организмов людей и животных, находящихся в этих помещениях.

Микроорганизмы попадают в воздух с поверхности тела (с чешуйками кожи) и через верхние дыхательные пути при разговоре, кашле, чихании.

В воздухе в окружении больных людей, животных и т.д. могут находиться и патогенные микроорганизмы: гноеродные кокки, микобактерии туберкулёза, дифтерийная палочка, палочка коклюша, сибиреязвенная бацилла, стрептококки, бактерии туляремии, риккетсии, Ку-лихорадки и другие.

Они могут находиться в воздухе в течение более или менее длительного времени, сохраняя жизнеспособность, что связано с их устойчивостью к высушиванию и способностью сохраняться в аэрозолях. Через воздух они могут передаваться вместе с каплями слизи и мокроты при чихании, кашле, разговоре.

В связи с этим воздух может быть фактором передачи ряда инфекций, таких как грипп, корь, скарлатина, дифтерия, туберкулёз, коклюш, стрептококковые, стафилококковые и менингококковые инфекции, ангина, острые катары дыхательных путей, оспа, лёгочная форма чумы и др.

(воздушно-пылевой и воздушно-капельный пути передачи).

В закрытых помещениях патогенные микроорганизмы могут легко переноситься током воздуха. В хирургических и родильных отделениях могут распространяться гноеродные кокки (например, стафилококки), споры столбнячной палочки, а в детских отделениях – сальмонеллы, вызывая внутрибольничные или госпитальные инфекции — осложнения в послеоперационном и послеродовом периоде, кишечные заболевания.

В связи с этим, необходимо проводить контроль санитарно-гигиенического состояния воздуха, особенно в больничных и детских учреждениях, в аптеках.

Состояние атмосферного воздуха оценивается по общему микробному числу (ОМЧ) — общее количество микроорганизмов в 1 мм3 воздуха (КОЕ/1м3), а воздуха закрытых помещений – по микробному числу и по наличию санитарно-показательных бактерий.

Для воздуха закрытых помещений санитарно-показательными бактериями являются золотистый стафилококк (S. aureus), a-зеленящий (Str. viridans) и b-гемолитический (Str. haemolyticus) стрептококки. Гемолитические стрептококки – транзиторные обитатели носоглотки, зева; S.

aureus – факультативный обитатель носоглотки, зева, а также кожных покровов человека. Они имеют общий путь выделения в окружающую среду с патогенными микроорганизмами, передающимися воздушно-капельным путём.

Сроки выживания гемолитических стрептококков в окружающей среде практически не отличаются от сроков, характерных для большинства других возбудителей воздушно-капельных инфекций.

Присутствие S. aureus в воздухе помещений или на находящихся там предметах является показателем орально-капельного загрязнения.

Присутствие гемолитических стрептококков является показателем загрязнения воздуха микрофлорой верхних дыхательных путей человека и возможного присутствия возбудителей воздушно-капельных инфекций.

Одновременное их обнаружение свидетельствует о высокой степени загрязнения воздуха.

Присутствие b-гемолитического стрептококка и гемолитического стафилококка – показатель прямой эпидемиологической опасности.

Методы микробиологического исследования воздуха делятся на седиментационные и аспирационные.

Наиболее простой метод – седиментационный метод Коха. Он может быть использован только для ориентировочного анализа. Чашку Петри с МПА оставляют открытой в течение определённого времени, затем термостатируют и подсчитывают число колоний, зная, что 1 колония – 1 клетка. Микробное число подсчитывают, пользуясь правилом Омелянского:

Методы выделения микроорганизмов из воздуха. Исследование воздуха.

  • x – количество микробов в 1 м3 воздуха;
  • а – количество колоний;
  • b – площадь чашки Петри,
  • t – время, в течение которого была открыта чашка Петри;
  • 5 – время по расчёту Омелянского;
  • 10 – объём, из которого происходит оседание микроорганизмов;
  • 100 – площадь см2;
  • 1000 – используемый объём воздуха в литрах

Аспирационный метод – метод Кротова, является более точным количественным методом определения микробного числа воздуха. Посев воздуха осуществляется с помощью аппарата Кротова.

Прибор Кротова устроен таким образом, что воздух с заданной скоростью просасывается через узкую щель плексигласовой пластинки, закрывающей чашку Петри с питательным агаром.

При этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно фиксируются по всей его поверхности, т.к. чашка находится в постоянном вращении.

Для определения общего количества сапрофитных бактерий пропускают 100 л воздуха, а для определения дрожжевых и плесневых грибов и санитарно-показательных микроорганизмов – 250 л.

Для определения роста сапрофитных бактерий используют МПА; плесневых грибов и дрожжей – сусло-агар и агар Сабуро; золотистого стафилококка – желточно-солевой агар; для выделения гемолитических стафилококков – кровяной агар с добавлением генцианового фиолетового (среда Гарро); для патогенных микроорганизмов – соответствующие элективные питательные среды.

После инкубации посевов в термостате производят расчёт микробного числа по формуле:

  1. a – количество колоний;
  2. V – объём пропущенного воздуха, л;
  3. 1000 – искомый объём воздуха;
  4. x – микробное число.
  5. Хотя официальных стандартов чистоты воздуха не разработано, приняты примерные показатели, исходя из которых оценивается степень микробного загрязнения воздуха жилых помещений.
  6. Таблица 3.
Летний режим Зимний режим
Микробное число Зеленящий и гемолитический стрептококки Микробное число Зеленящий и гемолитический стрептококки
Чистый Менее 1500 Менее 16 Менее 4500 Менее 36
Загрязнённый Более 2500 Более 36 Более 7000 Более 124
  • К воздушной среде аптек предъявляются строгиегигиенические требования, что отражено в нормативных документах.
  • Источники загрязнения воздуха аптек:
  • • -посетители;
  • • -сотрудники;
  • • -инфицированный материал (рецепты, посуда, упаковочный материал, тара);
  • • — некачественное лекарственное растительное сырье.
  • Разработаны и допустимые нормы микробного числа воздуха различных помещений аптеки.
  • Таблица 4.
Наименование помещений Условия работы Количество микроорганизмов в 1м3 (1000 л) воздуха
общее золотистого стафилококка плесневых и дрожжевых грибов
Асептический блок, стерилизационная (чистая половина) До работы Не выше 500 Не должно быть в 250 л воздуха
После работы Не выше 1000 То же
Ассистентская, фасовочная, дефекторная, материальная До работы Не выше 750 То же
После работы Не выше 1000 То же
Моечная Во время работы Не выше 1000 Не должно быть в 250 л воздуха До 12
Зал обслуживания Во время работы Не выше 1500 До 100 До 20
  1. Борьба с бактериальным загрязнением воздуха аптек:
  2. • -рациональная планировка на стадии строительства;
  3. • — эффективная искусственная вентиляция;
  4. • -соблюдение санитарного режима аптеки (приказ МЗ РФ №309 от 1997 г.);
  5. • — использование бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха.
  6. Микрофлора тела человека.

Микрофлора человека – это совокупность микробных биоценозов, находящихся в организме здоровых людей. Микробные биоценозы сформировались в процессе длительной эволюции в результате отбора наиболее приспособленных форм с учётом антагонистических и синергетических отношений между отдельными микроорганизмами и с учётом влияния на них физиологических факторов микроорганизма.

Читайте также:  Желудочная слизь и ее значение. Слизь желудка. Функции желудочной слизи.

Организм человека заселён более чем 500 видами микроорганизмов, которые составляют нормальную микрофлору (всего 1014 микробных тел с преобладанием облигатных анаэробов). В норме встречаются как безвредные, так и болезнетворные микроорганизмы.

Все виды находятся в состоянии динамического равновесия друг с другом и с организмом человека. Это состояние называется эубиозом. В результате этого организм человека и его нормальную микрофлору рассматривают как единую экологическую систему.

Для микрофлоры каждой области тела человека характерно относительное постоянство. Но она зависит от многих факторов: состояния макроорганизма (возраст, пол, особенности питания), климата, микроорганизмов окружающей среды и т.д.

  • Нормальную микрофлору человека делят на 2 группы:
  • а) аутохтонная (резидентная) – облигатная микрофлора, состоящая из постоянно, закономерно встречающихся микроорганизмов, максимально приспособленных к существованию в организме хозяина (сапрофиты, условно патогенные – способные проявлять болезнетворные свойства при снижении резистентности);
  • б) аллохтонная (транзиторная) – факультативная микрофлора, состоящая из временно встречающихся, необязательных микроорганизмов, неспособных длительно существовать в организме человека; их присутствие определяется поступлением микробов из внешней среды и состоянием иммунной системы (сапрофиты и условно патогенные).
  • Иногда у здоровых людей могут встречаться патогенные бактерии и вирусы (бактерио- и вирусоносительство).

Микрофлора заселяет поверхность тела и полости, сообщающиеся с окружающей средой (кроме лёгких и матки). В связи с этим различают микрофлору кожи, слизистых оболочек, полости рта, верхних дыхательных путей, пищеварительного тракта и мочеполовой системы.

Остальные органы и ткани человека, включая кровь, лимфу, спинномозговую жидкость, свободны от микроорганизмов, то есть стерильны. Но ткани могут быть заселены персистирующими вирусами, которые выделяются с молоком, слюной, потом, мочой и т.д.

Формирование микрофлоры человека начинается в процессе родов (плод в период беременности стерилен) при попадании микроорганизмов на кожу и слизистые оболочки (лактобактерии, стрептококки, E. coli).

Может произойти и заражение патогенными микробами, например, гонококками от больной гонореей матери (у ребёнка они вызывают конъюнктивит – бленнорею). Затем микрофлора формируется под влиянием различных факторов среды (в том числе и питания) и определяется, в основном, её санитарным состоянием.

Нормальная микрофлора становится устойчивой к концу третьего месяца и сходна с микрофлорой взрослых.

Микрофлора кожи.

Микроорганизмы находятся на поверхности и в более глубоких слоях кожи (в волосяных мешочках, в просветах сальных и потовых желёз). Субстратом для их питания являются выделения жировых и сальных желёз. Отмершие клетки, продукты распада. На 1 см2 – 80 тысяч микроорганизмов.

Видовой состав микрофлоры кожи следующий: 1) непатогенные – стафилококки (S. epidermidis, S. saprophyticus), сарцины, дифтероиды, плесневые и дрожжеподобные грибы (C. albicans), коринебактерии, спорообразующие бациллы (Bac. subtilis), микобактерии; 2) некоторые патогенные и условно-патогенные – S. aureus (5%), стрептококки.

Наиболее обсеменена кожа открытых участков (кисти рук, лицо, шея, ушные раковины). Значительное большинство микроорганизмов не проникает через неповреждённые кожные покровы.

Кроме характерной микрофлоры можно обнаружить транзиторные микроорганизмы, но они быстро исчезают, благодаря бактерицидным свойствам кожи. Процесс самоочищения кожи происходит вследствие содержания в поте a-глобулинов, иммуноглобулинов A и a, трансферрина, лизоцима и др. противомикробных веществ.

Этот процесс более эффективен, если кожа чистая. На грязной коже наблюдается усиление роста микроорганизмов, которые и определяют запах тела.

Микрофлора кожи имеет большое значение в распространении микроорганизмов в воздухе. Это происходит при шелушении кожи, когда миллионы чешуек несут несколько микроорганизмов каждая и загрязняют окружающую среду. Нужно помнить, что через грязные руки может произойти загрязнение лекарственных средств микроорганизмами, которые вызывают их порчу.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском гугл на сайте:

Для выделения микроорганизмов из воздуха используют следующие методы

Седиментационный метод (метод КЏха). Обычно используют для установления состава микрофлоры в закрытых помещениях.

Чашки ПЌтри со средой раскладывают в различных местах и открывают на определённое время; затем инкубируют и выявляют видовую принадлежность микроорганизмов.

Чаще всего в воздухе определяют ОМЧ (применяют чашки с МПА; время экспозиции 10–30 мин), содержание стафилококков (применяют чашки с желточно-солевым агаром (ЖСА); время экспозиции 15 мин), по эпидемическим показаниям определяют содержание стрептококков (применяют чашки с КА; время экспозиции 10–15 мин). При обследовании воздуха аптек производят определение содержания грибов, используя чашки со средой СабурЏ. При спокойном состоянии воздуха на площадь 100 см2 оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 0,01 м3 воздуха.

Фильтрационный метод. Пропускают струю забранного воздуха через слой воды, затем проводят выделение и идентификацию микроорганизмов, попавших в воду.

Методы, основанные на ударном действии струи воздуха. Специальные аппараты (например, конструкций В.С. КиктЌнко, Л.М. СоколЋнского и др.) позволяют точно определить количественное обсеменение воздуха конкретными микроорганизмами.

Механизм улавливания микрофлоры основан на «ударно-прибивном» действии струи воздуха, который проходит через узкую щель и ударяется о влажную поверхность питательной среды. Во время отбора чашка ПЌтри вращается вместе со столиком, что обеспечивает равномерное распределение микроорганизмов по поверхности среды.

Большое преимущество этого метода — возможность посева определённого объёма воздуха.

Санитарно-микробиологические исследования пищевых продуктов

Пищевые продукты — самые сложные объекты в санитарной микробиологии. Это объясняется не только разнообразием и обилием микрофлоры в них, но также использованием микроорганизмов в производстве многих продуктов и, к сожалению, отсутствием полноценных методик выявления микробов.

Через пищевые продукты могут передаваться возбудители многих инфекционных болезней — брюшного тифа и паратифов, сальмонеллёзов, дизентерии, эшерихиозов, ботулизма, холеры, бруцеллёза, туберкулёза, сибирской язвы, некоторых риккетсиозов (Ку-лихорадка) и вирусных инфекций (ящур, полиомиелит и др.).

Пищевые токсикоинфекции, вызываемые стафилококками и многочисленными условно-патогенными микроорганизмами, возникают после употребления в пищу заражённых пищевых продуктов. Обсеменение их микробами может происходить на всех этапах заготовки, хранения и приготовления.

Пищевые продукты обычно невозможно полностью освободить от присутствия микроорганизмов без риска изменения их вкусовых качеств.

Наличие в пище большого количества различных факторов роста и витаминов способствует росту микроорганизмов. Этот факт является основным отличием изучения пищевых продуктов от прочих санитарно-микробиологических исследований, так как ни в воде или почве, ни тем более в воздухе столь бурного размножения микробов не происходит.

При этом следует помнить, что естественная и безвредная для человека микрофлора пищи служит биологической защитой от нежелательных «гостей». Как во всяком биоценозе, в ней могут доминировать те или иные виды, влияющие на качество пищевых продуктов. Представление о микрофлоре пищевых продуктов может дать качественное или количественное изучение её популяции.

При этом следует помнить, что роль конкретного микроорганизма необходимо оценивать не только после всестороннего анализа биоценоза, но учитывать качество и характер исследуемых продуктов. Например, энтерококки можно рассматривать как признак фекального загрязнения, но их культуры также применяют при изготовлении некоторых продуктов, например, диетической простокваши или сыра «чэддер».

Соответственно, в продуктах питания различают специфическую и неспецифическую микрофлору.

Специфическая микрофлора пищевых продуктов

Представлена «культурными» микроорганизмами, используемыми для приготовления различных продуктов и являющихся обязательным звеном в технологии их приготовления. Специфические микроорганизмы используют в приготовлении всех кисломолочных продуктов, хлеба, пива, вина, в квашении овощей и т.д.

При приготовлении кефира, простокваши, кумыса, творога, сметаны, масла используют Lactococcus (устар. Streptococcus) lactis (молочно-кислый стрептококк). В эти же продукты для получения сметанообразного состояния добавляют Streptococcus cremoris (сливочный стрептококк).

Для заквашивания кефира используют так называемые кефирные зёрна, состоящие из казеина, в котором находятся ассоциации микроорганизмов: молочно-кислые стрептококки, лактобациллы, молочные грибки и дрожжеподобные грибки.

Молочно-кислые кокки и палочки, гидролизуя лактозу, снабжают грибки кислотой, необходимой им для жизнедеятельности, а грибки, вызывая спиртовое брожение, насыщают продукт углекислотой, что придаёт кефиру особый вкус.

В приготовлении некоторых кисломолочных продуктов (ацидофилина, кислого молока) используют Lactobacillus bulgaricus (болгарская палочка) и Lactobacillus acidophilus (ацидофильная палочка). Контроль над чистотой этих культур и их сохранением осуществляют микробиологи лабораторий соответствующих предприятий пищевой промышленности. Санитарный микробиолог должен знать специфическую микрофлору для того, чтобы уметь отличить её от неспецифической, загрязняющей продукты.

Читайте также:  Ретаболил уколы в ампулах для инъекций 50 мг - инструкция по применению, формы выпуска, аналоги и отзывы

Неспецифическая микрофлора пищевых продуктов

Включает микроорганизмы, случайно попадающие на пищевые продукты из окружающей среды. Её составляют сапрофиты, патогенные и условно-патогенные микроорганизмы, а также виды, вызывающие порчу пищевых продуктов.

Во многих пищевых продуктах присутствует обильная сапрофитическая микрофлора, вызывающая образование разнообразных биоценотических взаимосвязей.

Присутствие некоторых сапрофитов способствует развитию биохимических процессов, закономерных для пищевого продукта, от которых зависит его качество и нередко сохранность в результате антагонистического противодействия патогенным бактериям, попадающим в продукты.

Степень загрязнённости посторонней микрофлорой зависит от многих факторов: правильности заготовки самого пищевого продукта, его транспортировки, хранения, технологии последующей обработки и, на всех этапах, от соблюдения санитарного режима.

Санитарно-микробиологический анализ качества пищевых продуктов

Наиболее часто изучают два основных показателя — наличие, а также степень обсеменённости продуктов микроорганизмами и наличие патогенных микроорганизмов.

Выявление патогенов безусловно более точное, но и более трудоёмкое занятие, поэтому его используют лишь при первичной переработке мяса, а также при проведении некоторых анализов молока, мясных продуктов и контроле консервного производства. Исследование преследует три цели.

1. Контроль качества сырья, используемого в производстве пищевых продуктов и оценка санитарно-гигиенических условий их изготовления.

2. Контроль режимов хранения пищевых продуктов и оценка санитарно-гигиенических условий их транспортировки и реализации.

3. Контроль над обеспечением эпидемической безопасности пищевых продуктов.

При проведении исследований используют качественные и количественные методы. Качественными методами определяют характер технологической микрофлоры и возбудителей порчи продуктов.

Количественными методами в сочетании с другими показателями определяют сроки хранения и реализации продуктов. Общее количество микроорганизмов исследуют в 1 г или 1 см3 продукта методом кратных разведений.

Конкретные виды определяют с использованием специфичных тестов.

Следует помнить, что на характер микробной обсеменённости влияют физикохимические свойства продуктов. Большинство микроорганизмов плохо выживает в продуктах с очень низкими и высокими значениями рН.

Особенно обильно они размножаются в продуктах с жидкой и полужидкой консистенцией. В плотных, особенно сухих или порошкообразных продуктах, условия для размножения микробов затруднены и в них они располагаются «гнёздами».

На обсеменённость пищевых продуктов влияет некоторые особенности технологии их производства и хранения.

• Механическая переработка (изготовление фарша, пюре и др.) увеличивает вероятность обсеменённости и способствует гомогенному распространению микроорганизмов по всему продукту.

• Химическая обработка (соление, маринование) способствует резкому уменьшению числа микроорганизмов. Нередко солёные продукты дополнительно коптят, что ещё более снижает обсеменённость.

• На рост микроорганизмов существенно влияет температурный режим их производства и хранения. Повышение температуры более неблагоприятно действует на микробов, чем понижение, поэтому действие высоких температур широко используют для обработки пищевых продуктов.

Выделение микроорганизмов из воздуха

Бактериологическое исследование воздушной среды предусматривает: определение общего содержания микробов в 1 м3 воздуха; определение содержания золотистого стафилококка в 1 м3 воздуха.

Отбор проб воздуха для бактериального исследования проводили в следующих помещениях: операционных блоках, перевязочных, послеоперационных палатах, отделениях и палатах реанимации и интенсивной терапии и др. помещениях, требующих асептических условий.

Пробы воздуха отбирали аспирационным методом с помощью пробоотборника ПУ-1Б (ЗАО «Химко», г. Москва).

Скорость протягивания воздуха составляет 25 л в минуту. Количество пропущенного воздуха должно составлять 100 литров для определения общего содержания бактерий и 250 литров для определения наличия S. aureus и плесени. Исследование воздуха седиментационным методом допускается в исключительных случаях.

Так ОМЧ в помещениях класса А (особо чистые) — 200 КОЕ/ м3, класса Б (чистые) — 500-750 КОЕ/м3, класса В (условно чистые) — 750-1000 КОЕ/м3. Плесени и S. аureus в 250 литрах воздуха чистых помещений быть не должно. В помещениях класса Г (грязные) данные показатели не нормируются [СанПиН 2.1.3.

1375-03…, 2003].

Для определения общего содержания бактерий в 1м3 воздуха забор проб проводили на 2% питательный агар. Посевы инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов, затем оставляли на 24 часа при комнатной температуре, подсчитывали количество колоний, выросших и производили перерасчет на 1 м3 воздуха.

Для определения наличия стафилококков забор проб проводили на ЖСА. Вырастили колонии и идентифицировали их.

Бактериологическое исследование микробной обсемененности предметов внешней среды предусматривает выявление стафилококка, синегнойной палочки, бактерий группы кишечных палочек. Забор проб с поверхностей различных объектов осуществляют методом смывов.

Взятие смывов производили стерильным ватным тампоном на палочках, вмонтированных в пробирки, или марлевыми салфетками, размером 5?5 см, простерилизованными в бумажных пакетах или в чашках Петри.

При контроле мелких предметов смывы забирают с поверхности всего предмета.

При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят в нескольких местах исследуемого предмета площадью примерно в 100?200 см2 .

Для выделения стафилококков делали посев непосредственно на чашку Петри с ЖСА. Кроме того, в качестве среды накопления использовали бульон с 6,5% NaCl, бульон с 1% глюкозы, разлитые в пробирки по 0,5 мл, в которые засевали по 0,2?0,3 мл смывной жидкости. Засеянные пробирки инкубировали при 37°С в течение 20?24 часов, после чего делают высев на ЖСА.

Для выявления бактерий группы кишечных палочек производят посев на среду обогащения, для чего тампон (марлевую салфетку) погружают в 10?20% желчный бульон или среду Кесслера. Через сутки инкубирования при 37°С делают пересев на среду Эндо. Подозрительные колонии на среде Эндо микроскопируют и пересеивают на 2-ую бродильную пробу ? среду Гисса с глюкозой. Среду выдерживают 24 часа при 43°С.

Исследование микробной загрязненности воздуха в помещениях школы

Окончание. См. № 18–19/2008

Экспериментальная часть

Материалы и методы

Приготовление питательных сред

Мясопептонный бульон (МПБ). К мясной воде прибавляют 1% пептона и 0,5% NaCl, кипятят на слабом огне 10–15 мин для растворения веществ, устанавливают нужный рН раствором NaOH с помощью индикаторных бумажек и снова кипятят 30–40 мин до выпадения осадка. Фильтруют, доливают до первоначального объема водой и стерилизуют 20 мин при 120 °С.

Мясопептонный агар (МПА). К готовому бульону добавляют 2% порошка агар-агара. Готовую среду, если нужно, осветляют, фильтруют и стерилизуют 20 мин при 120 °С.

Среда Лурия-Бертани (ЛБ). 1% бакто-триптона, 0,5% дрожжевого экстракта, 1% NaCl, 1,8% бакто-агара растворяют в воде, устанавливают рН 7,0 и стерилизуют 20 мин при 120 °С.

Желточно-солевой агар (ЖСА) – 10% NaCl, 10–20% желточной взвеси, 2% агара.

Перед разливом в чашки Петри агаровые среды расплавляют и остужают до 45–50 °С. Разливают среды в стерильные чашки в асептических условиях.

Отбор проб для определения общей обсемененности воздуха школьных помещений проводился седиментационным способом, основанным на механическом оседании микроорганизмов.

Открытые чашки Петри со стерильной плотной питательной средой устанавливали горизонтально и экспонировали 10–20 мин в зависимости от предполагаемого загрязнения воздуха.

Затем чашки закрывали, переворачивали вверх дном и выдерживали 24 ч при температуре 25–30 °С.

Определение общей обсемененности. На 2–3-й день культивирования просматривали чашки, фиксируя в журнале характер и интенсивность роста, морфологию колоний.

Культуральные свойства определяли, изучая характер роста культуры с помощью лупы и под малым увеличением микроскопа. Величину и форму колоний, форму краев и прозрачность изучали в проходящем свете, рассматривая чашки со стороны дна.

В отраженном свете (со стороны крышки) определяли характер поверхности колоний, окраску. Консистенцию определяли прикосновением бактериальной петли.

При идентификации бактерий (4-е сутки роста колоний) перечисляли их морфологические признаки: форму, наличие капсулы, жгутиков, окраску по Граму. При окраске по Граму на мазок воздействуют двумя красителями: основным и дополнительным.

Различные микроорганизмы неодинаково относятся к красителям трифенилметановой группы: генцианвиолету, метиловому или кристаллическому фиолетовому. Грамположительные (грам+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом.

При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, не изменяют приобретенный фиолетовый цвет. Грамотрицательные (грам–) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение.

В результате они обесцвечиваются и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.

Читайте также:  Консультация больных для профилактики заболеваний.

Приготовление мазков, их окраска по Граму. Исследуемый материал распределяли тонким слоем по поверхности обезжиренного предметного стекла. Мазок высушивали на воздухе, затем предметное стекло с препаратом брали пинцетом за ребра мазком вверх и проводили 2–3 раза над верхней частью пламени горелки.

На фиксированный мазок наливали основной краситель и оставляли на 2–3 мин. Во избежание попадания осадка окрашивание вели через фильтровальную бумагу. Сливали краску, убирали фильтровальную бумагу.

Мазок заливали на 1–2 мин раствором Люголя, затем раствор сливали, мазок прополаскивали в 96% этиловом спирте до обесцвечивания и промывали стекла в проточной воде. Затем окрашивали фуксином, снова промывали в проточной воде и высушивали фильтровальной бумагой.

В результате грам+ бактерии окрашивались в темно-синий цвет, грам– – в красный. Окрашенные по Граму мазки просматривали под микроскопом, фиксируя морфологию клеток.

Две колонии, подозрительные как стафилококковые, отвили на скошенный агар для дальнейшего исследования. Пробирки с посевом поместили в термостат при 37 °С на 18–20 ч. Затем пересадили колонии на дифференциальную среду – желточно-солевой агар, на котором патогенные стафилококки, например золотистый, способны выделять фермент лецитиназу.

Результаты исследований

Для окончательной идентификации и дифференциации микроорганизмов должны быть выделены чистые культуры, подобраны дифференциально-диагностические среды, позволяющие отличить один вид от другого по ферментативной активности, должны быть изучены культуральные свойства на жидких и плотных средах (на жидких средах отмечают прозрачность, наличие осадка или пленки), использованы биохимические методы (изучение ферментативных активностей и т.п.), изучено взаимодействие с антисыворотками, а в особо трудных случаях используют методы молекулярно-генетического анализа (изучение ДНК).

Из-за отсутствия возможности проведения таких исследований в условиях школы мы ограничились ориентировочным определением микроорганизмов. Мы установили форму и размеры колоний, их цвет и консистенцию.

При микроскопических исследованиях шести визуально различных колоний определили форму микроорганизмов (кокки, бациллы, овоиды и т.п.), подвижность, отношение к окраске по Граму, наличие спор и капсул.

Количественные результаты по обнаружению микроорганизмов в разных школьных помещениях представлены в табл.1.

Таблица 1. Общая загрязненность воздуха

Место забора проб Питательная среда Бактериальные колонии Грибные колонии
количество колоний на чашке среди них разных типов количество колоний на чашке среди них разных типов
Класс биологии МПА 4 2
Столовая МПА 4 3
Туалет МПА 1 1
Коридор (после большой перемены) МПА 2 1 1 1
Класс информатики МПА 1 1
Раздевалка ЛБ 48 6 1 1
Коридор во время перемены ЛБ 32 5 1 1
Всего типов: 6 5

Морфологическое описание колоний микроорганизмов и очень приблизительное (учитывая вышесказанное) ориентировочное определение микроорганизмов до разных таксономических групп представлено в табл. 2, З.

Таблица 2. Морфологические свойства идентифицируемых бактерий

Морфология колонии Колония № 1 Колония № 2 Колония № 3 Колония № 4 Колония № 5 Колония № 6
Форма амебовидная округлая круглая амебовидная неправильная округлая
Размер, мм 5 2–4 2–4 ~ 5 ~ 6 2–4
Цвет грязно­белый желтый розовый белый, в центре розовый грязно-серый розовый, в центре желтое скопление
Край ровный ровный ровный волнистый лопастной ровный
Блеск есть есть есть нет нет есть
Поверхность гладкая гладкая гладкая морщинистая морщинистая морщинистая
Профиль выпуклый, конический выпуклый, слегка конич. выпуклый плоский плоский выпуклый
Рисунок равномерный равномерный равномерный с правильными складками со складками равномерный
Структура однородная однородная однородная неоднородная неоднородная неоднородная
Консистенция мягкая мягкая мягкая мягкая плотная мягкая
Морфология и цитология клеток
Форма кокки кокки кокки кокки и палочки палочки кокки
Расположение клеток скопления, гроздья собраны в гроздья скопления одиночные, кокки, тетрада одиночные скопления
Размер довольно крупные очень мелкие мелкие мелкие крупные, длинные довольно крупные
Наличие эндоспор нет нет нет возможно нет нет
Окраска по Граму грам+ грам+ грам+ грам+ / грам– грам– грам+
Предположительно: Staphilococcus Micrococcus сем. Microсоссасеае Sarcina филум Вас-teroidetes ceм. Microсо-ссасеае

Таблица 3. Морфологические свойства идентифицируемых грибов

Морфология колонии Колония № 1 Колония № 2 Колония № 3 Колония № 4 Колония № 5
Структура морщинистая, плотная складчатая, плотная воздушная плотная плотная
Размер, см 2,5 3 3 1,4 0,5
Цвет серо-зеленый, по краям белый зеленый, по краям белый белый ярко­белый желто-зеленый
Профиль плоский плоский плоский выпуклый, ~ 0,3–0,4 см выпуклый, 0,4 см
Край лопастной лопастной ровный волнистый ровный
Морфология мицелия
Септированный да да нет нет да
Наличие спорангиев нет нет да да да
Форма конидиеносцев тип Aspergillus тип Penicillium нет нет нет
Предположительно Aspergillus Penicillium Мuсоr пор. Mucorales кл. Ascomycetes
Всего колоний: 5 3 2 1 1

Выводы: в ходе эксперимента было установлено, что общая загрязненность воздуха в школе не превышает допустимых норм (санитарная норма – не более 50 колоний). Выделенные микроорганизмы лучше росли на среде ЛБ, чем на МПА, хотя последняя считается базовой для посевов микроорганизмов из воздуха.

При этом среди бактерий отмечалось явное преобладание грам+ кокковой микрофлоры, наиболее распространенными представителями которой являются члены семейства Micrococcaceae (встречаются повсеместно).

Это семейство включает роды Staphilococcus (сапрофиты, патогены, условные патогены) и Micrococcus (в основном сапрофиты), микрококки имеют пигмент от желтого до розового, и именно таких цветов колонии преобладают. В одной из колоний оказалась смешанная культура – палочки и кокки разных цветов, что, возможно, вызвано нарастанием колоний друг на друга.

Кокки из этой колонии собраны в группы по 2 и 4, что позволяет предположить их принадлежность к сем. Sarcina, или Streptococcaceae. Еще одна культура с грам– палочками вызвала затруднения при идентификации, т.к. обычные почвенные палочки относятся к классам Bacilli и Clostridium и являются грам+.

В филум Bacteroidetes входят грам– палочки, обитающие в почве, воде, на разных растениях, поэтому можно предположить, что наши бактерии из этого филума, но точное их определение затруднительно, хотя скорее всего это сапрофитные формы, занесенные с частицами почвы в раздевалку и коридор, где и были обнаружены.

Патогенной бактериальной микрофлоры не было обнаружено. Пересеянные на дифференциальную среду подозрительные колонии по заключению санитарно-эпидемиологической службы не являются колониями золотистого стафилококка.

При идентификации грибов основным критерием служило строение мицелия и спорангиев, или конидиеносцев.

Надо отметить значительное присутствие в воздухе школы спор плесневых грибов, которые являются условно-патогенными и могут вызывать плесневые микозы (аспергиллез, мукороз, пенициллиоз) у людей со слабым иммунитетом.

Это предполагает необходимость проветривания классных помещений и более тщательной влажной уборки с применением дезинфицирую-щих средств.

Заключение

Сейчас в развитых странах контролируется микологическое и бактериологическое состояние больниц, жилищ, офисов, общественных зданий, детских учреждений и т.д. Источником самых распространенных опасных плесеней (грибов рода Aspergillus) могут оказаться и сухие цветы или земляная смесь для комнатных растений.

Кроме того, количество и состав пыли часто связаны с реконструкцией зданий, работой вентиляционных систем и кондиционеров. В воздухе в местах массовых скоплений людей всегда присутствует некоторое количество патогенных бактерий или их споры. Поэтому наша работа по мониторингу чистоты воздуха в школе очень важна для сохранения здоровья школьников, т.к.

своевременное выявление возбудителей и меры по дезинфекции способны предупредить развитие локальных вспышек инфекции.

В перспективе возможны проведение аналогичных проверок микрофлоры воздуха для учета сезонных различий, замеры при отсутствии детей в школе (во время каникул), а также проведение посевов из смывов с различных поверхностей, которые дадут представление о загрязненности предметов, которых дети часто касаются руками (перила, дверные ручки, столы в столовых и т.п.).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Методические рекомендации. Методы бактериологического исследования условно-патогенных микроорганизмов в клинической микробиологии (утв. Минздравом РСФСР 19.12.1991).

2. Нетрусов А.И., Котова И.Б. Микробиология. – М.: Изд. центр «Академия», 2006.

3. Шлегель Г. Общая микробиология. – М.: Мир, 1986.

4. Нетрусов А.И. Практикум по микробиологии. – М.: Изд. центр «Академия», 2005.

5. Грин Н., Стаут У., Тейлор Д. Биология в 3 т. – М.: Мир, 1996.

6. Курсанов Л.И., Наумов Н.А., Красильников Н.В. Определитель низших растений. Т. 3. Грибы. – М.: Советская наука, 1954.

Научные руководители: В.В. КОРЧАГИНА, Л.В. КОЗАДАЕВА, Научный консультант: Е.С. ЗУБКОВА,

Гимназия № 14, г. Одинцово, Моск. обл.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector