Маркеры пролиферации клеток. Смешенные маркеры клеток.

Маркеры пролиферации клеток. Смешенные маркеры клеток.

Белок Ki-67 — самый широко используемый маркер пролиферации как в нормальных, так и в опухолевых клетках. Впервые описан в 1983 году в Институте патологии в немецком городе Киль, где и были синтезированы первые антитела к нему в 67 лунке планшета [1]. 

Негистоновый белок Ki-67 кодируется геном MKI67. Он участвует в клеточном цикле, вовлекаясь в биогенез рибосом, организацию гетерохроматина и разделение митотических хромосом.

Полный спектр его функций все еще неясен.

Трудности исследования Ki-67 связаны с отсутствием гомологичных белков с уже известной функцией, а также с его большой молекулярной массой и высокой чувствительностью к разрушению протеазами [2].

Ki-67 обнаруживается в ядрах клеток во все активные фазы клеточного цикла: G1, S, G2, M. Ki-67 весьма «ветреный» белок: его распределение и количество вариабельно и зависит от конкретного момента жизни клетки (рис. 1) [3].

От фазы G1 к фазе М его количество увеличивается, достигая максимума во время метафазы митоза. В самом начале фазы G1 локализация Ki-67 совпадает с локализацией сателлитной ДНК в центромерах и теломерах хромосом. Далее при прогрессии фазы G1 эта колокализация исчезает.

К середине фазы G1 белок Ki-67 начинает выявляться в ядрышках, затем, в фазу G2, — и в ядрышках, и в кариоплазме. .

Маркеры пролиферации клеток. Смешенные маркеры клеток. Рисунок 1. Локализация Ki-67 на протяжении всего клеточного цикла Антитела к Ki67 (зеленый) и DAPI для визуализации ДНК (синий). В фазу митоза Ki-67 покрывает конденсированные хромосомы в качестве основы перихромосомного слоя. Когда клетки вступают в раннюю фазу G1, маленькие точечные структуры Ki-67 покидают деконденсированные хромосомы. Затем в ходе G1-фазы Ki-67 перемещается на периферию ядрышка, покрывая перинуклеолярный гетерохроматин [3].

Но все меняется, когда происходит митоз. В профазу Ki-67 в виде тонкой сети связан с конденсированным хроматином. В метафазу эта сетчатая структура окружает уже отдельные хромосомы. После разрушения ядерной мембраны часть Ki-67 распределяется диффузно в цитоплазме. В анафазу и телофазу митоза количество Ki-67 в клетках начинает быстро снижаться.

При переходе клетки после митоза в фазу G0 Ki-67 быстро подвергается катаболизму (путем опосредованной протеасомами деградации) и перестает выявляться в ядрах интерфазных клеток [4].

Ki-67 также обнаруживается при гиперэкспрессии p53 и p21, вызванной блокированием репликации или повреждением ДНК [2].Длительное время Ki-67 определялся как иммуногистохимический маркер, отражающий лишь активность пролиферации.

Это обусловило его важную роль в классификации злокачественных новообразований, таких как рак молочной железы, нейроэндокринные опухоли и лимфомы [5].

Определение индекса Ki-67 является более чувствительным методом для оценки пролиферативной активности, чем подсчет фигур митоза, поскольку позволяет выявлять клетки во всех активных фазах клеточного цикла и уменьшает вероятность неверной интерпретации микроскопической картины.

Переход патоморфологов в своей рутинной практике к расчету индекса пролиферации по уровню Ki-67 стал начальным этапом движения в сторону стандартизации и объективизации гистологических исследований. От двоичной системы «есть экспрессия» (1) / «нет экспрессии» (0) фокус сместился к оценке степени выраженности маркера в исследуемых образцах.

Индекс пролиферации — это процент клеток с ядерным окрашиванием от общего числа опухолевых клеток. Интенсивность и тип экспрессии маркера не учитывается (перинуклеолярный, нуклеоплазменный, перихромосомный).

Подсчет включает в себя не менее 500 опухолевых клеток (в идеале не менее 1000) не менее чем в 3 полях зрения при увеличении ×400.

В случае гетерогенности опухоли выбирают участки с наибольшей митотической активностью [6].

Общие характеристики уровня пролиферации для опухолевой ткани различных локализаций:

  1. < 10 % — низкий уровень;
  2. 10–20 % — пограничные опухоли;
  3. > 20 % — высокий.

В лабораториях используют антитела к Ki-67 клонов MIB-1 (для работы с материалом, полученным от человека, крупного рогатого скота, собак, овец и лошадей) и MIB-5 (для работы с материалом, полученным от крыс и других грызунов). Эти структуры показали более высокое сродство к эпитопу антигена Ki-67 в условиях формалиновой фиксации доставляемого материала [2].

Особую значимость этот маркер приобрел при патоморфологическом исследовании опухолей молочной железы. Гистологический подтип гормон-позитивных люминальных опухолей определяется на основании индекса Ki-67: подтип А (Ki-67 < 20 %) и подтип В (Ki-67 ≥ 20 %) (рис. 2) [6]..

Маркеры пролиферации клеток. Смешенные маркеры клеток. Рисунок 2. Активность пролиферации в образцах рака молочной железы Опухоли с индексом Ki-67 < 10 %, 10–20 % и > 20 % соответственно [6].

Прогностические горизонты применения маркера Ki-67 постоянно расширяются. Уточняется и дополняется его значение в предикции результатов лекарственной терапии опухолей.

Например, для рака молочной железы, который не отвечает на химиотерапию, повышение Ki-67 является плохим прогностическим маркером.

Напротив, в опухолях, реагирующих на химиотерапию, этот эффект не наблюдается, и даже присутствует корреляция увеличения Ki-67 с улучшением прогноза. 

Объяснение этому феномену можно логически вывести из понимания биологии каждого подтипа опухоли:

  1. Низко пролиферирующие опухоли хуже реагируют на химиотерапию, но в любом случае имеют хороший прогноз ввиду меньшей агрессивности (низкий Ki-67 — хороший результат).
  2. В тех высокопролиферирующих опухолях, которые чувствительны к терапии, высокий Ki-67 связан с большей частотой достижения полного патоморфологического ответа (pCR) и улучшением выживаемости (высокий Ki-67 — хороший результат).
  3. Но в высокопролиферирующих опухолях, которые при этом также являются резистентными к химиотерапии, увеличение индекса Ki-67 связано с уменьшением выживаемости: активно пролиферирующие клетки обусловливают агрессивное поведение опухоли, не контролируемое химиопрепаратами (высокий Ki-67 — плохой результат) [6].

В настоящее время методы иммуногистохимической детекции Ki-67 представляются в виде несколько упрощенной картины, как будто Ki-67 «включен» во время клеточной пролиферации (характерное коричневое окрашивание ядер) и «выключен» во время покоя и старения клетки (нет окрашенных ядер, может обнаруживаться в цитоплазме).

Но важное клиническое значение может иметь также интерпретация факта неуклонного роста экспрессии Ki67 от фазы G1 к фазе М. Также выяснено, что чем дольше клетка находится в состоянии покоя, тем ниже будет уровень Ki-67 при повторном входе в клеточный цикл [5,7].

Для анализа этих данных требуются методы системной биологии с выведением формулы, позволяющей учесть все характеристики Ki-67 в доставленном материале. Это позволит более точно отразить пролиферативный статус клеток и определить клиническую стратегию. Ключевым моментом эффективности таких многофакторных алгоритмов является, несомненно, точность «сырых» данных.

И здесь мы уже говорим о стандартизации патоморфологического исследования, которое в современной практике должно базироваться на цифровой обработке гистологических изображений.

Источники:

  1. Gerdes J., Schwab U., Lemke H., Stein H. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation. Int J Cancer. 1983;31(1):13-20.
  2. Sun X., Kaufman P.D. Ki-67: more than a proliferation marker. Chromosoma. 2018;127(2):175–186.
  3. Matheson T.D., Kaufman P.D. The p150N domain of chromatin assembly factor-1 regulates Ki-67 accumulation on the mitotic perichromosomal layer. Mol Biol Cell. 2017;28(1):21–29.
  4. Kreipe H. [Ki67: biological intertumor variance versus variance of assay].Pathologe. 2018;39(Suppl 2):272-277.
  5. Cidado J.et al. Ki-67 is required for maintenance of cancer stem cells but not cell proliferation. Oncotarget. 2016;7(5):6281–6293.
  6. Denkert C. et al. Strategies for developing Ki67 as a useful biomarker in breast cancer. Breast.2015;24 Suppl 2:S67-72.
  7. Miller I.et al. Ki67 is a Graded Rather than a Binary Marker of Proliferation versus Quiescence. Cell Rep. 2018;24(5):1105–1112.e5.

Иммуногистохимическое определение индекса пролиферации по экспрессии Ki-67 в медицинской лаборатории "Оптимум" в Сочи (Адлер)

Маркеры пролиферации клеток. Смешенные маркеры клеток.Иммуногистохимическое исследование пролиферативной активности по экспрессии Ki-67 (1 антитело) проводится для выявления в организме человека активного опухолевого роста. Если рак уже был выявлен ранее, то методика позволит выяснить, насколько хорошо он будет реагировать на паллиативное лечение. Ki-67 — это белковая структура, которая находится в раковых клетках.

Экспрессия Ki-67 помогает выявить раковые клетки в активной фазе клеточного цикла (G1-, S-, G2- и M-фазы). Только в период G0 отсутствует Кi-67. Активно пролиферирующие раковые клетки представляют «фракцию роста» опухоли. Пролиферативная активность является показателем определения фенотипа новообразования, определяющая скорость роста опухоли, риск метастазирования и ответ на терапию. Изменение пролиферативной активности влияет на течение и исход онкологического заболевания.

Читайте также:  Витабакт - инструкция по применению, отзывы, аналоги и формы выпуска (капли глазные 0,05%) лекарственного препарата для лечения конъюнктивита, блефарита у взрослых, детей (в том числе грудничков и новорожденных) и при беременности

Индекс пролиферации при исследовании экспрессии Ki-67— это цифровое значение степени активности опухолевой прогрессии. Выражается в процентном соотношении. Суть определения этого значения основана на том, что все онкологические структуры в организме имеют интенсивный рост и деление. Этот показатель намного выше, чем процессы пролиферации в других органах, причем не только в физиологическом состоянии, но и при воспалениях. Получается, что при значительном увеличении индекса пролиферации, в организме имеется активный злокачественный рост.

В то же время, при наличии опухоли, существуют референсные показатели для каждого онкологического заболевания. При превышении этого порога, рак будет плохо отвечать на консервативное лечение. Наоборот, если показатель низкий, то можно рассчитывать, что стабилизация болезни произойдет на фоне специфической неоперативной терапии.

Маркеры пролиферации клеток. Смешенные маркеры клеток.Показаниями к проведению иммуногистохимического исследования пролиферативной активности по экспрессии Ki-67 являются:

  • рак любой локализации;
  • подозрение на наличие опухолевого роста в организме;
  • множественные доброкачественные образования с целью исключения озлокачествления;
  • опухоль молочной железы для оценки возможности лечения гормонами.

Материалом для иммуногистохимического исследования пролиферативной активности служит биоптат любого ракового образования. Если опухоль только предполагается, то берется один кусочек с каждого подозрительного участка. Необходима прямая биопсия. Проводится либо щипцами, либо секторальной резекцией части органа. Пункционный биоптат не пригоден.

Материал заливают формалином, отправляют в гистологическую лабораторию. Готовится стандартный препарат с помощью микротомирования после парафинизации.

Он фиксируется на предметном стекле и окрашивается маркером для определения белка Ki-67. В результате окрашивания белок становится отличим от других тканей.

Врачу-гистологу под микроскопом предстоит подсчитать количество окрашенных фрагментов.

Маркеры пролиферации клеток. Смешенные маркеры клеток.Заключение врача является важной информацией для лечащего специалиста. Первый вопрос, на который даст ответ гистолог — есть или нет экспрессия Ki-67.

Если окрашивание не произошло, то ответ отрицательный. Опухоли в организме нет.

При положительном варианте проводится подсчет окрасившихся клеток по сравнению с неокрашенными. Результат умножается на 100 и выражается в процентах. Этот показатель врач также включает в ответ. Показатели процентной активности для каждой опухоли индивидуальные, но чем выше процентное соотношение, тем агрессивнее новообразование.

Ki-маркер пролиферативной активности

  • Исследование цитологических препаратов эпителия шейки матки, проводимое с использованием меченных флюоресцирующими веществами антител, которое позволяет выявить наличие и оценить степень присутствия на атипичных клетках специфичного маркера активности процессов клеточного деления.
  • Синонимы русские
  • Маркер пролиферации ki-67, оценка экспрессии онкопротеина ki-67 иммуноцитохимическим методом.
  • Синонимы английские
  • Marker Of Proliferation Ki-67, proliferation-related Ki-67 antigen, Ki-67 immunocytochemistry in liquid based cervical cytology.
  • Метод исследования
  • Жидкостная цитология.
  • Какой биоматериал можно использовать для исследования?
  • Аспират из полости матки.
  • Как правильно подготовиться к исследованию?
  • Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Одна из отличительных особенностей клеток злокачественных опухолей — способность к неограниченному делению, которое является основным фактором их биологической агрессивности. Процесс деления сопровождается появлением в клетке определенных белков, один из которых – ki-67.

Он не продуцируется в клетках в состоянии покоя, что позволяет использовать его в том числе как маркер злокачественной трансформации.

Исследование количества белка ki-67 в опухолевых клетках используется в диагностике и определении прогноза большинства злокачественных новообразований, в том числе его можно проводить в процессе скрининга на рак шейки матки.

Введение научно обоснованных программ скрининга позволило значительно снизить смертность от рака шейки матки, поэтому в настоящее время данный подход является одним из самых эффективных способов профилактики этого онкологического заболевания.

Чаще всего скрининг включает в себя определение маркеров вируса папилломы человека (доказана связь рака шейки матки с ВПЧ-инфекцией) и цитологическое исследование.

При этом диагностические возможности традиционного цитологического исследования весьма ограничены – по некоторым данным, его чувствительность составляет до 85%, он во многом лишен стандартизации, а достоверность результатов часто страдает по причине некачественного приготовления материала.

В настоящее время золотым стандартом для диагностики патологии шейки матки считается метод жидкостной цитологии. Материал для исследования забирается цитощеткой, которая затем помещается в емкость со специальным консервирующим раствором.

Он предотвращает преждевременное высыхание клеток, способствует сохранению их морфологических и молекулярно-биологических свойств, а также минимизирует содержание в образце постороннего материала (слизи, клеток периферической крови, элементов воспаления и разрушенных клеток).

В дальнейшем с помощью специального оборудования изготавливается однослойный цитологический препарат, который врач-цитолог изучает под микроскопом. Характер патологических изменений, выявленных при цитологическом исследовании, оценивается в соответствии с общепринятой международной системой Bethesda – она представляет собой набор аббревиатур, используемых для обозначения цитологических заключений:

  • NILM — Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy (отрицательные в отношении интраэпителиальных поражений или злокачественности — норма);
  • AGC — Atypical Glandular Cells (атипичные клетки железистого эпителия);
  • ASC-US — Atypical squamous cells of undetermined significance (атипичные клетки плоского эпителия неясного значения);
  • ASC-H — Atypical squamous cells cannot exclude HSIL (атипичные клетки плоского эпителия, не позволяющие исключить внутриэпителиальные поражения высокой степени злокачественности);
  • LSIL — Low-grade squamous intraepithelial lesion (внутриэпителиальные поражения низкой степени злокачественности);
  • HSIL — High-grade squamous intraepithelial lesion (внутриэпителиальные поражения высокой степени злокачественности);
  • AIS — Adenocarcinoma in situ (аденокарцинома in situ).

При выявлении по данным цитологического исследования интраэпителиальных изменений плоского эпителия низкой степени (LSIL), атипичных клеток плоского эпителия неясного значения (ASC-US) и атипичных клеток железистого эпителия (AGC) рекомендуется дополнительное обследование на содержание в атипичных клетках белка ki-67. Для анализа используется тот же материал, что и для жидкостной цитологии (однократное взятие биологического материала для исследования методом жидкостной цитологии позволяет проводить также и дополнительные диагностические исследования без повторных гинекологических манипуляций). Содержание белка ki-67 в атипичных клетках определяется с помощью иммуноцитохимического исследования. Для этого из взвеси клеток готовят мазки, которые затем окрашивают раствором антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к ki-67. Если в опухолевой клетке присутствует искомый белок, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежит в основе интерпретации результатов иммуноцитохимического анализа.

Для чего используется исследование?

  • Для выявления в атипичных клетках цервикального эпителия маркера пролиферативной активности, который позволяет с высокой вероятностью подтвердить или исключить злокачественную трансформацию.

Когда назначается исследование?

  • При выявлении по результатам цитологического исследования цервикального мазка определенных изменений (по классификации Bethesda): LSIL, ASC-US и AGC.

Что означают результаты?

В норме Ki‑67 определяется только в клетках нижних слоев плоского эпителия слизистой оболочки наружной части шейки матки. При дисплазии клетки, экспрессирующие Ki‑67, появляются в верхних слоях эпителия; данный маркер может экспрессироваться в значительной части клеток в очагах незрелой плоскоклеточной метаплазии.

Что может влиять на результат?

Соблюдение правильности техники взятия биологического материала для исследования.

Важные замечания

  • При необходимости взятия биоматериала для нескольких исследований материал для данного анализа берется в первую очередь.
  • Исследование на ki-67 необходимо комбинировать с определением в атипичных клетках еще одного молекулярного маркера – белка р16INK4a. Именно их комбинация является высокочувствительным диагностическим методом. Белок р16 обладает антипролиферативной активностью, в нормальной клетке экспрессия ki-67 и р16 взаимно исключают друг друга. Выявление одновременной экспрессии в клетке и ki-67, и р16 свидетельствует о нарушении клеточного цикла и коррелирует с индуцированной вирусом папилломы человека злокачественной трансформацией.
  • Интерпретация результатов исследования должна проводиться исключительно врачом соответствующей специальности.

Также рекомендуется

  • Скрининг рака шейки матки: жидкостная цитология c ВПЧ-тестом (Roche Cobas 4800)
  • Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию
  • Жидкостная цитология. Исследование соскоба шейки матки и цервикального канала (окрашивание по Папаниколау)
  • Иммуноцитохимическое исследование соскобов шейки матки с определением белка р16
  • Иммуноцитохимическое исследование соскобов шейки матки с определением белка р16 и Ki 67 (включая жидкостную цитологию — окрашивание по Папаниколау)
  • Human Papillomavirus низкого (HPV 6, 11, 44) и высокого (HPV 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) канцерогенного риска, ДНК (выявление, генотипирование и количественное определение) [реал-тайм ПЦР]
  • Антиген плоскоклеточной карциномы (SCCA)
  1. Кто назначает исследование?
  2. Гинеколог, онколог.
  3. Литература
  1. Диагностическая ценность иммуноцитохимического метода при ВПЧ-ассоциированных заболеваниях шейки матки. А. Р. Хачатурян, Е. К.Орехова, Г. Х. Толибова, Т. Г. Траль. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск  3,  том  LXIV,  2015. С. 47-51.

  2. Скрининг рака шейки матки. Взгляд клинициста. Ю. Г. Паяниди, Л. Г. Комарова, В. П. Козаченко, В. В. Кузнецов, А. Ю. Кашурников, К. И. Жорданиа. Онкогинекология, №1, 2013. С. 35-41.

  3. Sahebali S, Depuydt CE, Segers K, Vereecken AJ, Van Marck E, Bogers JJ. Ki-67 immunocytochemistry in liquid based cervical cytology: useful as an adjunctive tool? Journal of Clinical Pathology. 2003;56(9):681-686.

Читайте также:  Доктор мом - инструкция по применению, отзывы, аналоги и формы выпуска (пастилки или леденцы, сироп, мазь) лекарственного препарата для лечения кашля у взрослых, детей и при беременности

Послеоперационный прогноз при акромегалии: роль иммуногистохимических маркеров | Марова | Проблемы Эндокринологии

В настоящее время транссфеноидальная аденом- эктомия — метод выбора при лечении акромегалии. Однако в 40—60% случаев удаление аденомы не приводит к полной ремиссии заболевания, что требует дополнительной медикаментозной и лучевой терапии.

Частота ремиссии после хирургического лечения акромегалии зависит от многих факторов. К ним в первую очередь относят размер и характер роста опухоли.

Макроаденомы, а также опухоли с экстраселлярным (особенно параселлярным) распространением гораздо сложнее удалить полностью, поэтому эффективность транссфеноидальной аденомэктомии у таких больных значительно снижается [7].

Исход хирургического лечения акромегалии определяется также гормональной активностью аденомы и возрастом пациента [5, 7].

Невысокая эффективность аденомэктомии при акромегалии привела к поиску дополнительных прогностических факторов, которые позволили бы отличать опухоли с высоким риском прогрессии и рецидивирования от менее агрессивных аденом и применять более дифференцированный подход к лечению больных. В качестве таких факторов были предложены белки, продуцируемые опухолевыми клетками, — маркеры опухолевой прогрессии [15].

Для оценки биологического поведения аденом гипофиза у больных акромегалией в данной работе были выбраны наиболее характерные для новообразования свойства: прогрессирование роста, ангиогенез и злокачественный потенциал.

Цель работы — с помощью иммуногистохимического метода исследовать маркеры опухолевой прогрессии (Ki- 67, CD31 и галектин-3) в клетках аденом гипофиза у больных акромегалией, перенесших транссфеноидальную аденомэктомию, и изучить связь этих маркеров с факторами неблагоприятного послеоперационного прогноза.

Материалы и методы

Проанализированы истории болезни 39 пациентов с акромегалией (30 женщин и 9 мужчин) в возрасте от 17 до 65 лет, которые после обследования были оперированы и наблюдались в клинике ГУ ЭНЦ РАМН с 1997 по 2004 г.

У всех больных была подтверждена активная стадия акромегалии, визуализирована аденома гипофиза и в качестве основного метода лечения проведена транссфеноидальная аденомэктомия.

Визуализацию аденом гипофиза проводили с помощью МРТ (у 37 больных) и КТ (у 2 больных), оценивали размер аденомы и ее склонность к инфра-, супра- или параселлярному росту.

У всех пациентов были изучены предоперационные данные: жалобы, анамнестические сведения, результаты офтальмологического обследования, уровень базального СТГ.

Кроме того, у 30 больных оценивали результаты подавления СТГ в ходе орального глюкозо-толерантного теста (ОПТ), у 14 больных — уровень ЙРФ-1 (результаты выражались в процентном содержании от половой и возрастной нормы) и у 29 больных — уровень пролактина (ПРЛ) крови.

Транссфеноидальную аденомэктомию проводили трансназальным доступом нейрохирурги ЭНЦ РАМН (К. С. Полещук, Ю. К. Трунин, В. Л. Богданов, А. Н. Шкарубо, В. В. Воскобойников). Операционный материал исследовали с помощью иммуногистохимического окрашивания.

Иммуногистохимический анализ проводили стрептавидин- биотин-пероксидазным методом по общепринятой схеме на парафиновых срезах, которые были получены из ткани 39 аденом, удаленных во время операций.

Реакцию выполняли с помощью тест-системы OmniTaqs Universal Streptavidin/Biotin Immunoperoxidase Detection System фирмы «Thermo Shandon».

Для иммуногистохимического окрашивания использовали моноклональные мышиные антитела фирмы «NOVO CASTRA Laboratories Ltd» к галектину-3 и моноклональные мышиные антитела фирмы «Dakocytomation» к CD31 и к Ki-67 (MIB-1).

Ki-67 — белок с молекулярной массой 360 кД. Ki-67 экспрессируется делящимися клетками во все активные фазы клеточного цикла (Gl, G2 и М), отсутствует в клетках в период покоя (G0) и поэтому считается наиболее специфическим маркером опухолевой пролиферации [17].

CD31, также известный как РЕСАМ-1 (эндотелиальная молекула адгезии тромбоцитов), имеет молекулярную массу 130 кД и относится к классу иммуноглобулинов. CD31 является чувствительным и специфичным антителом к антигенам сосудистой стенки, что позволяет успешно использовать его для определения плотности микрососудов в ткани.

Галектин-3 представляет собой белок с молекулярной массой 31 кД, который связывается с углеводсодержащими компонентами клеток и таким образом обеспечивает их взаимодействие [4]. Га- лектин-3 способствует опухолевой прогрессии: угнетает апоптоз, усиливает ангиогенез новообразования и вызывает его метастазирование [8].

Галектин-3 предложили использовать в качестве маркера злокачественного потенциала, поскольку он выявлялся почти в 100% случаев рака щитовидной железы [10, 19].

Галектин-3 — необлигатный маркер злокачественного опухолевого роста, он может присутствовать в клетках аденом гипофиза, которые, хотя и крайне редко метастазируют, могут вести себя агрессивно: инфильтрировать окружающие ткани и рецидивировать после хирургического удаления.

Для верификации гормонов, секретируемых аденомами, использовали моноклональные кроличьи антитела фирмы «Dakocytomation» к гормонам СТГ и ПРЛ. Гормон роста выявлялся во всех аденомах.

В качестве контроля при проведении иммуногистохимической реакции использовали секционный материал гипофиза людей, не имевших нейроэндокринной патологии. Материал получен в 2000 г.

из Судебно-медицинского морга № 2 Москвы'.

Анализировали результаты хирургического лечения всех больных. Оценивали уровни базального СТГ и СТГ/ОГГГ, ПРЛ в раннем послеоперационном периоде. Кроме того, были рассмотрены результаты исследования базального СТГ (у 37 больных), СТГ/ОГГГ (у 31 больного), а также ИРФ-1 (у 11 больных) через год после хирургического лечения.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы Statistica, версия 5.5. При анализе данных оценивали следующие параметры: среднее и стандартное отклонение, или медиану и процентили, для описания количественных признаков (в зависимости от вида их распределения); доли — для описания качественных признаков.

При анализе данных сравнивали изучаемые признаки в группах больных с положительной и отрицательной иммуногистохимической реакцией на определяемый маркер. Сравнение групп по количественному признаку проводили с помощью критерия Манна—Уитни, по качественному признаку — с помощью двустороннего критерия Фишера.

Различия показателей считали статистически значимыми при р

Ki-67 (MIB-1) экспрессия, иммуногистохимическое исследование (оценка пролиферативной активности по экспрессии Ki-67 (MIB-1); Ki-67 (MIB-1) by Immunohistochemistry, IHC)

Метод определения Гистологическое исследование биоптатов опухоли согласно гистологической классификации ВОЗ с окрашиванием гематоксилином-эозином. Иммуногистохимическое исследование индекса пролиферативной активности с применением моноклональных антител к Ki-67 (MIB-1) (пероксидазный и авидин-биотиновый методы).

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация

Комплексное исследование биоптатов, включающее морфологическое описание и оценку пролиферативной активности клеток, которое используют в целях диагностики − определения биологического потенциала новообразований человека.

В современной онкоморфологии ведется поиск критериев, позволяющих верифицировать степень гистологической и биологической злокачественности с максимальной объективностью.

Учитывая, что пролиферативная активность клеток опухолей человека коррелирует со степенью их гистологической и биологической злокачественности, в последние годы ИГХ-определение индекса пролиферации при исследовании экспрессии Ki-67 (MIB-1) является необходимым рутинным исследованием при онкологических заболеваниях. 

Специфичным и оптимальным для широкого использования в патологоанатомической практике маркером пролиферации является антиген Ki-67. Ядерный антиген Кi-67 впервые описан Gerdes и соавторами в 1983 году, он состоит из двух полипептидных цепей с молекулярной массой 345 и 395 кДа.

Это основная часть нуклеарного матрикса, в течение интерфазы ассоциированная с хромосомами фазы митоза. Ki-67−димерная молекула, имеющая тесную связь с 10-й хромосомой, конкретная роль этого протеина в процессе клеточного деления до сих пор точно не выяснена.

Экспрессия Кi-67 позволяет выделить опухолевые клетки, находящиеся в активной фазе клеточного цикла, на всём его протяжении (G1-, S-, G2- и M-фазы). Кi-67 отсутствует только в G0-периоде. Активно пролиферирующие опухолевые клетки представляют собой «фракцию роста» новообразования.

Пролиферативная активность является ведущим фактором как в механизме злокачественной трансформации клеток, так и в биологическом поведении уже возникших опухолей.

Это одна из наиболее важных характеристик фенотипа опухоли, в значительной степени определяющая скорость роста новообразования, риск метастазирования, потенциальный ответ на лечебные мероприятия и исход онкологического заболевания. Многие факторы, влияющие на течение и исход онкологических заболеваний, свое патогенетическое действие на опухоль опосредуют через изменение пролиферативной активности. 

Читайте также:  Полудан - инструкция по применению, отзывы, аналоги и формы выпуска (порошок для приготовления капель в нос и глазных, уколы в ампулах для инъекций) лекарства для лечения гриппа, простуды и конъюнктивита у взрослых, детей и при беременности

Оценивать пролиферативную активность опухолевых клеток необходимо не только для определения биологических характеристик опухолей, но и для селективного подхода к выбору терапии. 

Индекс пролиферативной активности в различных опухолях имеет разные значения, являясь при этом независимым прогностическим признаком, определяющим клиническое течение и прогноз заболевания.

При Ki-67 менее 15% опухоль считается менее агрессивной, при показателе более 30% опухоль считается высоко агрессивной. При высоком уровне (выраженном в %) Ki-67 опухоль с более высокой вероятностью ответит на химиотерапевтическое лечение.

При низком его уровне опухоль, например, молочной железы, при определённых условиях лучше отреагирует на гормонотерапию.

Сетевое издание Современные проблемы науки и образования ISSN 2070-7428 "Перечень" ВАК ИФ РИНЦ = 0,940

1

Боровиков И.О. 1

Холина Л.А. 1

Кравцова Е.И. 1

Авакимян В.А. 1

Никогда Ю.В.

1
1 ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Минздрава России
Проведенный анализ с определением типа вируса папилломы человека, вирусной нагрузки, онкобелка Е7, маркеров пролиферации (p16ink4α и Ki-67) и соотношения метаболитов эстрогенов (2-ОНЕ1/16-αОНЕ1) у пациенток с латентными формами ПВИ и цервикальными интраэпителиальными неоплазиями легкой степени выявили значительные отличия между группами. Основными типами вируса папилломы человека при латентных формах ПВИ, как и при цервикальных неоплазиях, являлись типы 16 (53,7±2,2%), 18 (19,4±2,1%), 31 (11,5±1,7%) и 51 (15,1±1,9%). При этом в группе пациенток с CIN I высокая вирусная нагрузка встречалась в среднем в 2 раза чаще, чем при латентных формах ПВИ. C появлением клинических признаков папилломавирусной инфекции экспрессия онкобелка Е7 возрастает в 5 раз, а гиперэкспрессия маркеров пролиферации p16ink4α и Ki-67 в 3 раза. А сочетание низкого коэффициента 2-ОНЕ1/16α-ОНЕ1 (менее 1,5) с положительным тестом на онкобелок Е7 и коэкспрессией биомаркеров p16ink4D и Ki-67 является прогностически неблагоприятным фактором в плане утяжеления пролиферативных процессов в шейке матки.

латентная форма папилломавирусной инфекциицервикальная интраэпителиальная неоплазия

1. Аполихина И.А. Папилломавирусная инфекция гениталий у женщин. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2008. – 32 с.
2. Башмакова М.А., Савичева А.М. Папилломавирусная инфекция. – М. : Медицинская книга; Н. Новгород : Изд-во НГМА, 2012. — 21 с.
3. Васильев М.М., Богатырёва И.И., Котова Л.К. Современные аспекты папилломавирусной инфекции урогенитального тракта. — М., 2014.
4. Папилломавирусная инфекция – клиника, диагностика, лечение : пособие для врачей / Молочков В.А., Киселев В.И., Рудых И.В., Щербо С.Н. — М., 2008. — 32 с.
5. Патология шейки матки и генитальные инфекции / под ред. проф. В.Н. Прилепской. – М.: МЕДпресс-информ, 2012. – 383 с.
6. Роговская С.И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки (руководство практикующего врача). – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2015. – 144 с.
7. Bosch F., Manos M., Munoz N. Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer: A worldwide perspective // J. Natl. Cfncer Inst. — 2009. — 87:796-802.
8. Brown D., Shew M., Qadadri B. A longitudinal study of genital human papillomavirus infection in a cohort of closely followed adolescent women // J Infect Dis. – 2015. — 191: 2: 182—192. 9. Gross G., Jablonska S., Pfister H. et al. Genital Papillomavirus Infections Modern Diagnosis and Treatment. — Spinger-Verlag, 2013. — 449 p.
10. Kutsenko I.I., Kravtsova E.I. et al. Peculifrities of the development of chronic pelvic pain related components in peritoneal endometriosis. // Медицинский вестник Северного Кавказа. — 2016. Т. 11. — № 2. — С. 189-191.

Распространённость вируса папилломы человека (ВПЧ) чрезвычайна велика, у женщин тот или иной тип ВПЧ присутствует у 40-80% обследованных, однако клинически выраженные поражения бывают у 1-3%, субклиническое течение — у 13-34% [2]. В остальных случаях имеет место латентная инфекция. В настоящее время успехи молекулярной биологии дают нам возможность как выявлять присутствие вируса папилломы человека в пораженных тканях, так и произвести их разделение на типы. Сейчас доказана связь рака шейки матки с определенными типами вируса папилломы человека. Ряд исследователей полагает, что 10-15% всех раков у человека связаны с папилломавирусами [1; 5; 12]. Цервикальные интраэпителиальные неоплазии (CIN) – наиболее частые заболевания, ассоциированные с папилломавирусной инфекцией (ПВИ), являются предраковыми поражениями шейки матки [2; 6]. Персистенция вируса с длительной активной экспрессией вирусных онкогенов инициирует многостадийный процесс, в результате которого клетки эпителия шейки матки претерпевают изменения, способствующие опухолевой прогрессии [1; 3]. При этом именно латентная форма ПВИ представляет наибольшую актуальность в начальном аспекте патогенеза, поскольку именно понимание механизма возникновения и прогрессирования процесса на данной стадии дает нам возможность в последующем разработать наиболее эффективную и «щадящую» терапию. При этом многие авторы приходят к выводу, что инфицирование эпителиальных клеток ВПЧ – необходимое, но недостаточное событие для возникновения цервикальных неоплазий [4; 5; 7]. В настоящее время в литературе обсуждаются различные иммунные и цитобиохимические, микробиологические нарушения в генезе предраковых заболеваний шейки матки [2; 8; 9]. Активно изучается состояние микробиоценоза цервико-вагинальной области и роль его нарушений в активации ВПЧ [4; 7]. Кроме того, велика роль экспрессии генов Е6 и Е7, кодирующих эти онкобелки эпителиальных клетках с интегрированной формой ВПЧ. Основным свойством этих белков является взаимодействие с продуктом гена Rb, с убиквитинизацией последнего и высвобождением из комплекса рRb-Е2F транскрипционного фактора Е2F, регулирующего клеточную пролиферацию [1; 8; 10]. Высокая активность фактора Е2F приводит к апоптозу в клетках, экспрессирующих Е7, и активизации синтеза ингибитора циклинзависимых киназ р16INK4A. В пролиферирующих HPV-инфицированных клетках существует механизм защиты от малигнизации путем подавления функций вирусных онкобелков за счет ингибиторов циклинзависимых киназ, в первую очередь р16INK4A. Однако, несмотря на высокий уровень р16INK4A, этот белок остается функционально неактивным, так как Е7 также активирует циклины А и Е, стимулирующие вход в S-фазу клеточного цикла. Это индуцирует анеуплоидию, вызывая амплификацию центриолей на ранних стадиях канцерогенеза [10]. Вышеперечисленные процессы, происходящие на локальном уровне, способствуют переходу бессимптомного ВПЧ-носительства в клиническую форму с последующей возможностью малигнизации.

Цель исследования: оценка прогностической ценности комплексного исследования с определением вирусной нагрузи и маркеров пролиферации у пациенток с латентными формами ПВИ и цервикальной интраэпителиальной неоплазией.

Материалы и методы

В ходе выполнения работы было обследовано 90 женщин с латентными формами ПВИ и 130 — с цервикальной интраэпителиальной неоплазией легкой степени (CIN I), находившихся на лечении в базовой акушерско-гинекологической клинике КубГМУ, женских консультациях № 1 и 4 г. Краснодара, Краевом перинатальном центре ГБУЗ ДККБ.

Диагноз ПВИ устанавливался на основании клинико-микробиологического и цитологического обследования (жидкостная цитология – ThinPrep®).

Диагностику инфицированности различными типами ВПЧ проводили с помощью ПЦР-тест-системы «АмплиСенс® FRT ВПЧ ВКР Генотип» (Россия) (набор реагентов для выявления и генотипирования ВПЧ высокого канцерогенного риска 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58 и 59 типов).

Определение маркера p16 ВПЧ ВКР проводили с помощью набора реагентов для иммуноцитохимического исследования «Cintec-Цитология» компании MTM laboratries AG (Германия). Соотношения метаболитов 2-ОНЕ1/16-αОНЕ1 в моче определяли с использованием тест-системы ESTRAMET 2/16 ELISA (конкурентный метод твердофазного иммуноферментного анализа).

Статистическую обработку данных проводили в соответствии с методами, принятыми в вариационной статистике, с использованием свободного программного обеспечения – системы статистического анализа R (R Development Core Team, 2008, достоверным считали различие при р0,05).

Кроме качественного типирования вируса папилломы человека, изучали количественную вирусную нагрузку основных его высококанцерогенных типов. Оценка вирусной нагрузки 16, 18 31 и 51 типов ВПЧ (в случае их обнаружения). Отобрано в общей сложности 206 пациенток (84 с латентной формой ПВИ, 122 с CIN I).

Высокой вирусная нагрузка считалась в концентрации ВПЧ >5 lg, средняя (3-5 lg) и низкая (

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector