Методы исследования в гистологии. Подготовка препаратов к микроскопии.

Методы исследования в гистологии. Подготовка препаратов к микроскопии. Цитология и гистология — в чем отличия?

Отличия исследований

Если говорить о названных научных направлениях, то разница между ними будет ясна сразу:

  • Гистология – научное направление, занимающееся анализом строения ткани;
  • Цитология – научное направление, предметом исследования которого являются клетки.

У цитологии и гистологии в плане анализа есть определенные расхождения.

Первое – это метод оценки характеристик элементов клетки исследуемого биоматериала. Метод применим для выявления опухолей и неопухолевых патологий.

Второе являет собой метод диагностики лабораторной, предметом исследования которой являются образцы биоптата, то есть забранных в ходе манипуляции тканевых элементов.

Оба направления важны с чисто практической точки зрения: они дают врачу картину для постановки диагноза, предварительного либо окончательного, при различных патологиях. Широко применимы они и в онкологии.

Цитология

  • Проводят его, чтобы оценить морфологические спецификации элементов клеток тканей самых разных органов, а также жидкостей и разного рода выделений организма.
  • Проведение процедуры помогает медикам понять сущность диспластических и злокачественных преобразований конкретных клеток и на основании собранной информации поставить предварительный диагноз.
  • Метод имеет свои преимущества:
  • Он доступен;
  • Экономичен для пациента;
  • Не требует сложного дорогостоящего оборудования;
  • По длительности проведения укладывается в 60 минут;
  • Неинвазивен или малоинвазивен (здесь все зависит от выбранной врачом методики забора материала).

Согласитесь, перечисленные преимущества объясняют широкую популярность исследования, его охотно применяют, например, в рамках первичного обследования разных заболеваний.

Специфика изъятия материала стала основой следующей классификации исследования:

  • Дооперационная;
  • Интраоперационная.

Первая имеет следующие виды:

  • Эксфолиативная. Здесь объектом анализа становится отделяемое мочеполовых органов, мокрота, пот, моча, и др. Данная разновидность имеет один существенный недостаток – сохранность материала оставляет желать лучшего.
  • Абразивная. Объект исследования – соскобы с областей внутренних органов. Чтобы изъять материал, врач использует специальные инструменты. Данный подход позволяет хорошо сохраняться материалу, а значит, результат будет более четким.
  • Аспирационная. Используют методику тонкоигольной биопсии. Это дает врачу самые широкие возможности для доступа в любой орган. Данный способ нашел свое широкое распространение в диагностике опухолей молочной железы на ранней стадии их развития.

Одного только цитологического анализа, при всех его неоспоримых плюсах, недостаточно для постановки анализа окончательного. С помощью метода врач может констатировать наличие злокачественного новообразования, не более того. Существуют современные методики, благодаря которым предварительный диагноз ставится более точно и на основании его врач может спланировать лечебную тактику.

Несколько слов необходимо сказать о цитологическом исследовании в гинекологии. Здесь оно проявляет себя как метод высоко информативный, абсолютной безопасный и дающий врачу необходимую картину для начала лечения при наличии выявленной патологии.

Цитология мазка шейки матки – необходимая и обязательная мера в плане диагностики болезней половой сферы женщины.

Сама процедура не причиняет пациентке неудобств или беспокойства, ее проведение безболезненно и не занимает длительного времени.

Исследования гистологические

Данный вид исследования проводят с целью подтверждения или опровержения предварительного диагноза.

Объектом исследования становится материал (биоптат), взятый во время биопсии Прежде чем начать изучение биоптата, необходимо правильно подготовить его. Подготовка требует времени, поэтому результат анализа приходиться ждать несколько дней. С этим нужно мириться, так как само исследование высоко информативно и надежно с точки зрения правильности диагноза.

Лишь в случаях экстренных проводят срочные исследования, когда необходимо быстро принять решение о пересадке органа либо его удалении.

Посредством метода анализируют характер фрагмента ткани, а не отдельных клеток. Можно сказать о том, что сегодня данное исследование единственное, которое позволяет окончательно верифицировать опухолевые образования, в том числе онкологические.

Забор биоптата для последующего анализа производится следующими вариантами:

  • Щипковый – кусочки ткани врач откусывает специальными щипчиками;
  • Кюретаж – для выскабливания используют кюретку;
  • Биопсия пункционная – ткань забирают из разных локаций органа;
  • Биопсия эксцизионная – врач удаляет весь орган, чтобы затем провести его анализ, изучаются при этом отдельные фрагменты органа.

Как мы уже отметили, подготовка к исследованию занимает достаточно времени. Вначале биоптат помещают в парафин и делают мельчайшие срезы.

Затем срезы окрашивают и начинается этап микроскопии, т.е. изучения биоптата под микроскопом.

Исследователь оценивает разные аспекты, например, клеточное строение, взаимоотношение клеток в рамках слоя ткани и т.д.

Гистологическое исследование – метод, сопряженный с трудностями, и связан с различными техниками забора биоптата, подготовки его к анализу, способами микроскопии. Среди способов микроскопии выделяют:

  • Микроскопия в темном поле. Использование явления рассеивания света на границе двух объектов с разными показателями преломления.
  • Фазово-контрастная и интерференционная. В их основе – способность биологических структур изменять фазу проходящих через них лучей.
  • Поляризационная. В основании – свойство двойного лучепреломления структур в клетках и тканях.
  • Флюоресцентная (люминесцентная). В основе регистрация флюоресцирующих веществ, которая делает возможным изучать клетки и ткани при освещении ультрафиолетом или сине-фиолетовыми лучами.
  • Ультрафиолетовая. Использована абсорбция ультрафиолетовых лучей химическими структурами клеток.

Узнайте в клинике интегративной онкологии Onco.Rehab информацию, которая интересует Вас!

Гистология шейки матки | Университетская клиника

Гистологический анализ проводят для оценки состояния тканей шейки матки. Это метод исследования строения клеток под микроскопом. Сегодня гистология – это основной метод выявления доброкачественных опухолей, предраковых состояний и онкологии шейки матки.

Методы исследования в гистологии. Подготовка препаратов к микроскопии.Гистология шейки матки

Сдать материал на гистологию шейки матки, получить быстрые и точные результаты можно в медицинском центре «Университетская клиника».

Когда показана гистология шейки матки?

Гистологию проводят после первичной диагностики половых органов. Этот метод используют для подтверждения диагноза, который врач заподозрил во время осмотра в зеркалах, проведения УЗИ и кольпоскопии. Исследование позволяет отличить доброкачественные опухоли от рака.

Ткань для исследования забирают методом диагностического выскабливания или аспирационной биопсии. При этом биологические пробы берут из шейки и полости матки. Тест выявляет атипичные клетки и определяет стадию патологического процесса.

Гистологию шейки матки назначают по таким показаниям:

  •       признаки патологий во время осмотра в зеркалах;
  •       пораженные зоны шейки во время аппаратных исследований (УЗИ шейки матки, кольпоскопия);
  •       заражение вирусом папилломы человека (ВПЧ);
  •       плохие результаты цитограммы;
  •       кератоз плоского эпителия шейки матки;
  •       длительное лечение воспаления шеечного канала лекарственными препаратами;
  •       проведение полипэктомии;
  •       подозрение на лейкоплакию и истинную эрозию;
  •       очаги эндометриоза (разрастание эндометрия матки);
  •       выявление любых опухолей и наростов цервикального канала;
  •       появление признаков дисплазии шейки матки (первые изменения в клетках);
  •       внематочная беременность;
  •       кровотечения после наступления менопаузы;
  •       бесплодие, выкидыши, замершая беременность;
  •       нарушения менструального цикла (обильность, изменение цвета и консистенции выделений);
  •       наследственный фактор (рак шейки матки у близких родственниц).

Нарушение менструального цикла

Лечение опухоли назначают только после получения результатов  гистологического теста. Для оценки эффективности лечения, анализ проводится повторно. Это позволяет корректировать дозы и препараты.

Подготовка к гистологии

Чтобы получить объективный результат анализа, женщина должна подготовиться.

Врачи рекомендуют:

  • отказаться от половых контактов за 2 суток до исследования;
  • за 2-3 дня прекратить использование интимной косметики, тампонов, лубрикантов;
  • не проводить спринцевания минимум 5 суток;
  • за 3 суток прекратить введение вагинальных таблеток, свечей;
  • за 2 недели прекратить прием антибиотиков, гормональных препаратов;
  • интимную гигиену накануне желательно проводить под душем, а не в ванной.
Читайте также:  Неотложные состояния у беременных. Лечение эклампсии. Хлоргидропенический синдром.

Лучшее время для биопсии шеечного канала – 4-6 день после окончания менструации.

Противопоказания

Гистология шейки матки – это инвазивный метод диагностики. Забор даже небольшого участка тканей травмирует слизистую оболочку. Иногда врачи рекомендуют отложить анализ.

Гинекологи называют такие ограничения к проведению гистологии:

  • Во время месячных и беременности биопсию не проводят, кроме неотложных случаев;
  • Острая фаза половой инфекции также относительное противопоказание для забора материала. Провести процедуру лучше в стадии ремиссии;
  • При нарушении свертываемости крови процедуру проводят с осторожностью. Во время забора тканей должен присутствовать реаниматолог. Поэтому женщине следует обязательно предупредить гинеколога об этой проблеме.

Как берут гистологию шейки матки?

Забор тканей для гистологии проводит врач-гинеколог. Процедура состоит из нескольких этапов:

  • Этап 1. Женщина располагается в гинекологическом кресле или на кушетке. Предварительно врач проводит стандартный гинекологический осмотр в зеркалах. Это необходимо для выявления зоны поражения тканей. Именно из этих областей берут образцы на анализ.
  • Этап 2. Далее врач окрашивает ткани шеечного канала специальным реагентом (обычно раствор йода). Так как шейку матки выстилают несколько видов эпителия, они окрашиваются по-разному. Плоский эпителий имеет более светлый оттенок, а цилиндрический окрашивается в темный цвет.
  • Этап 3. На стыке разных типов эпителия (зона высокого риска) врач забирает фрагменты тканей. Для получения материала гинеколог использует один из медицинских инструментов. Может применяться полая игла, аспирационный шприц, радиоволновая петля или электронож. Все инструменты должны быть стерильны. Биопсия с помощью радиоволновой петли наименее травматична, поскольку не вызывает кровотечений.
  • Этап 4. После забора тканей травмированный участок обрабатывают антисептиком. Обработку выполняют, чтобы предотвратить развитие инфекции. Также врач принимает меры для остановки кровотечения, если ткани забирают иглой или шприцом. Если остановить кровотечение не удалось, рану ушивают.

В норме 2-3 дня после процедуры у женщины наблюдаются кровянистые выделения из влагалища. Они проходят самостоятельно и безболезненно. Если кровотечение сохраняется больше 3 суток, нужно обратиться к гинекологу.

Биопсия может вызывать неприятные ощущения. Это связано с травмированием тканей. По желанию пациентки врач может использовать местную анестезию перед взятием материала. 

Рекомендации после процедуры

После биопсии женщина не требует госпитализации и может вернуться домой.

Для быстрого восстановления после забора тканей шейки матки врачи рекомендуют:

  • исключить половые контакты на 10-12 суток;
  • избегать физических нагрузок, подъема тяжестей 7-10 суток;
  • прекратить спринцевание на 2 недели;
  • для интимной гигиены использовать душ;
  • не принимать лекарства без консультации врача;
  • отказаться от посещения сауны и бани на 10-14 дней.

Методы проведения анализа

Анализ занимает от 2 до 10 суток. Это зависит от методики проведения теста. Полученная ткань требует предварительной обработки. Биоптат высушивают, вводят реагенты для затвердевания и делят на срезы. После этого лаборант переходит к исследованию. С помощью микроскопа специалист оценивает такие показатели:

  • размер клеток;
  • форма клеточной оболочки;
  • внутренняя организация эпителия;
  • количество атипичных клеток;
  • характер изменений в клетках (дисплазии, воспаление, псевдоэрозия).

Для проведения гистологического анализа применяют такие методы:

  • Микроскопия. Клетки эпителия изучают при помощи мощных микроскопов с высоким разрешением. Это позволяет выявить изменения в клетках. Определение атипичного строения клеток указывает на развитие онкологии. Лаборанты используют специальные реагенты для окрашивания клеток. Это помогает определить особенности опухоли (например, скорость ее роста). Эта информация важна для разработки лучшей схемы лечения и выбора конкретных препаратов. Исследование биоптата под микроскопом отличается высокой информативностью и достоверностью (выше 95%);
  • FISH-исследование. Это молекулярно-генетический анализ состояния хромосом. Полученную ткань сканируют для изготовления цифровой копии и ДНК-проб с флуоресцентными метками. Новые ДНК отличаются по составу и соответствуют разным аномалиям хромосом. В ходе исследования ДНК с метками связываются с аномальными клетками. Если патологических хромосом в тканях нет, меченые ДНК просто вымываются из образца. Достоверность метода близка к 100%, а результаты исследования позволяют определить тип новообразования и активность опухоли;
  • Иммуногистохимия. Это тип гистологического исследования, при котором используют специальные реактивы. Образцы тканей обрабатывают составами, которые содержат меченые антигены. Они специфичны в отношении веществ, синтезирующихся во время роста опухоли. Если «опухолевое» вещество есть в образце, пораженные участки окрашиваются. Эта методика позволяет диагностировать рак с точностью до 99%. При этом исследование выявляет вид опухоли, стадию развития и локализацию. Полученная информация дает возможность прогнозировать течение болезни.

Генетический анализ состояния хромосом

Чем отличается гистология от цитологии шейки матки?

Оба метода основаны на микроскопии клеток шеечного канала. Однако для цитологии берут мазок или соскоб со слизистых оболочек. Это не травмирует ткани, но и не дает точных результатов исследования. На гистологию же берут целый участок тканей, травмируя при этом оболочки. Это позволяет более детально изучить структуру тканей и клеток.

Расшифровка результатов цитологии

Интерпретацию показателей проводит врач гинеколог. Только доктор может правильно оценить состояние тканей шейки с учетом гинекологического анамнеза и возраста пациентки. В норме в гистологическом протоколе отсутствуют атипичные клетки.

Гистология отражает такие признаки патологии:

  • разрастание тканей эндометрия;
  • атипичные клетки в малом количестве;
  • изменение строения маточных желез;
  • атрофия тканей;
  • воспалительные очаги;
  • отек стромы;
  • апоптозные частицы в клетках шеечного канала;
  • нарушение кровотока в сосудах слизистой оболочки;
  • фиброзные изменения слизистой;
  •  множественные кисты.

На основании показателей протокола гистологии врач может поставить такой диагноз:

  1. строение клеток в норме, патология отсутствует;
  2. незначительные изменения клеточной структуры (обычно связаны с перенесенными половыми инфекциями, выкидышами, абортами);
  3. инфекция или воспаление в стадии обострения (с помощью мазка определяют тип возбудителя);
  4. дисплазия шеечного канала 1, 2 и 3 степени;
  5. койлоцитоз – обнаружение вируса папилломы человека;
  6. рак шейки матки.

Иногда поставить диагноз на основании гистологии нельзя. Лаборанты связывают это с низкой выраженностью изменений или недостаточным количеством материала. При этом протокол гистологии отражает только микроскопическую картину эпителия (форма, размер, количество клеток). Чтобы исправить ситуацию, анализ проводят повторно.

Пройти гистологию шейки матки быстро, точно и недорого можно в медицинском центре «Университетская клиника». 

Объекты исследования гистологии. Методы исследования, используемые в гистологии, цитологии и эмбриологии. Техника приготовления гистологических препаратов

Заказать ✍️ написание работы
  • Объекты исследования подразделяются на:
  • · живые (клетки в капле крови, клетки в культуре и другие);
  • · мертвые или фиксированные, которые могут быть взяты как от живого организма (биопсия), так и от трупов.

В любом случае после взятия кусочков они подвергаются действию фиксирующих растворов или замораживанию. И в научных, и в учебных целях используются фиксированные объекты. Приготовленные определенным способом препараты, используемые для изучения под микроскопом, называются гистологическими препаратами.

  1. Гистологический препарат может быть в виде: (тонкого окрашенного среза органа или ткани; мазка на стекле;отпечатка на стекле с разлома органа;тонкого пленочного препарата).
  2. Гистологический препарат любой формы должен отвечать следующим требованиям: (сохранять прижизненное состояние структур;быть достаточно тонким и прозрачным для изучения его под микроскопом в проходящем свете;быть контрастным, то есть изучаемые структуры должны под микроскопом четко определяться; препараты для световой микроскопии должны долго сохраняться и использоваться для повторного изучения.)
  3. Эти требования достигаются при приготовлении препарата.
  4. Методы исследования:

Световая микроскопия-Микроскопирование — основной метод изучения препаратов — используется в биологии уже более 300 лет. Ультрафиолетовая микроскопия — Это разновидность световой микроскопии.

В ультрафиолетовом микроскопе используют более короткие ультрафиолетовые лучи с длиной волны около 0,2 мкм.

Флюоресцентная (люминесцентная) микроскопия — Явления флюоресценции заключаются в том, что атомы и молекулы ряда веществ, поглощая коротковолновые лучи, переходят в возбужденное состояние.

Читайте также:  Сингуляр - инструкция по применению, аналоги, отзывы и формы выпуска (таблетки 5 мг и 10 мг, 4 мг жевательные) лекарства для лечения бронхиальной астмы и аллергического ринита у взрослых, детей и при беременности

Фазово-контрастная микроскопия — Этот метод служит для получения контрастных изображений прозрачных и бесцветных объектов, невидимых при обычных методах микроскопирования. Электронная микроскопия -В электронном микроскопе используется поток электронов с более короткими, чем в световом микроскопе, длинами волн.

Главными этапами цитологического и гистологического анализа являются выбор объекта исследования, подготовка его для изучения в микроскопе, применение методов микроскопирования, а также качественный и количественный анализ изображений.

Наиболее часто для изучения используется срез ткани или органа. Гистологические препараты могут изучаться без специальной обработки. Например, приготовленный мазок крови, отпечаток, пленка или срез органа могут сразу рассматриваться под микроскопом.

Но вследствие того, что структуры имеют слабый контраст, они плохо выявляются в обычном световом микроскопе и требуется использование специальных микроскопов (фазово-контрастные и др.).

Поэтому чаще применяют специально обработанные препараты: фиксированные, заключенные в твердую среду и окрашенные.

  • Процесс изготовления гистологического препарата для световой и электронной микроскопии включает следующие основные этапы:
  • 1. взятие материала и его фиксация,
  • 2. уплотнение материала,
  • 3. приготовление срезов,

4. окрашивание или контрастирование срезов.

Для световой микроскопии необходим еще один этап — заключение срезов в бальзам или другие прозрачные среды.

Фиксация обеспечивает предотвращение процессов разложения, что способствует сохранению целостности структур органа .Маленький образец либо погружают в фиксатор (спирт, формалин, растворы солей тяжелых металлов, осмиевая кислота, специальные фиксирующие смеси), либо подвергают термической обработке

Уплотнение материала, необходимое для приготовления срезов, производится путем пропитывания предварительно обезвоженного материала парафином, целлоидином, органическими смолами. Более быстрое уплотнение достигается применением метода замораживания кусочков, например, в жидкой углекислоте.

Приготовление срезов происходит на специальных приборах — микротомах (для световой микроскопии) и ультрамикротомах (для электронной микроскопии).

Окрашивание срезов (в световой микроскопии) или напыление их солями металлов (в электронной микроскопии) применяют для увеличения контрастности изображения отдельных структур при рассматривании их в микроскопе. Методы окраски гистологических структур очень разнообразны и выбираются в зависимости от задач исследования.

Гистологические красители (по химической природе) подразделяют на кислые, основные и нейтральные.Употребительный краситель гематоксилин, который окрашивает ядра клеток в фиолетовый цвет, и кислый краситель — эозин, окрашивающий цитоплазму в розово-желтый цвет.

Избирательное сродство структур к определенным красителям обусловлено их химическим составом и физическими свойствами. Структуры, хорошо окрашивающиеся кислыми красителями, называются оксифильными, а окрашивающиеся основными —базофильными.

Например, цитоплазма клеток чаще всего окрашивается оксифильно, а ядра клеток – окрашиваются базофильно.

Структуры, воспринимающие как кислые, так и основные красители, являются нейтрофильными (гетерофильными). Окрашенные препараты обычно обезвоживают в спиртах возрастающей крепости и просветляют в ксилоле, бензоле, толуоле или некоторых маслах.

Для длительного сохранения обезвоженный гистологический срез заключают между предметным и покровным стеклами в канадский бальзам или другие вещества.

Готовый гистологический препарат может быть использован для изучения под микроскопом в течение многих лет.

4) . Клетка как структурно-функциональная единица ткани. Определение. Общий план строения эукариотических клеток. Биологические мембраны клетки, их строение, химический состав и основные функции.

Клетка – элементарная структурная, функциональная и генетичес4кая единица в составе всех растительных и животных организмов. Строение эукариотической клетки:

Клетки, образующие ткани животных и растений, значительно различаются по форме, размерам и внутреннему строению.. Клетки всех типов содержат два основных компонента, тесно связанных между собой, — цитоплазму и ядро.

Ядро отделено от цитоплазмы пористой мембраной и содержит ядерный сок, хроматин и ядрышко. Полужидкая цитоплазма заполняет всю клетку и пронизана многочисленными канальцами. Снаружи она покрыта цитоплазматической мембраной.

Собственно тело клетки и ее содержимое отделены от внешней среды или от соседних элементов у многоклеточных организмов плазматической мембраной. Кнаружи от плазматической мембраны расположена клеточная оболочка или стенка, особенно хорошо выраженная у растений. Все внутреннее содержимое клетки, за исключением ядра, носит название цитоплазмы.

Цитоплазма эукариотических клеток не однородна по своему строению и составу и включает в себя: гиалоплазму, мембранные и немембранные компоненты. Мембранные органеллы представлены двумя вариантами: одномембранные и двумембранные.

К первым относятся органеллы вакуолярной системы – эндоплазматический ретикулум, аппарат Гольджи, лизосомы, пероксисомы и другие специальзированные вакуоли, а также плазматическая мембрана. К двумембранным органеллам относятся митохондрии и пластиды, а также клеточное ядро.

К немембранным органеллам принадлежат рибосомы, клеточный центр животных клеток, а также элементы цитоскелета (микротрубочки и микрофиламенты). Термин гиалоплазма основная плазма или матрикс цитоплазмы, обозначает очень важную часть клетки, ее истинную внутреннюю среду.

Гиалоплазма является сложной коллоидной системой, включающей в себя различные биополимеры: белки, нуклеиновые кислоты, полисахариды и т.д. В ней локализованы ферменты, участвующие в синтезе аминокислот, нуклеотидов, жирных кислот, в метаболизме сахаров..

Важнейшая роль гиалоплазмы заключается в том, что эта среда объединяет все клеточные структуры и обеспечивает химическое взаимодействие их друг с другом. Через гиалоплазму осуществляется большая часть внутриклеточных транспортных процессов: перенос аминокислот, жирных кислот, нуклеотидов, сахаров.

В гиалоплазме идет постоянный поток ионов к плазматической мембране и от нее, к митохондриям, ядру и вакуолям. гиалоплазме происходит отложение запасных продуктов: гликогена, жира. В цитозоле на расположенных там рибосомах синтезируются белки, транспортируемые в разные участки клетки, а также все белки клеточного ядра, большая часть белков митохондрий и пластид, основные белки пероксисом. Структура клеточных мембран.

Общей чертой всех мембран клетки (плазматической, внутриклеточных и мембранных органоидов) является то, что они представляют собой тонкие (6-10 нм) пласты липопротеидной природы (липиды в комплексе с белками), замкнутые сами на себя

Сущесвуют три важных принципа строения мембраны: Мембраны не однородны. Мембраны, окружающие внутриклеточные органеллы, и плазматическая мембрана отличаются по составу.Многие компоненты мембран находятся в состоянии непрерывного движения.

Мембрана напоминает постоянно меняющуюся мозаикю Компоненты мембран чрезвычайно асимметричны. Между наружным и внутренним слоями мембран имеется различие по относительному количеству и качественному составу липидов.

Белки располагаются среди липидов асимметрично и имеют хорошо различимые вне- и внутриклеточные участки.

  1. Важнейшими функциями мембран являются следующие:
  2. Мембраны контролируют состав внутриклеточной среды.
  3. Мембраны обеспечивают и облегчают межклеточную и внутриклеточную передачу информации.
  4. Мембраны обеспечивают образование тканей с помощью межклеточных контактов

Химический состав клетки. Клетки живых организмов сходны не только по своему строению, но и по химическому составу. Сходство в строении и химическом составе клеток свидетельствует о единстве их происхождения.

По составу входящие в клетку вещества делятся на органические и неорганические. 1.Неорганические вещества. Вода имеет огромное значение в жизнедеятельности клетки. Многие элементы в клетках содержатся в виде ионов.

Чаще всего встречаются катионы: K+, Na+, Ca2+ Mg2+, и анионы: H2PO4-, Cl-, HCO3-. Минеральные соли (например фосфат кальция) могут входить в состав межклеточного вещества, раковин моллюсков и обеспечивать прочность этих образований.

2. Органические вещества.

Характерны только для живого. Органические соединения представлены в клетке простыми малыми молекулами (аминокислоты, моно- и олигосахариды, жирные кислоты, азотистые основания), и макромолекулами биополимеров (белки, липиды, полисахариды, нуклеиновые кислоты). Молекулы биополимеров состоят из повторяющихся низкомолекулярных соединений (мономеров Функции клеток. Клетка обладает различными функциями: деление клетки, обмен веществ и

раздражимость.

Воспользуйтесь поиском по сайту:

Методы исследования в гистологии. Подготовка препаратов к микроскопии.

Приготовление гистологических срезов

Изучение патологических процессов на клеточном и тканевом уровне производится при помощи микроскопических исследований. Гистологический метод исследования необходим для изучения строения и функции клеток в состоянии нормы, патологии и экспериментальном периоде. Для гистологического исследования берутся элементы тканей и органов. Толщина исследуемого образца не может превышать 1 см3.

Читайте также:  Эпидемиология малярии. Жизненный цикл малярийных плазмодиев.

Образцы тканей могут браться у человека сразу после смерти (чем быстрее, тем лучше) – аутопсия. Также материал может браться во время операции или непосредственно в диагностических целях при помощи специальных инструментов – биопсия.

Приготовление образцов

Приготовление образцов происходит в несколько этапов:

  • Фиксация материала.
  • Приготовление среза.
  • Процесс окрашивания среза.

Суть фиксации материала заключается в остановке естественных процессов в тканях и клетках. Это необходимо для того, чтобы во время купировать процесс гниения и ферментативные изменения в структуре тканей.

В фиксируемых тканях за счет физико-химических процессов происходит свертывание (коагуляция) белков и липоидной составляющей. Это состояние позволяет тканям долго храниться в неизменном виде, без реакции на различные воздействия. Проще говоря, фиксация тканей проводится с целью сохранения прижизненной структуры биологического материала.

Для фиксации тканей применяются специальные жидкости (фиксаторы). Наиболее популярными фиксаторами можно назвать следующие варианты жидкостей:

  • Формальдегид.
  • Спирт (96, 100%).
  • Осмиевая кислота.

Выше перечислены простые фиксаторы. Также для фиксации тканей применяются более сложные варианты фиксаторов (растворы):

  • Спирт-формол.
  • Жидкость Ценкера.
  • Двухромовоокислый калий.

В списках указаны лишь некоторые виды применяемых фиксаторов. Продолжительность необходимого для фиксации образцов тканей периода может варьироваться от нескольких часов до суток.

Длительность зависит от особенностей исследуемых образцов и типа выбранного фиксатора. После того как этап фиксации пройден необходимо произвести промывку материала (в течение нескольких часов) в проточной воде.

Это делается для того чтобы освободить образцы от излишков фиксирующей жидкости и осадочной взвеси.

Мутные непрозрачные образцы не подходят для исследования. Такие кусочки материала не позволят получить необходимую информацию.

Перед тем как приступить к одному из главных этапов – осуществлению среза, образцы промываются чистой водой в течение нескольких часов. Далее, материал подвергается процессу обезвоживания.

Обезвоживание осуществляется при помощи проведения тканевого образца через спирты возрастающей крепости. Этот этап длительный. В каждом спирте кусочки материала находятся от 2-3 часов до суток.

После обезвоживания проводится заливка образцов. Этот этап необходим для уплотнения тканей и получения качественных блоков для исследования. Уплотнение проводится путем замораживания (срочная биопсия) или путем заливки парафином или целлоидином.

Заливка парафином — достаточно длительная процедура (от 24 часов и дольше). Такой вариант уплотнения образцов используется для осуществления исследования в обычном режиме. Для лучшей визуализации отдельных структур тканей срезы окрашивают.

Для окрашивания применяют специальные гистологические красители (кислые, основные, специальные).

Подготовленные к изучению образцы исследуют при помощи специального микроскопа.

Прежде чем приступить к изучению гистологического препарата необходимо убедиться, что последний полностью соответствует ряду обязательных требований:

  • В материале должны быть сохранены прижизненные структуры.
  • Срез должен быть тонким и прозрачным.
  • Структуры, которые требуется подвергнуть изучению должны быть четко визуализированы за счет окрашивания.
  • Препараты должны иметь длительный срок хранения.

При качественном приготовлении препарата достичь соответствия всем перечисленным требованиям достаточно просто. Однако нельзя исключить возможность возникновения небольших погрешностей. Если вовремя распознать некоторые виды неточностей, купировать брак, создать качественный материал вполне возможно.

Самыми распространенными погрешностями при приготовлении срезов можно назвать следующие варианты:

  • Крошение среза.
  • Выпадение материала из парафиновой массы.
  • Невозможность нарезки материала.
  • Разрыв материала.

Те или иные погрешности могут возникать по разным причинам. Иногда в основе нарушения качества образца лежат ошибки во время изготовления. Для устранения каждой погрешности предусмотрены определенные алгоритмы действий.

Методы гистологического исследования

Для осуществления микроскопического исследования необходимы тонкие кусочки материала. Ширина таких кусочков измеряется в микрометрах. Для удобства получения таких срезов используются специальные приборы – микротомы. Конструкция этого прибора предусматривает возможность получения срезов толщиной 5-10 микрометров.

Основным методом исследования в гистологии является микроскопия. При помощи микротома можно изготавливать тончайшие срезы, подходящие для проведения микроскопических исследований. Получение среза происходит за счет движения ножа в одном направлении. Толщина среза задается на этапе срабатывания механизма подъема.

Для изготовления срезов из материала, залитого парафином или целлоидином, используют радиальный, ротационный или санный микротом.

Для получения среза с растительных или животных тканей могут применяться специальные замораживающие микротомы. Для микроскопического исследования используется несколько методов приготовления срезов. Для каждого из методов выбираются определенные виды микротомов и применяются определенные четкие алгоритмы действий.

Гистологические срезы бывают:

  • Ступенчатые.
  • Серийные.
  • Горизонтальные.

Могут производиться срезы фиксированного и нефиксированного материала. Все зависит от характера исследуемых тканей и основных целей проведения означенного исследования. Также в гистологии существуют другие методы приготовления срезов.

Микротомы и их применение

Как уже было сказано выше, срезы в гистологии создаются при помощи специального устройства – микротома. В самом названии заложена расшифровка предназначения прибора – micros (маленький), tome (рассечение). Одним из самых используемых можно назвать санный микротом.

Название прибора произошло от принципа работы механизма, который базируется на подаче ножа с зажимом при помощи специальных салазок. Санный микротом предназначен для осуществления парафиновых срезов.

Как правило, такой прибор работает с одноразовыми лезвиями или кассетами. Такой высокоточный микротом состоит из станины, механизма микроподачи, подъемного механизма, зажимов для блоков, ножедержателя.

Такой аппарат позволяет изготавливать срезы толщиной от 0,5 до 60 микрометров. Санный микротом отличается высокоточной регулировкой толщины среза. Функция подачи материала может быть механической или ручной. Данный прибор предназначен для осуществления рутинных исследований в области медицины, ботаники и биологии.

Ротационный микротом — прибор с неподвижным ножом и подвижным столиком. В приборе предусмотрена моторизованная подача образца. Этот микротом предназначен для использования в гистологической лаборатории для проведения исследований, направленных на решение гистологических и гистопатологических задач.

Для получения срезов с нефиксированных тканей или в тех случаях, когда необходимо срочное проведение исследования используются замораживающие микротомы. Такие приборы снабжены замораживающим столиком, на котором и закрепляется исследуемый образец.

Главным правилом успешного получения гистологического среза при помощи микротома является правильный выбор угла наклона ножа и угла сечения. Наилучшим углом наклона является тот, при котором плоскость лезвия находится параллельно верхней части блока.

Если выбрать угол наклона больший, чем требуется, образуется риск, что срез будет крошиться. При меньшем угле наклона лезвие будет скользить по поверхности материала.

Получение требуемого результата при таком положении ножа невозможно. Величина угла сечения зависит от характера исследуемого материала. Чем образец мягче, тем меньше будет угол резания.

При обработке мягких блоков неплохим вариантом считается косое расположение ножа.

Резание на микротоме

Для приготовления срезов с парафинированных объектов или образцов, обработанных целлоидином, опять же чаще всего используют ротационный микротом.

Сначала блок подвергают обрезке. Это необходимо для устранения свободного парафина или другого уплотнителя. Если эту процедуру не произвести, срез может получиться неравномерным, морщинистым и, как следствие, малоинформативным. Также сморщивания можно избежать при помощи охлаждения исследуемого материала.

Далее, парафиновый блок прочно закрепляется в зажиме. Предварительно необходимо выверить правильный угол расположения ножа и выбрать необходимый угол резания. После этого нужно используя регулировку механизма подачи, установить блок так, чтобы его поверхность находилась от лезвия ножа на расстоянии 0,5-1 мм.

После осуществления подгонки проводится установка микрометрической шкалы для получения первых толстых срезов. После этого производится моделирование блока (срезка излишков парафина, предание прямоугольной формы). Заключительным этапом является выставление микрометрической шкалы на задуманную толщину и осуществление окончательной резки материала.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector