Методы санитарно-микробиологических исследований. Методы прямого обнаружения патогенных микроорганизмов.

Санитарно-гигиенические лабораторные исследования являются составной частью системы, обеспечивающей проведение санитарно-эпидемиологических экспертиз, гигиенических обследований различных объектов, и способствующей получению объективной информации о факторах окружающей среды. Это позволяет контролировать качество и безопасность объектов окружающей среды, выпускаемой продукции, а также оказываемых видов услуг.

Контроль за соблюдением санитарных правил, норм и гигиенических нормативов, а также соответствием продукции международным требованиям безопасности для человека основан на результатах микробиологических, физико-химических, паразитологических, радиологических и органолептических исследований, получаемых в санитарно-микробиологических лабораториях с использованием стандартизованных методов и методик выполнения измерений.

Спектр определяемых показателей зависит от вида объекта, цели и задач исследования. Объектами санитарно-микробиологических исследований являются:

  1. Вода питьевая централизованных и децентрализованных источников водоснабжения, вода подземных и поверхностных источников; сточные воды после обеззараживания и очистки; дистиллированнная вода, в том числе, используемая для приготовления фармацевтических препаратов на производстве;
  2. Почва зон санитарной охраны источников водоснабжения и рекреационной зоны, промышленных предприятий, населенных мест, сельскохозяйственных и лесных угодий, донные отложения;
  3. Воздух закрытых помещений, атмосферный воздух;
  4. Готовые фармацевтические препараты, вспомогательные вещества и субстанции и для их приготовления;
  5. Объекты окружающей среды в лечебно-профилактических учреждениях и на пищевых предприятиях (производственный контроль);
  6. Пищевые продукты: сырье для пищевого производства, готовые кулинарные изделия на предприятиях общественного питания;
  7. Отходы продовольственных и непродовольственных производств;

Методы санитарно-микробиологических исследований. Методы прямого обнаружения патогенных микроорганизмов.

  • Проведение отбора проб для санитарно-микробиологических исследований должно проводиться с соблюдением правил асептики в строгом соответствии с нормативной документацией, поскольку ошибки при отборе материала приводят к искажению конечных результатов.
  • Отбор материала из возможно большего количества точек объекта позволяет получить результаты с большей достоверностью, и, как следствие, более полную характеристику объекта.
  • Количество микробиоты на разных участках одного объекта подвержено изменениям во времени, поэтому исследование с использованием качественных и количественных методов рекомендуется проводить в динамике. Это позволяет получить более полную характеристику микробиологического состава объекта и информацию о его биологической контаминации.
  • Проведение исследования с использованием унифицированных и стандартизованных методик позволяет получить сравнимые результаты и избежать грубых ошибок при его выполнении. Микробиологическую оценку безопасности объекта следует проводить, учитывая результаты исследования других его характеристик, так как микроорганизмы воздействуют на объект в комплексе с другими факторами окружающей среды.
  • Для микробиологической оценки объектов внешней среды используется 2 группы методов: прямое обнаружение патогенных микроорганизмов и косвенные методы индикации возможного их присутствия.
  • Прямой метод является более надёжным, но трудоёмким и недостаточно чувствительным, поэтому прямое выделение патогенных микроорганизмов проводят только по эпидемиологическим показаниям.
  • Группа косвенных методов включает качественные (наличие или отсутствие микроорганизмов) и количественные методы оценки санитарного состояния объекта.

К количественным методам относятся определение показателей общей обсемененности объектов микроорганизмами – ОМЧ (общего микробного числа), КМАФАнМ (количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов) и СПМО (санитарно-показательных микроорганизмов). Определение общей микробной обсемененности объектов основано на предположении, что вероятность обнаружения в исследуемом материале патогенов, как правило, возрастает с увеличением общего количества микроорганизмов в единице объема.

К санитарно-показательным относятся такие микроорганизмы, которые обитают в организме человека и животных, и постоянно выделяются в окружающую среду. Количественный учет таких микроорганизмов (например, определение БГКП (бактерий группы кишечной палочки), S.

aureus, сульфитредуцирующих клостридий и др.) позволяет оценить степень микробной контаминации и, следовательно, эпидемической опасности исследуемых объектов.

На пищевых предприятиях санитарно-показательные микроорганизмы характеризуют не только безопасность готовой продукции, но и гигиеническое состояние производства.

Неотъемлемым компонентом комплексной оценки санитарного состояния объекта, позволяющим определить степень риска вспышки паразитозов и гельминтозов, является санитарно-паразитологический контроль.

Риск заражения паразитарными заболеваниями связаны с эколого-паразитологической ситуацией на исследуемой территории и степенью контаминации возбудителями паразитарных инфекций объектов внешней среды.

Методы санитарно-микробиологических исследований. Методы прямого обнаружения патогенных микроорганизмов.

В основе использования санитарно-гельминтологических методов лежит использование флотационных растворов, плотность которых выше плотности яиц гельминтов на применении флотационных растворов солей разной концентрации. Флотационный раствор с более высокой удельной плотностью, чем у яиц гельминтов, позволяет им всплывать и концентрироваться в поверхностном слое.

Выбор объектов для проведения санитарно-паразитологических исследований определяется возможностью обсеменения материала паразитарными агентами, поскольку необходимо учитывать плотность исследуемого материала, чувствительность патогенных простейших и яиц гельминтов к воздействию прямых солнечных лучей.

Таким образом, в различных объектах внешней среды возможно возникновение условий, благоприятных для развития одной физиологической группы микроорганизмов и губительных для другой.

В связи с этим, для получения наиболее полной информации о санитарно-микробиологическом состоянии объекта необходимо проводить комплексное исследование с целью поиска различных групп санитарно-показательных микроорганизмов.

Принципы и методы санитарно-микробиологических исследований

Принципы, которыми руководствуются микробиологи при санитарно-микробиологических исследованиях, исходят из основной задачи, разрешаемой ими: определение возможности присутствия в исследуемом объекте патогенных микроорганизмов или токсинов, образующихся при их жизнедеятельности, а также обнаружение и оценка степени порчи пищевых продуктов.

Первым принципом является правильное взятие проб для санитарно-микробиологических исследований с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта, и правил стерильности.

Ошибки, допущенные при взятии проб, приводят к получению неправильных результатов, и исправить их уже нельзя.

При упаковке и транспортировке проб необходимо создавать такие условия, чтобы не допустить гибели или размножения исходной микрофлоры в исследуемом объекте, что может исказить результаты исследований.

Поэтому одним из правил является, возможно, быстрое проведение исследований, и, если необходимо, сохранение материала только в условиях холодильника и не более 6-8 часов. Каждая проба сопровождается документом, в котором указывают название исследуемого материала, номер пробы, время, место взятия, характеристика объекта, подпись лица, взявшего пробу.

Второй принцип – проведение серийных анализов исходит из особенностей исследуемых объектов. Как правило, вода, почва, воздух и другие объекты содержат разнообразные микроорганизмы, распределение которых неравномерно.

К тому же микроорганизмы, находясь в биоценотических отношениях, подвергаются взаимному влиянию, что ведет к гибели одних и активному размножению других. Поэтому берут серию проб из разных участков исследуемого объекта, по возможности большее количество проб, что позволит получить более достоверную характеристику объекта.

Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала – среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.

Третий принцип – повторное взятие проб – необходимо для получения сопоставимых результатов. Это связано, прежде всего, с тем, что исследуемые объекты весьма динамичны (вода, воздух и т.п.

), сменяемость микрофлоры в них во времени и пространстве очень велика. Патогенные микроорганизмы попадают в окружающую среду, как правило, в небольшом количестве, да и распределяются в ней равномерно.

Поэтому повторное взятие проб позволяет более точно определить биологическую контаминацию объектов окружающей среды.

Четвертый принцип – применение стандартных и унифицированных методов, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями, что дает возможность получить сравнимые результаты.

Пятый принцип – использование при оценке исследуемых объектов одновременно комплекса тестов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики.

Применяют прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов и косвенный — позволяющий судить о загрязнении объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени.

К косвенным тестам относится определение общего микробного числа, количественного и качественного состава санитарно-показательных микроорганизмов.

Применение косвенных методов оценки потенциальной возможности загрязнения объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, использование как бы обходного пути для изучения обсемененности материалов, является особенностью санитарно-микробиологических исследований.

Шестой принцип – заключается в проведении оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов при использовании санитарно-микробиологических тестов других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т.д.).

Всегда необходимо учитывать, что развитие микробов тесно связано с другими факторами окружающей среды, которые могут оказывать как благоприятное, так и неблагоприятное влияние, усиливая или ограничивая возможности размножения патогенных микроорганизмов и накопления их токсинов.

Читайте также:  Цитокины в развитии меланом.

Следует учитывать и то, что почти любой объект исследования имеет собственную микрофлору, которая вызывает специфические биохимические процессы, и те изменения в объектах, которые обусловливаются посторонними микроорганизмами.

Санитарный микробиолог должен хорошо знать ход биохимических процессов, происходящих в норме и в исследуемом объекте (сырье, пищевые продукты, готовом изделии и т.д.

), технологию производства, уметь определить характер вредного воздействия попавших микробов, возможные последствия такого воздействия и рекомендовать конкретные мероприятия по их предупреждению. Нередко врачу приходится прибегать к помощи специалистов в области общей, сельскохозяйственной, промышленной, ветеринарной микробиологии и решать вопрос при непосредственном участии соответствующих специалистов.

Методы санитарно-микробиологических исследований. Методы прямого обнаружения патогенных микроорганизмов.

Седьмой принцип – ответственность врачей санитарной службы за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов. При санитарно-микробиологическом исследовании выявляется степень порчи пищевых продуктов (или других объектов), пригодность их к употреблению, возможная опасность для здоровья населения.

Если пищевые продукты возможно реализовать, врач должен дать обоснованную рекомендацию о наиболее рациональном способе их обработки и употреблении. Запрещается использовать пищевые продукты, воду водоемов и др. Закрытие предприятия из-за санитарного неблагополучия наносит определенный экономический ущерб. Ответственность за такое решение несет врач санитарной службы.

Для большей объективности в оценке полученных результатов и заключениях врачи пользуются специальными инструкциями, нормативами, ГОСТами, разработанными профильными санитарно-микробиологическими учреждениями и утвержденными Министерством Здравоохранения.

Эти стандарты периодически пересматриваются и приводятся в соответствие с изменениями, которые вытекают из практического опыта, материальных возможностей, современного уровня знаний и развития техники.

Микробиологические исследования | Университетская клиника в СПБ

Методы санитарно-микробиологических исследований. Методы прямого обнаружения патогенных микроорганизмов.

Слово «посев» ассоциируется с садом-огородом, а не с инфекциями. На самом деле микробы сеют в подходящие условия, как и семена растений. Взяв образец с любой поверхности тела и посеяв его на питательную среду, можно обнаружить находящихся там болезнетворных микробов и выявить их чувствительность к антибиотикам.

Как проводится выявление микроорганизмов методом посева и для чего нужен этот анализ

При инфекционном поражении следует узнать, какой микроб вызвал болезнь и с помощью какого антибиотика от него лучше избавиться. Поэтому нужно, чтобы возбудитель проявил себя, показав слабые стороны.

Для этого берутся образцы крови, мочи, слюны, секрета простаты, семенной жидкости, слизи из уретры и цервикального канала, носоглотки, мокроты, грудного молока, содержимого ран и язв. Материал переносится на питательные среды – специальные смеси, на которых микробы лучше всего растут. Для посева используются плоские чашечки Петри или пробирки.

Затем образец помещают в температурные условия, наиболее благоприятные для микробного роста, и оставляют на определенное время. Через некоторое время на питательных средах начинают появляться микробные колонии – скопления возбудителя, расположенные внутри среды или вовне.

Снаружи разрастаются анаэробные микробы, которым для жизни требуется воздух. Внутри питательной среды развиваются анаэробы – микробы, не любящие воздух и развивающиеся без него.

Из полученных колоний делают мазки, которые рассматривают под микроскопом, чтобы выяснить, какая именно микробная культура высеялась. Делается также вывод об их количестве (обсемененности). Этот показатель важен для дозировки применяемых препаратов. Чем больше обнаружено возбудителей, тем выше будет доза антибактериального средства, назначенного врачом.

Количественный анализ учитывается при выявлении условно-патогенной микрофлоры. Эти микробы и грибки не доставляют проблем, если находятся в организме в ограниченном количестве.

Однако превышение норм приводит к болезням, поэтому требует назначения лекарств.

Один из самых известных условно-патогенных микроорганизмов – грибок кандида, вызывающий при разрастании его колоний кандидоз (молочницу).

При проведении анализа определяется чувствительность микрофлоры к антибиотикам. Для этого проводится специальный тест, называемый антибиотикограммой.

Патогенные бактерии пересаживают в благоприятную среду и подвергают воздействию различных антибактериальных средств. Для этого в чашку Петри, где находятся колонии микробов, помещают бумажные полоски, смоченные в антибиотике. Через 3-5 дней оценивают результат:

  • Микробная гибель на расстоянии 2,5 см от полоски говорит о высокой чувствительности микробов к данному антибактериальному препарату.
  • Если все возбудители умерли в радиусе 1,5-2,5 см, чувствительность к антибиотику средняя.
  • Если микробы погибли на расстоянии менее 1,5 см от полоски, чувствительность будет слабой. Такой препарат применять нежелательно.
  • При отсутствии гибели колоний считается, что данный антибиотик на эту микрофлору не действует.

Степень чувствительности указывается в результатах анализов, чтобы врач потом мог назначить наиболее эффективные препараты.

Анализ желательно проводить всем больным перед началом антибиотикотерапии. Чувствительность к антибактериальным препаратам – индивидуальная характеристика, которая может отличаться у разных больных, даже страдающих одним и тем же заболеванием.

Таким же образом проводится анализ на чувствительность к бактериофагам – специальным вирусам, убивающим определенные виды бактерий.

Микробиологическая диагностика позволяет выбрать из огромного количества выпускаемых препаратов наиболее подходящий и эффективный.

Антибиотикотерапия без проведения анализов может быть абсолютно бесполезной, а иногда и вредной. Микробы, как и любые другие существа, конкурируют друг с другом, поэтому уничтожение одних бактерий всегда вызывает рост других. Если же применять антибиотики без проведения посева, можно убить абсолютно не ту флору, позволив возбудителям инфекции бесконтрольно размножаться.

Для определения каких микроорганизмов чаще всего проводятся бактериальные посевы

  • Разнообразной кокковой флоры, вызывающей гнойное поражение половых путей, органов дыхания, ЛОР-органов, нагноения ран и язв.
  • Дифтерийной палочки – возбудителя опасной болезни – дифтерии, поражающей дыхательные пути, глаза, нос.
  • Возбудителей кишечных инфекций – кишечную палочку, дизентерийную группу, брюшнотифозные бактерии, возбудителей паратифа, сальмонеллу, иерсинию.
  • Разнообразных микробов, вызывающих урогенитальные патологии и половые инфекции – гонококк, микоплазму, уреаплазму, трихомонаду, грибок молочницы.
  • Кроме того, высевают возбудителей, которые могут вызывать различные заболевания – энтеробактерии, гемофильные микроорганизмы, клебсиеллы.

Показания к проведению посевов на флору и чувствительность к антибиотикам

  • Любые урогенитальные патологии, в том числе ЗППП. Этот метод диагностики особенно рекомендуется при инфекциях, трудно поддающихся лечению.
  • Проблемы с кишечником. Анализ высевает все основные кишечные группы и позволяет подобрать не только антибиотики, но и пробиотики.
  • Любые гнойные поражения – язвы, раны, лактационный мастит. С помощью посева можно понять, какие микробы вызывали нагноение, и подобрать антибиотик.
  • Беременность – в этот период делаются посевы из носоглотки, чтобы выявить микрофлору, опасную для будущего малыша.
  • ЛОР-инфекции и поражение дыхательных путей. Проведение бакпосева рекомендуется при затяжных ринитах, фарингитах, частых ангинах. Это позволит выявить микроорганизмы, вызывающие указанные заболевания.
  • Анальный зуд – в этом случае нужно сдать посев на грибок молочницы, который часто вызывает такой симптом.
  • Обследование детей перед поступлением в дошкольное учреждение и школу, поездкой в детский лагерь или санаторий.
  • Профосмотр работников, занятых в пищевой промышленности или работающих с продуктами питания.

Недостатки исследований на бактериальный посев

  • Длительное время проведения анализа. Нужно не только выявить возбудителя, но и определить его чувствительность, что занимает много времени. К сожалению, ускорить этот процесс нельзя. Бактерии вырастают в термостате – приборе, поддерживающем нужную температуру, за определённое время. Ускорение приведет к искажению результатов.
  • Не все представители микрофлоры высеваются в питательную среду – существуют виды, которые невозможно вырастить в лабораторных условиях.
  • Возможность ложноотрицательного результата, который возникает, если пациент перед сдачей материала принимал антибиотики или использовал местные антибактериальные препараты.
Читайте также:  Объем неотложной помощи перед транспортировкой в стационар. Медицинская помощь при ожоге перед транспортировкой.

Поэтому при сдаче анализов на посев нужно очень аккуратно и точно соблюдать все предписания врача.

Как происходит взятие материала

Анализ сдается как минимум через 10 суток после окончания антибиотикотерапии. Перед забором материала нельзя мыть место его взятия гелем или мылом с антибактериальными компонентами.

Процедура зависит от материала, который берется на диагностику:

  • Моча собирается утром после подмывания половых органов без использования антибактериального мыла. Образец собирается в чистую емкость в объеме примерно 10-15 мл и сразу доставляется в лабораторию. Образцы, взятые с клеенок и суден, не подходят из-за бактериальной загрязненности.
  • Перед взятием мазков из половых путей нельзя спринцеваться, вводить свечи и гели. Материал не собирается во время критических дней.
  • Образец на анализ кала берется утром специальной лопаткой в чистую посуду в объеме примерно 30 мг. Нельзя использовать кал, взятый у детей из подгузников, полученный с помощью клизм и слабительных средств.
  • Мокроту собирают в специальную чашечку после чистки зубов и полоскания полости рта. Анализ из носоглотки и горла берется медперсоналом клиники.
  • Грудное молоко собирают после мытья груди и обработки околососковой зоны спиртом. Первые капли сцеживаются, чтобы промыть молочные протоки, а затем собирается 15 мл в пробирку.
  • Мазок из уретры у мужчин берется врачом-урологом. Перед этим в течение 5-6 часов желательно воздержаться от мочеиспускания, иначе урина смоет микробов, и результат будет неточным.

Сколько времени делается анализ, расшифровка

Тем, кто решился на такое обследование, нужно помнить, что быстро такая диагностика не проводится. Минимальный срок, как правило, составляет 3-4 дня, а максимальный – до 10 сут. За это время нужно вырастить возбудителя и определить его чувствительность к антибиотикам.

Количество выявленных микроорганизмов оценивается в КОЕ/мл, где это КОЕ – колониеобразующие единицы. Чем выше этот показатель, тем больше микробов обнаружено. В бланке анализов обязательно указывается чувствительность к наиболее распространенным антибиотикам (высокая, средняя, низкая).

Самостоятельно больному определить, какая именно флора была высеяна, очень сложно. Поэтому с полученным анализом нужно обратиться к урологу, гинекологу, маммологу, который проведет расшифровку результатов.

Это несложное исследование позволит выявить и вылечить самые различные инфекции – от простых до достаточно сложных. Антибиотики и другие антибактериальные препараты, назначенные по результатам анализов, действительно пойдут на пользу.

5. ХАРАКТЕРИСТИКА САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ. 5.1. МЕТОДЫ ПРЯМОГО ОБНАРУЖЕНИЯ ПИЩЕВЫХ ПАТОГЕНОВ

При периодическом контроле санитарно-гигиенического состояния предприятий по производству молочных продуктов и при вспышках инфекционных заболеваний используют прямые методы обнаружения патогенных микроорганизмов, анализ проводится в лабораториях государственных органов надзора.

Обнаружение возбудителей заболеваний в пищевых продуктах осложняется Контаминацией сопутствующей микрофлорой. На общем микробном фоне количество патогенов может быть незначительным, поэтому их прямое культивирование становится невозможным. Поэтому традиционные методы бактериологического анализа пищевых патогенов предполагают выполнение следующих основных этапов:

  • восстановление, накопление клеток в неселективной среде (посев 25 г продукта в 225 мл бульона при определении сальмонелл);
  • накопление в жидкой селективной среде с ингибиторами роста сопутствующей микрофлоры;
  • пересев на дифференциально-диагностические агаровые среды для выявления специфических колоний;
  • исследование культуральных, морфологических и тинкториальных свойств выделенной чистой культуры;
  • подтверждение видовой принадлежности культуры с использованием молекулярно-генетических и иммунологических методов.

К широко применяемым молекулярно-генетическим методам относятся гибридизация ДНК, которая основана на взаимодействии комплементарных цепей со специфическими зондами, и полимеразно-цепная реакция (ПЦР), включающая следующие основные этапы:

  • подготовка (выбор целевых генов, подбор праймеров);
  • обогащение, экстракция, сепарирование образца;
  • амплификация (термоциклирование, изотермальное инкубирование);
  • анализ продуктов амплификации гель-электрофорезом, мечеными зондами, гибридизацией, секвенированием и т. д.

Среди иммунологических методов чаще всего используется серологическая диагностика и иммуноферментный анализ.

Серологическая диагностика — это изучение взаимодействия антител сыворотки крови и микробных антигенов. Например, для определения листерий применяются реакции непрямой агглютинации эритроцитарным антигенным диагностикумом и реакции связывания комплемента с инактивированным цитоплазматическим антигеном.

Иммуноферментный анализ (ИФА) — определение комплекса антиген — антитело за счет введения ферментативной метки с последующей ее детекцией с помощью субстрата, изменяющего окраску. Например, для определения энтерогеморрагической кишечной палочки, листерий, золотистого стафилококка применяется твердофазная ИФА (сэндвич-метод, при котором антиген заключен между двумя слоями антител).

К современным методам диагностики патогенов относится фаготипирование (лизотипирование, фаготипаж) — метод дифференциации бактерий путем изучения свойств их умеренных фагов и по чувствительности к набору специфических бактериофагов.

Лекция №4. Микробиологические методы исследования

  • Объект изучения медицинских микробиологических лабораторий — патогенные биологические агенты (ПБА) — патогенные для человека микроорганизмы (вирусы, бактерии, грибы, простейшие), генно-инженерно модифицированные микроорганизмы, яды биологического происхождения (токсины), гельминты, а также материал (включая кровь, биологические жидкости и экскременты организма человека), подозрительный на содержание ПБА.
  • В зависимости от выполняемых исследований, микробиологические лаборатории подразделяют на диагностические, производственные и научно-исследовательские. В соответствии с типами микроорганизмов, изучаемых в микробиологических лабораториях, выделяют:
  • бактериологические,
  • вирусологические,
  • микологические и
  • протозоологические лаборатории.
  • С возбудителями инфекционных заболеваний работают только в специализированных микробиологических лабораториях, обеспечивающих безопасность её персонала и невозможность «утечки» патогенных микроорганизмов за пределы лаборатории.

Регламентация условий работы с возбудителями инфекционных заболеваний произведена в соответствии со степенью опасности микроорганизмов для человека. По этому признаку выделено четыре группы возбудителей инфекционных заболеваний.

Группа I возбудителей инфекционных заболеваний: возбудители особо опасных инфекций: чума, натуральная оспа, лихорадки Ласса, Эбола и др.

Группа II возбудителей инфекционных заболеваний: возбудители высококонтагиозных бактериальных грибковых и вирусных инфекций: сибирская язва, холера, лихорадка Скалистых гор, сыпной тиф, бластомикоз, бешенство и др. В эту группу также включён ботулотоксин (но не сам возбудитель ботулизма).

Группа III возбудителей инфекционных заболеваний: возбудители бактериальных грибковых, вирусных и протозойных инфекций, выделенных в отдельные нозологические формы (возбудители коклюша, столбняка, ботулизма, туберкулёза, кандидоза, малярии, лейшманиоза, гриппа, полиомиелита и др.). В эту группу также включены аттенуированные штаммы бактерий групп I, II и III.

  1. Группа IV возбудителей инфекционных заболеваний: возбудители бактериальных, вирусных, грибковых септицемии, менингитов, пневмоний, энтеритов, токсикоинфекций и острых отравлений (возбудители анаэробных газовых инфекций, синегнойной инфекции, аспергиллеза, амебиаза, аденовирусы, герпесвирусы и др.)
  2. В зависимости от уровня безопасности работы с микроорганизмами микробиологические лаборатории подразделяют на четыре группы риска.
  3. Первая группа риска микробиологических лабораторий: лаборатории особого режима (максимально изолированные) с высоким индивидуальным и общественным риском.
  4. Вторая группа риска микробиологических лабораторий: режимные лаборатории (изолированные) с высоким индивидуальным и низким общественным риском.
  5. Третья группа риска микробиологических лабораторий: базовые (основные) лаборатории с умеренным индивидуальным и ограниченным общественным риском.
  6. Четвёртая группа риска микробиологических лабораторий: базовые (основные) лаборатории с низким индивидуальным и общественным риском.
  7. В системе Министерства здравоохранения и Государственного комитета санитарно-эпидемиологического надзора РФ наиболее разветвлена сеть бактериологических лабораторий. В соответствии с выполняемыми задачами выделяют;
  8. • бактериологические лаборатории в составе ЛПУ;
  9. • бактериологические лаборатории в составе комитетов Госсанэпиднадзора;
  10. • учебные бактериологические лаборатории вузов;
  11. • проблемные и отраслевые бактериологические лаборатории научно-исследовательских институтов и предприятий по выпуску бактерийных препаратов;
  12. • специализированные бактериологические лаборатории по контролю за особо опасными инфекциями;
Читайте также:  Предпузырная клетчатка. Топография позадилобкового пространства.

• специализированные бактериологические лаборатории по контролю за отдельными группами бактерий: микобактериями, риккетсиями, лептоспирами и др. Большая часть микробиологических лабораторий работает с ПБА групп III и IV, а изучением возбудителей особо опасных инфекций (группы I и II) занимаются только специализированные лаборатории.

Работу с патогенными биологическими агентами ( ПБА ) групп III и IV выполняют специалисты с высшим и средним специальным образованием. К ней допускают сотрудников, прошедших инструктаж по соблюдению требований безопасности работы с ПБА; последующий инструктаж следует проводить не реже одного раза в год.

Все сотрудники, работающие с патогенными биологическими агентами ( ПБА ), должны находиться на диспансерном учёте. Приборы, оборудование и средства измерения должны быть аттестованы, технически исправны и иметь технический паспорт.

Их метрологический контроль и техническое освидетельствование следует проводить в установленные сроки.

Из правил работы в грязной зоне базовой микробиологической лаборатории: Перед работой в микробиологической лаборатории следует проверить качество посуды, пипеток, шприцев и другого оборудования. При пипетировании необходимо пользоваться только резиновыми грушами или автоматическими устройствами.

Строго запрещено пипетировать материал ртом, переливать его через край сосуда (пробирки, колбы), а также оставлять без надзора рабочее место во время выполнения любых работ с патогенными биологическими агентами ( ПБА ). В грязной зоне микробиологической лаборатории запрещается курить, пить воду, хранить верхнюю одежду, головные уборы, обувь, пищевые продукты.

В помещения зоны нельзя приводить детей и домашних животных. Окончание работы в микробиологической лаборатории После окончания работы в микробиологической лаборатории все объекты, содержащие ПБА, должны быть убраны в хранилища (холодильники, термостаты, шкафы) с обязательной дезинфекцией столов.

Использованные пипетки полностью (вертикально) погружают в дезинфицирующий раствор, избегая образования пузырьков в каналах. Остатки ПБА, использованную посуду и оборудование собирают в закрывающиеся ёмкости и передают в автоклавную. Категорически запрещено сливать отходы с патогенными биологическими агентами ( ПБА ) в канализацию без предварительного обеззараживания.

После окончания работы с патогенными биологическими агентами ( ПБА ) и заражёнными животными, а также после ухода из лаборатории следует тщательно вымыть руки.

Цель микробиологических исследований — установить факт наличия или отсутствия возбудителя в организме больного и на объектах окружающей среды (индефецировать)

Задачи микробиологических исследований — идентифицировать микроорганизмы в исследуемом материале, определить их видовую принадлежность, морфологические, биохимические, токсигенные и антигенные свойства, а также установить чувствительность выделенных микроорганизмов к антимикробным препаратам.

Несмотря на то что проведение микробиологических исследований относится к компетенции микробиологов, каждый медицинский работник, имеющий дело с инфекционными заболеваниями, должен знать, как и когда необходимо отбирать материал для исследований, на какие исследования его направлять и как интерпретировать полученные результаты.

Первый этап любого микробиологического исследования составляет правильный выбор материала для исследования. Его определяют свойства возбудителя и патогенез вызываемого им заболевания. При поражениях отдельных органов и систем целесообразно отбирать материал соответствующей локализации.

При отсутствии поражений исследуют кровь, а затем отбирают образцы с учётом клинической картины заболевания и доступности материала для исследования.

Так, при лихорадке неясного генеза первоначально проводят посев крови; затем, при появлении симптомов более конкретных проявлений, например пневмонии, проводят забор мокроты.

• Образцы материала для микробиологического исследования следует забирать до назначения антимикробной терапии, с соблюдением правил асептики для предупреждения загрязнения материала. Каждый образец следует рассматривать как потенциально опасный.

При заборе, транспортировке, хранении и работе с ним необходимо соблюдать правила биологической безопасности. Материал собирают в объёме, достаточном для всего комплекса исследований.

Микробиологические исследования следует начинать немедленно после поступления образца в лабораторию.

• Выбор материала для микробиологического исследования должен соответствовать характеру инфекционного процесса. Так, например, при установлении этиологии пневмонии материалом должна быть мокрота, а не слюна, а при раневых инфекциях отделяемое следует забирать из глубины раны, а не с её поверхности.

Виды микробиологических исследований.

Основу микробиологической диагностики инфекционных заболеваний составляют микроскопические, микробиологические, биологические, серологические и аллергологические методы.

Микроскопические методы исследований включают приготовление мазков и препаратов для микроскопирования.

В большинстве случаев результаты микроскопических исследований носят ориентировочный характер (например, определяют отношение возбудителей к окраске), так как многие микроорганизмы лишены морфологических и тинкториальных (особенности окрашивания) особенностей.

Тем не менее микроскопией материала можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и т.д.), а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в присланных образцах.

Микробиологические методы исследований — «золотой стандарт» микробиологической диагностики, так как результаты микробиологических исследований позволяют точно установить факт наличия возбудителя в исследуемом материале.

Идентификацию чистых культур (до вида микроорганизма) проводят с учётом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, токситенных и антигенных свойств микроорганизма. Большинство исследований включает определение чувствительности к антимикробным препаратам у выделенного возбудителя.

Для эпидемиологической оценки роли микроорганизма проводят внутривидовую идентификацию определением фаговаров, биоваров, резистентваров и т.д.

Биологические методы исследований направлены на определение наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя (особенно при незначительном исходном содержании в исследуемом образце).

Методы включают заражение лабораторных животных исследуемым материалом с последующим выделением чистой культуры патогена либо установлением факта присутствия микробного токсина и его природы.

Моделирование экспериментальных инфекций у чувствительных животных — важный инструмент изучения патогенеза заболевания и характера взаимодействий внутри системы микроорганизм-макроорганизм. Для проведения биологических проб используют только здоровых животных определённых массы тела и возраста.

Инфекционный материал вводят внутрь, в дыхательные пути, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно и подкожно, в переднюю камеру глаза, через трепанационное отверстие черепа, субокципитально (в большую цистерну головного мозга). У животных прижизненно забирают кровь, экссудат из брюшины, после гибели — кровь, кусочки различных органов, СМЖ, экссудат из различных полостей.

Серологические методы исследований выявления специфических AT и Аг возбудителя — важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний. Особую ценность они имеют в тех случаях, когда выделить возбудитель не представляется возможным.

При этом необходимо выявить повышение титров AT, в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10-20 сут (иногда этот интервал может быть более длительным).

AT обычно появляются в крови на 1-2-ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований.

Определение классов Ig чётко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием, Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Аллергологические методы исследования Антигены многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований.

Наибольшее распространение нашли кожно-аллергические пробы, включающие внутри-кожное введение Аг (аллергена) с развитием реакции ГЗТ. Кожные пробы нашли применение в диагностике таких заболеваний как сап, мелиоидоз, бруцеллёз.

Наиболее известна проба Манту, используемая как для диагностики туберкулёза, так и для оценки невосприимчивости организма к возбудителю.

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector