Реакция адсорбции агглютининов. Реакция коагглютинации. Схема реакции коагглютинации.

  • Реакция адсорбции агглютининов. Реакция коагглютинации. Схема реакции коагглютинации.Серологическая диагностика – наиболее распространенный метод диагностики бруцеллёза, при котором с помощью различных реакций проводится выявление специфических антител к бруцеллёзу и выявляется нарастание титра антител.
  • Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных:
  • — в реакции агглютинации (РА) в пробирках,
  • — реакции связывания комплемента (РСК),
  • — реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК),
  • — реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД),
  • — пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба — РБП)
  • — реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)
  • и в молоке коров — кольцевой реакции (КР) и других реакциях, утвержденных в установленном порядке.
  •      Почему так много серологических реакций на бруцеллёз?

Во время бруцеллеза в организме животного происходят защитные реакции, вызванные внедрением возбудителя. На разных этапах развития заболевания в организме больного животного вырабатываются те или иные антитела, которые выявляются в одной или в нескольких реакциях. Так  в начале заболевания образуются  антитела, которые выявляются в основном в реакции агглютинации (РА), а самые поздние антитела (спустя шесть месяцев после заражения) улавливаются в реакции иммунодиффузии (РИД). Поэтому для выявления бруцеллеза разработана не одна реакция. На разных стадиях заболевания животного в зависимости от дозы попавшего в организм возбудителя,  и от резистентности самого  организма животного в тот или иной момент наличие специфических антител к бруцеллёзу показывают лишь определённые реакции.

Поэтому  чтобы уловить  специфические антитела, при  поступлении сыворотки крови в лабораторию для исследования на бруцеллез ставится комплекс серологических реакций (из РБП, РА, РСК, РИД, РНГА, КР),  на основании  результатов которых можно установить  диагноз «бруцеллез».  В зависимости от видов животных, и целей исследования используют те или иные серологические методы.

На ранних стадиях бруцеллезного процесса наиболее чувствительна реакция агглютинации (РА).

Агглютинины в сыворотке крови больных животных в низких титрах можно выявить уже с 10-15-го дня заболевания.

Наиболее высокий титр антител отмечают обычно через 1-3 месяцев от начала заболевания, в дальнейшем он начинает быстро снижаться. У отдельных особей повышенный титр антител может сохраняться до 2 лет.     

Реакция связывания комплемента (РСК)  и реакция длительного связывания комплемента на холоде (РДСК) – специфичные и высокочувствительные методы  диагностики бруцеллёза, дополняющие данные РА. РДСК  часто применяют вместо РСК  для исследования сывороток крови, обладающих антикомплементарными свойствами.

Обе реакции позволяют выявлять комплементсвязывающие антитела к бруцеллам, появляющиеся в крови  больного животного позже агглютининов. В связи с этим РСК (РДСК)  позволяет выявить большее количество больных животных в стадах с хронической инфекцией бруцеллёза.

Максимальные титры  комплементсвязывающих антител в РСК (РДСК) регистрируют к 4-му месяцу заболевания, в дальнейшем титр снижается, но в небольшом количестве их обнаруживают в течение нескольких лет. 

Роз бенгал проба (РБП) применяется при плановых профилактических исследованиях животных на бруцеллез в качестве экспресс-метода на неиммунизированных противобруцеллезными вакцинами животных. В основе этой реакции лежит непосредственное соединение антигена и антитела.

РБП является специфичным и чувствительным методом, благодаря кислой реакции антигена, ингибируется проявления неспецифических антител.

На постановку РБП (роз бенгал проба – пластинчатая цветная реакция агглютинации) уходит несколько минут, однако с ее помощью нет гарантированной возможности количественно оценить наличие антител Сыворотки крови животных благополучных хозяйств, реагировавшие положительно на РБП, сразу же исследуют в РА и РСК, РА и РИД, или в  РНГА для установления титра агглютининов и наличия комплементсвязывающих антител. Сыворотки, с которыми получена отрицательная РБП, дополнительно в РА и РСК (РДСК) не исследуют.      

       Реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД).

Сущность метода состоит в выявлении бруцеллезных антител, основанном на способности антител и антигена диффундировать в агаровом геле и при взаимодействии образовывать комплекс антиген-антитело, наблюдаемый в виде линии преципитации.

Результат исследований становится известен лишь спустя 48 часов.

Используется для контроля эпизоотического состояния по бруцеллезу животных не ранее чем через 1,5 месяца после вакцинации и  для дифференциации положительных реакций, полученных в РА или (и) РСК (РДСК) по истечении 6 месяцев после введения вакцины;

При получении положительного результата в реакции иммунодиффузии, животное признают больным бруцеллезом.

Кольцевая реакция применяется с целью ориентировочной проверки благо­получных по бруцеллезу молочных стад и для проверки молока на рынках. Сущность кольцевой реакции заключается в том, что в молоке бруцеллезных животных при добавлении антигена образуется комплекс антитела с антигеном, который адсорбируется жировыми частицами молока.

Жировые частицы вслед­ствие своего малого удельного веса поднимаются наверх, увлекая адсорбиро­ванный агглютинат, который в зависимости от цвета антигена образует на по­верхности жидкости окрашенное кольцо. Преимущество КР с молоком заключается в простоте постановки и быстроте получения результатов.

Всех животных, реагирующих по КР в свободных от бруцеллеза стадах, необходимо перепроверять по РА и РСК (РДСК).

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) при бруцеллезе является специфической и высокочувствительной. Для её проведения используют эритроцитарный бруцеллезный полисахаридный диагностикум.

Метод основан на выявлении бруцеллезным эритроцитарным антигеном специфических антител в сыворотке крови больных бруцеллезом животных или иммунизированных вакцинами против бруцеллеза животных.

По диагностической эффективности значительно превосходит используемые в ветеринарной практике другие методы диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РБП и РИД с ОП-С антигеном), вместе взятые, выявляя больных бруцеллезом животных в более ранние сроки после заболевания.

При этом является  экспресс-методом пригодным для массовой диагностики бруцеллеза животных,  результат становится известным в течение 3-4 часов,

Мелкий рогатый скот, иммунизированный против бруцеллеза, в РНГА не исследуют.

Интерпретация результатов серологических исследований на бруцеллёз  во многом зависит от достоверных данных о благополучии хозяйства по бруцеллёзу и вакцинации против бруцеллёза.

Важно соблюдать сроки  разрешающие проведение серологических исследований после применения вакцины, указанные в инструкции. Так как например аглютиногенные вакцины (из шт. Б. абортус 19, Б. абортус 82 и др.) изготавливают из культур бруцелл, находящихся в S- или в SR (RS)-форме.

Читайте также:  Дыхательная цепь и окислительное фосфорилирование.

В организме животных, привитых такими вакцинами, синтезируются специфические антитела, гомологичные S-антигену, выявляемые стандартными бруцеллезными диагностическими препаратами в РА, РСК, РДСК, РБП КР с молоком, РИД с 0-ПС антигеном и др.

При нарушении инструкции у таких животных будут выявлены вакцинные специфические антитела.

Также важно строго соблюдать правила отбора и  сроки доставки материала для исследования, которые оказывают большое влияние на результаты исследований.

Помимо этого, иногда встречаются индивидуальные неспецифические реакции  при исследовании сывороток на бруцеллёз.

При  постановки РА и РБП, особенно в весеннее время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакцированных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть получены неспецифические результаты реакций.

Обычно появление таких реакций обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.

), а также рядом других причин.

Кольцевая реакция с молоком (КР)  может давать положительные реакции при исследовании молока коров, больных маститами и другими болезнями, сопровождающимися лихорадкой, а также в первые две недели после отела.

Поэтому при выявлении положительных или сомнительных реакций, рекомендуется проводить повторное исследование  материала, взятого от таких животных, и исследовать их  спустя  15-30 суток в  аналогичных реакциях, а также в других  реакциях показывающих нарастание  или падение титра антител.

Иммунологический тест определения холодовых агглютининов при гемолитических анемиях

  • Лабораторное исследование, направленное на выявление аутоантител, вызывающих агглютинацию и гемолиз эритроцитов при низких температурах.
  • Синонимы русские
  • Холодовые агглютинины, исследование полных холодовых агглютининов.
  • Синонимы английские
  • Cold agglutinins blood test,  Cold Autoantibodies, Cold-Reacting Antibodies.
  • Метод исследования
  • Реакция агглютинации.
  • Какой биоматериал можно использовать для исследования?
  • Венозную кровь.
  • Как правильно подготовиться к исследованию?
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Аутоиммунные гемолитические анемии (АИГА) возникают в результате срыва вследствие ряда причин иммунологической толерантности и выработки антител против собственных эритроцитов. Различают тепловые и холодовые аутоантитела.

Тепловые наиболее эффективно связываются с эритроцитарными антигенами при температуре 37 °С, а холодовые – при 4-18 °С.

В зависимости от эффекта, который аутоантитела оказывают на эритроциты в пробирке, выделяют гемолизины (разрушают клетки) и агглютинины (вызывают склеивание эритроцитов между собой).

Аутоиммунная гемолитическая анемия с холодовыми агглютининами – относительно редкая форма иммунных гемолитических анемий (по некоторым данным, 20% всех случаев АИГА). Может быть как идиопатической (причина возникновения неизвестна), так и симптоматической.

Идиопатический вариант чаще встречается у лиц пожилого и старческого возраста (60-80 лет), в то время как симптоматический может возникать в детском и юношеском возрасте, осложняя течение микоплазменной пневмонии, инфекционного мононуклеоза, легионеллеза, а также системных аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка, ревматоидный артрит).

У пожилых людей АИГА с холодовыми агглютининами часто ассоциирована с лимфопролиферативными заболеваниями, такими как хронический лимфолейкоз и макроглобулинемия Вальденстрема.

Холодовые агглютинины — это чаще всего IgM, реже — представлены смесью иммуноглобулинов разных классов.

Они связываются с мембраной эритроцитов при низких температурах и присоединяют комплемент — семейство сывороточных белков, которые разрушают меченные антителами клетки.

После присоединения комплемента на мембране эритроцита образуется мембраноповреждающий комплекс, формирование которого приводит к образованию большого количества пор в оболочке клетки, ее набуханию и разрушению.

В качестве лабораторного маркера аутоиммунного гемолиза, обусловленного холодовыми агглютининами, целесообразно использовать выявление в сыворотке крови пациента антител, приводящих к агглютинации эритроцитов в процессе инкубации при низких температурах.

Современным методом постановки теста на холодовые агглютинины является реакция агглютинации в геле. В микропробирки, содержащие нейтральный гель, добавляют взвесь донорских эритроцитов. Затем добавляют исследуемую сыворотку и инкубируют при температуре 2-8 °С.

При наличии в исследуемой сыворотке холодовых агглютининов в процессе инкубации при низких температурах они связываются с эритроцитами и вызывают их агглютинацию.

Оценка результата теста производится после центрифугирования, в процессе которого происходит разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов.

Неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля, и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета, а агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще.

Для чего используется исследование?

  • Для выявления в сыворотке крови пациента антиэритроцитарных антител, вызывающих гемолиз при низких температурах.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на аутоиммунную гемолитическую анемию с холодовыми агглютининами: характерная особенность заболевания – плохая переносимость холода, когда и проявляются основные симптомы.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружены.

  • Отрицательный результат — клетки образуют компактный осадок на дне микропробирки — свидетельствует об отсутствии холодовых агглютининов в исследуемой сыворотке.
  • Положительный результат — агглютинированные клетки образуют красный слой на поверхности или в толще геля — свидетельствует о наличии холодовых антител в исследуемой сыворотке.

Что может влиять на результат?

  • В низких титрах холодовые агглютинины могут обнаруживаться и у здоровых людей.

Важные замечания

  • При аутоиммунной гемолитической анемии с холодовыми агглютининами происходит аутоагглютинация эритроцитов при комнатной температуре, что создает проблемы и приводит к некорректным результатам при определении группы крови и подсчете параметров периферической крови (количество эритроцитов и эритроцитарные индексы). Такая агглютинация обратима при 37 °С, поэтому при нагревании крови до температуры тела проблемы при проведении исследований устраняются.
  1. Также рекомендуется
  2. Кто назначает исследование?
  3. Гематолог, терапевт, врач общей практики, ревматолог, педиатр.
  4. Литература
  1. Гематология: национальное руководство / под ред. О. А. Рукавицына. — М. : ГЭОТАР-Медиа, 2015. С. 155-157.

  2. Williams Hematology. 9th edition. By: Kenneth Kaushansky, Marshall Lichtman, Josef Prchal, Marcel M. Levi, Oliver Press, Linda Burns, Michael Caligiuri. McGraw-Hill Education, 2016. Pages 835-836.

  3. A Manual of Laboratory and Diagnostic Tests, 9th Edition, by Frances Fischbach, Marshall B. Dunning III. Wolters Kluwer Health, 2015. Pages 697-698.

Читайте также:  Интетрикс - инструкция по применению, аналоги, отзывы и формы выпуска (капсулы или таблетки) лекарства для лечения амебиаза, лямблиоза и дисбактериоза у взрослых, детей и при беременности

Влияние холодовой агглютинации эритроцитов на результаты общего анализа крови

В практике клинико-диагностической лаборатории (КДЛ) нередко возникают спорные ситуации, связанные с проведением общего анализа крови. Знание методов измерения гематологических анализаторов, использование дополнительных параметров контроля работы приборов позволяют лаборатории избежать выдачи ложных результатов. Приводим одно из таких наблюдений.

В КДЛ ГБУЗ ГКБ им. С.П. Боткина доставлена на консультацию пробирка с венозной кровью пациента, наблюдающегося в Московском гематологическом центре, находящемся на территории больницы. У больного взята венозная кровь с использованием системы взятия крови BD Vacutainer («Becton Dickinson», США) с К2-ЭДТА.

При исследовании пробы на гематологическом анализаторе ADVIA 2120i фирмы «Siemens» получены результаты, свидетельствующие о резком угнетении красного кровяного ростка. Концентрация эритроцитов составляет 0,96∙1012/л при норме от 4,0∙1012/л.

 Однако расчетные показатели среднего содержания гемоглобина в эритроците (MCH) и средней концентрации гемоглобина в эритроците (МСНС) представляют собой невероятные цифры, 100,8 пг и 1066 г/л соответственно (референсные интервалы для МСН=27—31 пг, МСНС=310—380 г/л). Это может говорить о нарушении в работе прибора.

Проверить данный факт помогают дополнительные параметры анализатора ADVIA 2120i, измеренные напрямую оптическим способом, показатели среднего содержания гемоглобина в эритроците (CH) и средней концентрации гемоглобина в эритроците (СНСМ).

Величины данных параметров у пациента 31,8 пг и 340 г/л соответственно, что не отличается от нормы (референсные интервалы для СН=27—31 пг, СНСМ=310—380 г/л). На основе этих наблюдений можно сделать вывод об адекватности работы прибора и особенности образца крови. Одна из причин резкого увеличения МСНС может быть холодовая агглютинация эритроцитов.

Для подтверждения влияния температурного фактора на красную кровь пробирку поместили на 10 мин в термостат, нагретый до 37 °C. Наблюдали восстановление красного ростка крови и увеличение количества лейкоцитов, видимо, попадающих внутрь эритроцитарных агрегатов. Результаты продемонстрированы в таблице. Таким образом, холодовая природа снижения концентрации эритроцитов у данного пациента подтверждена.

Показатели общего анализа крови на двух гематологических анализаторах: Advia 2120i («Siemens», США) и Pentra XL80 («Horiba», Франция)

С целью сравнения работы двух гематологических анализаторов при данной патологии эта же проба пациента до инкубирования в термостате повторно исследована на гематологическом приборе Pentra XL 80 («Horiba», Франция).

Полученные результаты совпадают с данными общего анализа крови, определенными на гематологическом анализаторе ADVIA 2120i фирмы «Siemens» после нагревания в термостате при температуре 37 °C в течение 10 мин (см. таблицу).

Данное явление можно объяснить различием в температуре реакционных камер и времени прохождения реакции двух приборов. На гематологическом приборе ADVIA 2120i камера, в которой измеряются эритроциты, нагревается до 32 °C, а в анализаторе Pentra XL 80 — до 35 °C.

Время анализа составляет 30 с на ADVIA 2120i и 45 с на Pentra XL 80. Такой разницы в условиях прохождения реакции достаточно для деактивации холодовых агглютининов.

Данный больной с 2012 г. состоит на учете в Московском гематологическом центре с диагнозом: медикаментозная аутоиммунная гемолитическая анемия с присутствием холодовых агглютининов. Холодовые агглютинины — это антитела, вызывающие агрегацию эритроцитов при воздействии низких температур.

При температуре ниже 37 °C на поверхности эритроцитов фиксируются активированные агглютинины, агрегируя эритроциты друг с другом. При повышении температуры агглютинины, как правило, теряют свою активность и отделяются от эритроцитов.

Однако существуют холодовые агглютинины, активные в широком диапазоне температур.

Таким образом, при снижении концентрации эритроцитов и резком увеличении показателя МСНС необходимо повторно исследовать кровь после инкубации в термостате при 37 °C в течение 10 мин или измерить данную пробу на другом гематологическом анализаторе с отличающимися условиями реакции. Если данные манипуляции не помогают, пациенту необходимо пересдать венозную кровь и доставить пробирку в лабораторию в условиях постоянного нагревания до температуры тела, не допуская охлаждения. Это позволит избежать ошибки при проведении общего анализа крови.

Агглютинация (биология) — Agglutination (biology)

Агглютинация это слипание частиц. Слово агглютинация исходит из латинский агглютинаре (приклеивание к).

Агглютинация — это процесс, который происходит, если антиген смешан с соответствующим ему антителом, называемым изоагглютинином. Этот термин обычно используется при определении группы крови.

В биологии это происходит в двух основных примерах:

  1. Скопление клеток, таких как бактерии или эритроциты, в присутствии антитело или же дополнять. Антитело или другая молекула связывает несколько частиц и соединяет их, образуя большой комплекс. Это увеличивает эффективность устранения микробов за счет фагоцитоз поскольку большие скопления бактерий могут быть уничтожены за один проход, по сравнению с удалением отдельных микробных антигенов.
  2. Когда людям делают переливание крови неправильной группы крови, антитела реагируют с неправильно перелитой группой крови и, как следствие, эритроциты слипаются и слипаются, вызывая слипание. Коалесценция мелких частиц, взвешенных в растворе; эти более крупные массы затем (обычно) осаждаются.

В гематологии

Гемагглютинация

Метод определения группы крови «прикроватная карта», в данном случае с использованием карты Серафол. Результат — группа крови А положительная.

Гемагглютинация это процесс, посредством которого красные кровяные тельца агглютинат, что означает комок или засорение. Агглютин, участвующий в гемагглютинации, называется гемагглютинин. В перекрестное сопоставление, донор эритроциты и сыворотка или плазма реципиента инкубируются вместе. Если происходит агглютинация, это указывает на то, что группы крови донора и реципиента несовместимый.

Когда человек производит антитела против собственных красных кровяных телец, как в болезнь холодовых агглютининов и другие аутоиммунный В условиях, когда клетки могут спонтанно агглютинировать.[1] Это называется аутоагглютинация и это может помешать лабораторным тестам, таким как определение группы крови и полный анализ крови.[2][3]

Лейкоагглютинация

Лейкоагглютинация происходит, когда вовлеченные частицы белые кровяные клетки.

Примером является форма PH-L фитогемагглютинин.

В микробиологии

Агглютинация обычно используется как метод идентификации специфических бактериальных антигенов и, в свою очередь, идентификации таких бактерий. Поскольку реакция комкования происходит быстро и ее легко вызвать, агглютинация является важным методом диагностики.

История открытий

Два бактериолога, Герберт Эдвард Дарем (-1945) и Макс фон Грубер (1853–1927) открыл специфическую агглютинацию в 1896 году. Слипание стало известно как реакция Грубера-Дарема. Грубер ввел термин агглютинин (от латинского) для обозначения любого вещества, вызывающего агглютинацию клеток.

Читайте также:  Сирдалуд - инструкция по применению, отзывы, аналоги и формы выпуска (таблетки 2 мг и 4 мг, капсулы мр 6 мг) лекарства для лечения мышечного спазма при различных заболеваниях у взрослых, детей и при беременности

Французский врач Фернан Видаль (1862–1929) применил открытие Грубера и Дарема на практике позже, в 1896 году, используя реакцию в качестве основы для теста на брюшной тиф. Видаль обнаружил, что сыворотка крови от тифозного носителя вызывает слипание культуры брюшных бактерий, тогда как сыворотка от тифозного человека — нет. Этот Тест Видаля был первым примером сывороточной диагностики.

Австрийский врач Карл Ландштайнер нашел еще одно важное практическое применение реакции агглютинации в 1900 году. Тесты агглютинации Ландштейнера и его открытие групп крови ABO положили начало науке о переливание крови и серология что сделало переливание возможным и безопасным.

Смотрите также

Рекомендации

Микробиология, вирусология, иммунология: Методические указания для самостоятельной работы и к практическим занятиям для студентов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов. Часть III, страница 8

            Пластинчатая агглютинация.

            Пластинчатая реакция агглютинации ставится
на гладкой поверхности стекла, фарфора. Поверхность пластинки должна быть
тщательно обезжирена, чтобы хорошо растекалась капля сыворотки,
физиологического раствора.

         Реакция применяется:  1) для серологической
идентификации микробов на этапах бактериологического исследования и для окончательной серологической идентификации выделенных
культур микробов кишечного семейства с
помощью   поливалентных и монорецепторных сывороток; 2) для ускоренной
серологической диагностики инфекционных болезней путем обнаружения антител,
например при бруцеллезе (реакция Хеддльсона),
туляремии.

Агглютинация на стекле относится
к методам экспресс диагностики. V-антиген и
иммунную сыворотку берут высококонцентрированными
и взаимодействие между ними происходит
при регулярном покачивании. Реакция наступает быстро, через несколько
минут, что выгодно отличает ее от  реак­ции в пробирках.

Для постановки пластинчатой
реакции на стекло наносят каплю цельной или слегка разведенной иммунной сыворотки,
к ней добавляют каплю
концентрированного антигена, в виде живой культуры, капли перемешивают петлей или легким покачиванием
стекла. При положительном результате уже через несколько минут жидкость
в капле просветляется, а по краям появляются хлопья склеившихся
бактерий. Реакция сопровождается контролем
антигена и антитела.

Существуют
и другие варианты постановки реакции агглютинации: капельный, микроскопический, ускоренный по Ноблю.

Непрямая агглютинация.

Реакция агглютинации
отличается высокой чувствительностью. Она
положительна даже при содержании 0,1-0,01 мг антител в 1 мл. Чувствительность этой реакции может быть повышена, если увеличить
массу и объем реагентов, адсорбируя их на поверхности инертных носителей.

Носителями антигена или антител могут
быть естествен­ные клетки: эритроциты, лейкоциты, бактериальные клетки, а также
созданные искусственно: латекс,
полистирол, бентонит, частицы угля. Основное требование, предъявляемое к
носителям — возможность прочно соединяться с
молекулами антигена или антитела и не давать спонтанной
агглютинации.

Такая реакция агглютинации называется непрямой агглютинацией. Различают несколько модификаций непрямой агглютинации:

а) Непрямая или пассивная агглютинация (РНГА, РПГА)

Носителем антигена
или антител в этой реакции служат эритроциты.

Нативные эритроциты
животных (барана, обезьяны, морской свинки), птиц (петуха, гуся), человека 1 группы обладают способностью
адсорбировать на своей поверхности полисахаридные молекулы, в том числе полисахаридные антигены бактерий, без
предварительной обработки эритроцитов.

Если же эритроциты обработать танином
или трипсином, то на их поверхности будут
адсорбироваться белковые молекулы, в
том числе антитела, белковые антигены.

Так как в лабора­торных условиях обработка свежих эритроцитов
представляет определенные трудности, разработана
методика сенсибилизации формалинизированных эритроцитов очищенными растворимыми антигенами микробных клеток или гамма-глобулиновой фракцией иммунной
сыворотки.

Эти препараты получили название эритроцитарных
диагностикумов. Эритроцитарные диагностикумы являются стабильными препаратами и
работа с ними упрощена. Реакция непрямой гемагглютинации
используется для обнаружения антител в
исследуемой сыворотке, которую разводят и разливают в лунки плексигласовой
панели.

Туда же добавляют равный объем
соответствующего эритроцитарного диагностикума. Постановка реакции сопровождается контролями. Учет проводят
после двух часо­вой экспозиции. Если
антитела соответствуют антигену, они взаимодействуют между собой,
внешним проявлением будет агглютинация эритроцитов,
которая выглядит в виде рыхлого осадка с фестончаты­ми краями, занимающего
большую часть дна лунки – «зонтик». Если же реакция отрицательная, то осадок
эритроцитов имеет вид плотного диска в центре лунки с ровными краями –
«пуговка».

  • Кроме того,
    реакция непрямой гемагглютинации может быть использована
    дня обнаружения растворимых антигенов с помощью известных антител, адсорбированых на поверхности
    эритроцитов.
  • РНГА по
    своей чувствительности и специфичности превосходит многие другие серологические реакции.
  • б) Латекс-агглютинация

Латекс-агглютинация
— это реакция, в которой в
качестве известного носителя используются частицы латекса. Латекс – водный
раствор млечного сока каучуконосных деревьев
или синтетических каучуков.

Частицы латекса нагружают молекулами антигена или антитела и они приобретают способность склеиваться
соответствующими анти­телами или антигенами.

Если на латексе
адсорбированы растворимые антигены, то эти частицы используются для обнаружения
антител в исследуемой сыворотке и наоборот, если на латексе адсорбированы
антитела, то частицы используют для
обнаружения антигена. Чаще всего, метод используется для определения ревматоидного
фактора или HBs-антигена.

Ставят реакцию на стекле, смешивая нагруженный антителами латекс и исследуемый антиген, при положительной реакции уже через 5 — 10 минут
образуются видимые невооруженным глазом агглютинаты, которые затем
увеличиваются в размере.

в) Реакция
коагглютинации

В реакции коагглютинации в качестве инертного носителя используется культура золотистого
стафилококка (штамм CowanI).

Белок А, находящийся на поверхности
оболочки этого стафилококка, способен связывать Fc-фрагмент иммуноглобулина G (Ig G1, G2, G4) оставляя свободными активные центры антитела. Эти центры взаимодействуют
с соответствующими антигенами, вызывая склеивание стафи­лококков.

Реакция применяется для обнаружения и типирования корпускупярных и растворимых антигенов. Для постановки
реакции выпус­кают коммерческие стафилококковые реагенты (т.е. стафилококки нагруженные антителами
диагностических иммунных сывороток).

К реагенту добавляют 0,01 — 0,1 мл выделенной
культуры, перемешивают покачиванием стекла и через 10 — 30 минут инкубации при
комнатной температуре учитывают как обычную реакцию
агглютинации.

ЗАНЯТИЕ 24

ТЕМА: РЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ

Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector