Fab-фрагмент антитела. Полные антитела. Неполные антитела. Fc-фрагмент антитела.

18 июня 2021, 13:00 • РОССИЙСКАЯ ГАЗЕТА

Сейчас многие тестируются на антитела к «короне»: кто-то хочет знать, не переболел ли он бессимптомно, кто-то — оценить состояние после прививки. Лаборатории предлагают разные тесты — и наши, и зарубежные. Как не запутаться и сдать именно тот анализ, какой нужен? На вопросы «РГ-Неделе» ответил глава НЦ молекулярно-генетических исследований ДНКОМ Андрей Исаев.

Для чего сдают тесты на антитела?

Тесты выполняются на наличие антител (иммуноглобулинов) IgA, IgM и IgG.

— Антитела IgA первыми вырабатываются нашей иммунной системой в ответ на вторжение вируса — если тест на них положительный, значит, человек находится в острой фазе заболевания (даже если у него нет симптомов).

— Антитела IgM начинают вырабатываться позже, где-то на 3-4-й день после возникновения симптомов — этот тип антител также является маркером первичной инфекции. Обычно исследование на антитела IgM используется как вспомогательное — для уточнения фазы инфекционного процесса.

— Антитела IgG начинают вырабатываться примерно через 10-14 дней после появления симптомов. Их появление указывает на то, что у человека сформировался долговременный иммунитет. То есть речь идет либо о поздней фазе заболевания, когда больной уже выздоравливает, либо о том, что человек переболел COVID-19 раньше.

Какой тест можно сделать перед прививкой?

Сейчас тесты на антитела IgG чаще всего выполняют люди, которые собираются пройти вакцинацию, чтобы убедиться, что они не перенесли COVID-19 раньше бессимптомно и у них нет иммунитета, полученного естественным путем. Если тест показывает положительный титр антител IgG, вакцинацию можно отложить.

А если человек хочет проверить уровень антител после прививки? Сейчас многие сравнивают свои показатели.

Надо понимать, что тесты, которые используют в лабораториях, разные и шкалы у них используются тоже разные. Поэтому если пытаться сравнивать результаты (хотя большого смысла в этом нет), то надо по меньшей мере быть уверенным, что вы выполняли тестирование одним и тем же тестом.

Что такое «коэффициент позитивности»?

Для определения уровня антител после прививки в большинстве случаев используются полуколичественные тесты. Они не показывают точное количество образовавшихся антител. Но с их помощью можно оценить интенсивность иммунного ответа — по яркости свечения образца, если тест проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Тесты разных производителей имеют разную шкалу. В большинстве случаев в государственных лабораториях используют тест-системы «Вектор-бест», и у них уровень отсечки равен 1. То есть если показатель ниже — антител нет. От 1 до 1,1 — так называемая серая зона. Если же результат выше 1,1 — значит, мы имеем яркую положительную реакцию иммунной системы.

«Коэффициент позитивности» показывает, во сколько раз уровень антител в пробе превышает пороговый уровень их распознавания. Так что, например, показатель 15, о котором недавно сказал президент, — это хороший результат. Примерно такой же и даже больше коэффициент позитивности иммунного ответа имеют большинство привитых «Спутником V» или «КовиВаком».

При этом еще раз отмечу, что у других производителей тестов шкала может быть другой и показатели, соответственно, тоже. При этом, получая результат теста в лаборатории, вы всегда можете увидеть на бланке референсные значения и сравнить результат с ними.

Сергей Мальгавко/ТАСС

Каким тестом можно проверить поствакцинальный иммунитет?

Такой тест называется «Количественное определение антител к RBD домену S1 белка коронавируса (антитела IgG)» (выполняется методом хемилюминесцентного иммуноанализа сыворотки и плазмы крови, Abbot).

Это количественный анализ на IgG-антитела. Он поможет оценить иммунный ответ и в случае заражения (или перенесенного COVID-19), и для контроля поствакцинального иммунитета.

• Когда делать:
• — на текущую или перенесенную инфекцию не ранее чем через три недели после появления симптомов или получения положительного результата ПЦР-теста;
• — для оценки поствакцинального иммунитета через три недели после второй дозы вакцины.
• О чем говорят результаты:
• < 50.0 AU/mL отрицательно:
• антитела к патогену отсутствуют или на очень низком уровне.
• Это может быть период ранней инфекции или у пациента не исключены нарушения функций иммунной системы.
• ≥ 50.0 AU/mL положительно:
• есть иммунный ответ на инфекцию либо сформировался поствакцинальный ответ.

Нужны ли повторные исследования?

Со временем напряженность иммунитета и в случае перенесенного заболевания, и после вакцинации уменьшается. По мнению инфекционистов, чем выше уровень антител, тем ниже риск повторного заражения, а также вероятность тяжелого течения и осложнений при COVID-19.

При этом делать повторный тест, чтобы оценить, как падает уровень антител, рекомендуется не чаще чем раз в полгода.

Сергей Карпухин/ТАСС

Есть тесты на антитела, которые не показывают поствакцинальный иммунитет?

Да. Это, например, тест на «Антитела к нуклеокапсидному белку (N) коронавируса IgG (выполняется методом хемилюминесцентного иммуноанализа сыворотки и плазмы крови, Abbot).

Этот тест не используется для оценки иммунного статуса после прививки. Дело в том, что антитела к нуклеокапсидному белку (N) вируса SARS-CoV-2 вырабатываются только после перенесенного заболевания. Вакцинация выработку этих антител не стимулирует, поэтому этот тест бесполезно применять для оценки поствакцинального иммунитета.

Этот тест назначают:

• для оценки предполагаемого иммунного статуса пациента после перенесенного или на поздней фазе (выздоровление) заболевания COVID-19;
• для оценки иммунного статуса пациента, в качестве вспомогательного метода диагностики коронавирусной инфекции, совместно с результатами других лабораторных исследований и клинических данных о пациенте.

1. О чем говорят результаты
2. отрицательно < 1,4 - negative (антитела не обнаружены);
3. положительно > 1,4 — positive (антитела обнаружены).

Для чего нужно сдавать ПЦР-тест на COVID-19?

Этот тест сдается, чтобы проверить, болен ли человек или, возможно, является носителем вируса (даже если у него нет никаких симптомов нездоровья), выделяет ли он в настоящий момент вирус из верхних дыхательных путей, то есть является источником инфекции для окружающих.

Это единственный и ставший уже стандартным тест для туристов: при въезде практически все страны требуют предъявить справку о тесте, сданном перед отъездом. После возвращения из поездки тест придется сдать еще дважды и результат загрузить на портал госуслуг.

Кроме того, можно сдать ПЦР-тест, чтобы убедиться, что вы здоровы, то есть исключить бессимптомное течение заболевания.

Это может понадобиться, если, например, вам предстоит встреча с пожилыми родственниками и вы не хотите рисковать их здоровьем.

Кроме того, с помощью такого тестирования можно проверить, не заразились ли вы коронавирусом, если вы точно знаете, что контактировали с заболевшим.

Как правильно сдавать тесты?

Для теста ПЦР: берется мазок биоматериала со слизистой носоглотки. Анализ сдается натощак либо через три часа (или позже) после еды. За три часа до взятия мазка нельзя чистить зубы, полоскать рот, пить, жевать жевательную резинку, применять антисептические таблетки, полоскания и спреи.

Для теста на антитела: берется кровь из вены. Сдавать кровь нужно натощак утром или днем не менее чем через четыре часа после последнего приема пищи.

Антитела ( Ат )

Антитела ( Ат ) — эффекторные молекулы гуморального иммунитета. Синтез антител запускают Аг, поступающие в организм извне (при инфекциях, вакцинации, действии ксенобиотиков) или образующиеся эндогенно.

Как правило, AT специфически взаимодействует с комплементарным Аг. Существуют, однако, антитела, взаимодействующие с Аг-детерминантами, общими для различных Аг.

Такие антитела известны как перекрёстнореагирующие, или гетероспецифичные.

Антитела существуют в миллионах разновидностей, и каждая молекула имеет уникальный участок связывания Аг-детерминанты.

В большинстве случаев антитела представлены сывороточными гликопротеинами, мигрирующими в составе медленной фракции гамма-глобулинов при электрофорезе белков сыворотки крови.

Поэтому для обозначения сывороточной фракции AT иногда применяют термин «гамма-глобулины».

Антитела также называют «иммуноглобулины». Антитела ( Ат ) образуют одну из основных фракций белков крови, составляя 20% массы общего белка плазмы. AT устойчивы к действию слабых кислот и щелочей, а также к нагреванию до 60 °С.

Структурная единица AT — мономер — молекула цилиндрической формы, состоящая из двух идентичных тяжёлых Н-цепей [от англ. heavy, тяжёлый] и двух идентичных лёгких L-цепей [от англ. light лёгкий]. Тяжёлые и лёгкие цепи Ig состоят из аминокислотных остатков и соединены дисульфидными (-S-S-) связями. В цепях различают вариабельную область, или V-область [от англ.

various, разный], и константную область, или С-область [от англ. constant, постоянный]. V-область у разных AT варьирует. V-области L- и Н-цепей образуют Аг-связывающий центр (активный центр AT, паратоп), или Fab-фрагмент [от англ. fragment фрагмент, + antigen binding, связывающий Аг]. Константная область молекулы называется Fc-фрагмент [от англ.

fragment crystallizable, фрагмент кристализации].

В месте соединения Fab- и Fc-фрагментов расположена шарнирная область, позволяющая Аг-связывающим фрагментам разворачиваться для более тесного контакта с Аг.

Область молекулы антител (Fab) определяет антигенную специфичность, а Fc осуществляет эффекторные функции.

Fab-фрагменты антитела взаимодействуют с антигенными детерминантами. Аг-связывающий центр комплементарен эпитопу Аг (принцип ключ-замок). Связывание Аг с AT нековалентно и обратимо.

Аффинность (сродство) Аг к антителу определяется физико-химическими свойствами взаимодействующих молекул и соотношением концентраций связанных и свободных Аг и антител.

На сродство влияют пространственное соответствие взаимодействующих участков молекул, электростатические, гидрофобные взаимодействия и силы Ван дер Ваальса.

Авидность — интегральная характеристика силы связи между Аг и AT, учитывающая взаимодействие всех активных центров с эпитопами Аг.

Валентность антитела — число активных (Аг-связывающих) центров антитела. Молекула полного Ig как минимум двухвалентна. Такие антитела известны как полные антитела; мономеры с меньшей валентностью — неполные антитела.

Полные антитела (в частности, IgM, IgG) вызывают агрегацию Аг, видимую невооружённым глазом (например, РА бактерий).

Неполные антитела содержат один Аг-связывающий центр и, поэтому, одновалентны (например, антитела, вырабатываемые при бруцеллёзе). Второй Аг-связывающий центр у подобных Ig экранирован различными структурами либо обладает низкой авидностью.

Неполные антитела функционально дефектны, так как не способны агрегировать Аг. Неполные AT могут связывать эпитопы Аг, препятствуя контакту с ними полных антител; поэтому их также называют блокирующими антителами.

Fc-фрагмент антитела

Константные участки тяжёлых цепей определяют характер взаимодействий антитела с клетками и молекулами иммунной системы, в частности специфичность связывания молекулы Ig с клетками-эффекторами (например, фагоцитами, тучными клетками), несущими на своей поверхности рецепторы к Fc-фрагменту.

Fc-фрагмент определяет также эффекторные функции антитела (например, активацию комплемента). Для реализации этих свойств сразу после связывания Аг Fab-фрагментами происходят конформационные изменения структуры Fc-фрагментов.

Пространственно изменённые Fc-фрагменты распознают фагоциты, именно они способствуют фиксации С1а-компонента комплемента и запуску комплементарного каскада по классическому пути.

В противном случае ни клетки, ни эффекторные молекулы были бы не в состоянии отличить интактные AT или антитела, связавшие Аг.

Взаимодействие антител с антигеном включает специфическую и неспецифическую фазы.

• Специфическая фаза протекает быстро и представляет специфическое взаимодействие активного центра с Аг.

• Неспецифическая фаза протекает медленнее, зависит от присутствия электролитов и свойств Аг. Корпускулярные Аг агрегируются в крупнодисперсные конгломераты и выпадают в осадок (феномен агглютинации).

Растворимые Аг образуют мелкодисперсные конгломераты (феномен преципитации), проявляющиеся помутнением раствора или образованием колец преципитации либо зон преципитации в гелях.

Константные участки лёгких цепей бывают двух типов — каппа (к) и ламбда; константные участи тяжёлых цепей представлены пятью основными формами — мю (р), гамма (у), дельта (8), альфа (а) и эпсилон (е). Каждая из них ассоциирована с отдельным классом Ig. Выделяют 5 классов AT: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM .

Молекулы IgG, IgD и IgE представлены мономерами, IgM — пентамерами; молекулы IgA в сыворотке крови — мономеры, а в экскретируемых жидкостях (слёзная жидкость, слюна, секреты слизистых оболочек) — димеры.

IgM синтезируются при первичном попадании Аг в организм. Пик образования приходится на 4-5-е сутки с последующим снижением титра. Образование IgM к некоторым Аг (например, жгутиковым Аг бактерий) осуществляется постоянно. К IgM относят значительную часть AT, вырабатывающихся к Аг грамотрицательных бактерий.

Наличие IgM к Аг конкретного возбудителя указывает на острый инфекционный процесс.

Молекула IgM — пентамер; пять субъединиц соединены J-цепью [от англ. joining, связывающий], в результате чего молекула IgM приобретает 10 Аг-связывающих участков.

Молекулы IgM опсонизируют, агглютинируют, преципитируют и лизируют содержащие Аг структуры, а также активируют систему комплемента по классическому пути (для комплементзависимого лизиса бактерии достаточно одной молекулы IgM).

Иммуноглобулин G ( IgG ) — основной класс AT (до 75% всех Ig), защищающий организм от бактерий, вирусов и токсинов. После первичного контакта с Аг синтез IgM обычно сменяется образованием IgG.

Максимальные титры IgG при первичном ответе наблюдают на 6-8-е сутки. Обнаружение высоких титров IgG к Аг конкретного возбудителя указывает на то, что организм находится на стадии реконвалесценции или конкретное заболевание перенесено недавно. В особо больших количествах IgG синтезируется при вторичном ответе.

IgG представлены 4 подклассами: IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4; их относительное содержание (в %) составляет соответственно 66-70, 23, 7-8 и 2-4.

IgG непосредственно участвуют в реакциях иммунного цитолиза, реакциях нейтрализации, а также усиливают фагоцитоз, действуя как опсонины и связывая рецепторы Fc-фрагмента в мембране фагоцитирующих клеток (в результате этого фагоциты эффективнее поглощают и лизируют микроорганизмы).

Только IgG способны проникать через плаценту, что обеспечивает формирование у плода пассивного иммунитета.

Иммуноглобулины А ( IgA ) циркулируют в сыворотке крови (составляет 15-20% от всех Ig), а также секретируются на поверхность эпителия. Присутствуют в слюне, слёзной жидкости, молоке и на поверхности слизистых оболочек.

AT класса IgА усиливают защитные свойства слизистых оболочек пищеварительного тракта, дыхательных, половых и мочевыделительных путей. В сыворотке крови IgA циркулируют в виде двухвалентных мономеров; в секретируемых жидкостях преобладают четырёхвалентные димеры, содержащие одну J-цепь и дополнительную полипептидную молекулу (синтезируемый эпителиальными клетками секреторный компонент).

Эта молекула присоединяется к мономерам IgA в ходе их транспорта через эпителиальные клетки на поверхность слизистых оболочек. Секреторный компонент участвует не только в связывании молекул IgA, но обеспечивает их внутриклеточный транспорт и выделение на поверхность слизистых, а также защищает IgA от переваривания протеолитическими ферментами .

Молекулы IgA участвуют в реакциях нейтрализации и агглютинации возбудителей. Кроме того, после образования комплекса Аг-АТ они участвуют в активации комплемента по альтернативному пути.

Иммуноглобулин Е ( IgE ) специфически взаимодействуют с тучными клетками и базофильными лейкоцитами, содержащими многочисленные гранулы с БАВ.

Их выделение из клетки (дегрануляция) вызывает резкое расширение просвета венул и увеличение проницаемости их стенки.

Подобную картину можно наблюдать при аллергических реакциях (например, бронхиальной астме, аллергическом рините, крапивнице).

Аг-связывающие Fab-фрагменты молекулы IgE специфически взаимодействуют с Аг, попавшим в организм. Сформированный иммунный комплекс взаимодействует с рецепторами Fc-фрагментов IgE, встроенных в клеточную мембрану базофила или тучной клетки. Это взаимодействие и является сигналом для дегрануляции с высвобождением гистамина и других БАВ и развёртыванием острой аллергической реакции.

Защитные свойства IgE направлены преимущественно против гельминтов (нематод). Синтез IgE увеличивается при паразитарных инвазиях, IgE-моноклональной миеломе, а также первичных иммунодефицитах (атаксия-телеангиэктазия, синдромы Вискотта-Олдрича, Незелбфа, Ди Джорджи).

Значение анализов на антитела IgG, IgM, IgA в диагностике инфекций

В онлайн-лаборатории Lab4U мы хотим, чтобы каждый из вас мог заботиться о своем здоровье. Для этого мы просто и понятно рассказываем о показателях организма.

В онлайн-лаборатории Lab4U делаются серологические исследования для обнаружения антигенов возбудителя и специфических антител к ним — это самый точный метод диагностики инфекционных заболеваний. «Зачем надо сдавать анализ на антитела для диагностики инфекций?». Такой вопрос может возникнуть после направления врача в лабораторию. Попробуем на него ответить.

Содержание

Что такое антитела? И как расшифровать результаты анализа?

Антитела — это белки, которые иммунная система вырабатывает в ответ на проникновение инфекции. В лабораторной диагностике именно антитела служат маркером проникновения инфекции.

Общим правилом подготовки к анализу на антитела является сдавать кровь из вены натощак (после приема пищи должно пройти не менее четырех часов). В современной лаборатории сыворотку крови исследуют на автоматическом анализаторе с использованием соответствующих реагентов.

Иногда серологический анализ на антитела является единственным способом диагностики инфекционных заболеваний.

Анализы на инфекции могут быть качественными (дают ответ, есть ли инфекция в крови) и количественными (показывают уровень содержания антител в крови).

Норма антител для каждой инфекции своя (для некоторых их не должно быть совсем). Референсные значения (показатели нормы) антител можно получить с результатом анализа.

В онлайн-лаборатории Lab4U можно сдатькомплекс анализов на все TORCH-инфекции за один раз и со скидкой 50%!

Различные классы антител IgG, IgM, IgA

Иммуноферментный анализ определяет антитела инфекций относящиеся к различным классам Ig (G, A, M).

Антитела к вирусу, при наличии инфекции, определяются на очень ранней стадии, что обеспечивает эффективную диагностику и контроль течения заболеваний.

Самые распространенные методы диагностики инфекций — это тесты на антитела класса IgM (острая фаза течения инфекции) и антитела класса IgG (устойчивый иммунитет к инфекции). Эти антитела определяют для большинства инфекций.

Однако, один из самых распространенных анализов — госпитальный скрининг (анализы на ВИЧ, сифилис и гепатиты B и С) не дифференцирует тип антител, поскольку наличие антител к вирусам данных инфекций автоматически предполагает хроническое течение заболеваний и является противопоказанием, например, для серьезных хирургических вмешательств. Поэтому важно опровергнуть или подтвердить диагноз.

Детальную диагностику типа и количества антител при диагностированном заболевании можно сделать, сдав анализ на каждую конкретную инфекцию и тип антител. Первичная инфекция выявляется при обнаружении диагностически значимого уровня антител IgM в образце крови или значимым ростом числа антител IgA или IgG в парных сыворотках, взятых с интервалом 1-4 недели.

Реинфекция, или повторная инфекция, выявляется быстрым подъемом уровня антител IgA или IgG. Антитела IgA имеют более высокую концентрацию у пациентов старшего возраста и более точно диагностируют текущую инфекцию у взрослых.

Перенесенная инфекция в крови определяется как повышенные антитела IgG без роста их концентрации в парных образцах, взятых с интервалом 2 недели. При этом отсутствуют антитела классов IgM и А.

Антитела IgM

Их концентрация повышается вскоре после заболевания.

Антитела IgM определяются уже через 5 дней после его начала и достигают пика в промежутке от одной до четырех недель, затем снижаются до диагностически незначительных уровней в течение нескольких месяцев даже без проведенного лечения.

Однако, для полной диагностики недостаточно определения только антител класса М: отсутствие этого класса антител еще не говорит об отсутствии заболевания. Острой формы заболевания нет, но может быть хроническая.

Антитела IgM имеют большое значение в диагностике гепатита А и детских инфекций (краснуха, коклюш, ветрянка), легко передающихся воздушно-капельным путем, так как важно как можно раньше выявить заболевание и изолировать заболевшего.

Антитела IgG

Основная роль антител IgG — это длительная защита организма от большинства бактерий и вирусов — хотя их выработка происходит более медленно, но ответ на антигенный раздражитель сохраняется более устойчивым, чем у антител класса IgM.

Уровни антител IgG повышаются медленнее (через 15-20 дней после начала заболевания), чем IgM, но остаются повышенными дольше, поэтому могут показывать давно текущую инфекцию при отсутствии IgM АТ. IgG могут находиться на низком уровне в течение многих лет, но, при повторном воздействии того же антигена, уровень антител IgG быстро повышается.

Для полной диагностической картины необходимо определить антитела IgA и IgG одновременно. При неясном результате IgA, подтверждение осуществляется определением IgM.

В случае положительного результата и для точной диагностики второй анализ, сделанный через 8-14 дней после первого, должен быть проверен параллельно для определения роста концентрации IgG.

Результаты анализа должны интерпретироваться в комплексе с информацией, полученной в других диагностических процедурах.

Антитела IgG, в частности, используются для диагностики Helicobacter pylori — одной из причин язвы и гастрита.

Антитела IgA

В сыворотке появляются через 10-14 дней после начала заболевания, и вначале их даже можно обнаружить в семенной и вагинальной жидкостях.

Уровень антител IgA обычно снижается к 2-4 месяцу после инфицирования в случае успешного лечения. При повторном инфицировании уровень антител IgA вновь возрастает.

Если уровень IgA не падает после проведенного лечения, то это — признак хронической формы инфекции.

Анализ на антитела в диагностике TORCH-инфекций

• Аббревиатура TORCH появилась в 70-х годах прошлого столетия, и состоит из заглавных букв латинских названий группы инфекций, отличительной особенностью которых является то, что при относительной безопасности для детей и взрослых, TORCH инфекции при беременности представляют чрезвычайную опасность.
• Анализ крови на TORCH инфекции является комплексным исследованием, в его состав входит 8 тестов:
• — Определение антител к вирусу простого герпеса 1,2 типа IgM и IgG
• — Определение антител к цитомегаловирусу IgM и IgG
• — Определение антител к вирусу краснухи IgM и IgG
• — Определение антител к Toxoplasma gondii IgM и IgG

Нередко, заражение женщины инфекциями TORCH-комплекса во время беременности (наличие в крови только антител IgM) является показанием для ее прерывания.

В заключение

Иногда, обнаружив в результатах анализа антитела IgG, например, токсоплазмоза или герпеса, пациенты приходят в панику, не посмотрев на то, что антитела IgM, которые показывают наличие текущей инфекции, могут отсутствовать вовсе. В этом случае анализ говорит о перенесенной ранее инфекции, к которой выработался иммунитет.

В любом случае, интерпретацию результатов анализа лучше доверить врачу, и с ним же в случае необходимости определиться с тактикой лечения. А сдать анализы вы можете доверить нам.

Почему быстрее, удобнее и выгоднее сдавать анализы в Lab4U?

1. Вам не нужно долго ждать в регистратуре
2. Все оформление и оплата заказа происходит онлайн за 2 минуты.
3. Путь до медцентра не займет более 20 минут
4. Наша сеть вторая по величине в Москве, а еще мы есть в 23 городах России.

5. Сумма чека не шокирует вас
6. Постоянная скидка в 50% действует на большинство наших анализов.
7. Вам не придется приходить минута-в-минуту или ждать в очереди
8. Сдача анализа происходит по записи в удобный промежуток времени, например с 19 до 20.

9. Вам не придется долго ждать результатов или ходить за ними в лабораторию

Мы пришлем их на эл. почту в момент готовности.

Антигрупповые антитела со стандартными эритроцитами (естественные анти-А, анти-В, иммунные неполные анти-А, анти-В)

Определение наличия антител к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, свидетельствующим о сенсибилизации организма к этим антигенам. Данные антитела являются одной из возможных причин гемолитической болезни новорождённых.

• Синонимы русские
• Титр антигрупповых антител, анализ на совместимость по группе крови, анализ на групповую (АВ) сенсибилизацию, анализ на АВО гемолитическую болезнь новорождённых (АВО ГБН), скрининг беременных на анти-А и анти-В, титр анти-А и анти-В.
• Синонимы английские
• Titration of anti-A/B antibody, screening of antenatal women for anti-A/B antibodies, ABO incompatibility test, test for hemolytic disease ABO, Anti-A and anti-B titers, titers of ABO antibodies, Anti-A/B in blood is maternal IgG.
• Метод исследования
• Реакция агглютинации.
• Какой биоматериал можно использовать для исследования?
• Венозную кровь.
• Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.
• Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.

Общая информация об исследовании

Эритроциты – это красные кровяные клетки (тельца), главная функция которых заключается в переносе молекул кислорода по организму. На своей поверхности они несут особые белки – агглютиногены.

В плазме крови циркулируют агглютинины (антитела) против чужих агглютиногенов, не свойственных собственной группе крови. Существует два групповых агглютиногена – А и В – и два групповых агглютинина – α и β. Наличие тех или иных агглютининов и агглютиногенов определяет группу крови.

Если по каким-то причинам в кровяное русло попадают чужие агглютиногены, то запускается реакция антиген-антитело и они уничтожаются агглютинами. При этом происходит склеивание несовместимых эритроцитов – агглютинация.

Поэтому так важно при переливании использовать кровь, не содержащую агглютиногенов, против которых у реципиента есть антитела, т.е. полностью совместимую.

Люди с О(I) группой являются универсальными донорами, а с AB (IV) – универсальными реципиентами. У детей возможно переливание цельной крови только одноименной группы.

У взрослых же допускается в безвыходных ситуациях использование О (I) группы, но при этом ее количество должно быть ограничено.

Это объясняется тем, что групповые антитела у доноров с этой группой (особенно анти-А) иногда носят иммунный характер, бывают очень активными и могут разрушить кровяные тельца в крови реципиента другой группы.

Кроме переливания, также во время беременности возможна такая ситуация, если у матери и плода разные группы крови, а плацента по разным причинам не может выполнять барьерную функцию.

В таком случае агглютинины матери «атакуют» красные тельца ребенка, высвобождая гемоглобин и способствуя кислородному голоданию.

При этом появляется риск развития гемолитической болезни плода, которая приводит к патологическому развития его органов (головного мозга, сердечно-сосудистой системы, печени). Развитие межгруппового конфликта возможно не ранее 8-10 недели беременности.

Считается, что чуть меньше половины беременных находятся в зоне риска по групповой несовместимости. Такое возможно, если у матери 0 (1) группа, у отца A (II), B (III) или AB (IV); мать имеет A (II), отец – B (III) или AB (IV), у матери B (III), у отца A (II) или AB (IV).

Чаще всего конфликт бывает, когда у матери первая группа крови, а у плода – вторая. Это связано с тем, что среди групповых антигенов А и В большей иммуногенностью обладает аллотип А1. По ряду источников, групповая сенсибилизация по А встречается с частотой 1:150 рождений.

Если во время беременности не было факторов, снижающих защитную роль плаценты (например, поражение ее сосудов, отслойка), то риск возникновения конфликта по группе крови минимальный.

Но и в этом случае не стоит забывать, что кровь может смешаться во время родов и у новорождённого это проявится желтухой, а в крайне редких случаях разовьется гемолитическая болезнь.

В целом риск развития группового конфликта меньше, чем резус-конфликта (по резус-фактору), и проявления менее выражены. В ряде случаев его можно заподозрить только по желтухе новорождённого.

Беременным из группы риска рекомендуется ежемесячно проводить тестирование на групповую сенсибилизацию, а в случае необходимости – еще чаще.

Следует помнить, что при ошибочном переливании несовместимой крови иммунные анти-А или анти-В появляются обычно на 5-7-й день. Их титр постепенно нарастает и становится максимальным к 15-25-му дню с последующим падением. Одновременно с этим повышается титр естественных антител, который также снижается после 25-30-го дня.

Для чего используется исследование?

• Для определения антигруппового конфликта;
• для решения вопроса о причинах гемотрансфузионных осложнений;
• для дифференциальной диагностики возможных причин гемолитической болезни у новорождённого.

Когда назначается исследование?

• При невынашивании беременности;
• при спонтанных выкидышах в анамнезе;
• при наблюдении за беременными из группы риска (профилактика групповой сенсибилизации);
• при подозрении на гемолитическую болезнь плода по данным других исследований (например, увеличение печени по УЗИ);
• при наличии гемолитической болезни новорождённых у предыдущего ребёнка;
• в схеме подготовки к гемотрансфузии;
• при иммуногематологическом обследовании пациентов с гемотрансфузионными осложнениями.

Что означают результаты?

Официальные референсные диапазоны для данного теста не предоставляются. Интерпретация результата должна осуществляться лечащим врачом-клиницистом с учетом всех клинических, анамнестических и лабораторных данных.

Что может влиять на результат?

• Прием лекарственных средств;
• наличие сопутствующих заболеваний;
• «кровяные химеры» (две популяции эритроцитов, отличающихся по группе крови и другим антигенам, одновременно циркулирующих в крови); такое возможно, например, в результате многократного переливания эритроцитной массы или взвеси группы 0(I) реципиентам другой группы.

Важные замечания

• Титр антител не всегда указывает на гемолитическую болезнь новорождённых и степень ее тяжести. Возможны ситуации, когда при высоком титре рождается здоровый ребенок, а при низких – с признаками, указывающими на внутриутробную гипоксию. Но в любом случае необходим динамический контроль за анти-А, анти-В, за состоянием плода.
• Если в результате анализа у матери обнаружены только естественные анти-А и анти-В, значит, плацента находится в нормальном состоянии и риск антигруппового конфликта минимален.
• Для объективности получаемых данных необходимо проводить исследование в динамике всей беременности (не реже 1 раза в месяц, после 30-й недели или по показаниям – один раз в 2 недели).
• Возможны скачкообразные изменения титров антигенов, что скажется на динамике выработки антител.

1. Также рекомендуется
2. Кто назначает исследование?
3. Гематолог, гинеколог, врач общей практики.
4. Литература

• Донсков С.И., Мороков В.А. Группы крови человека. Руководство по иммуносерологии. М., 2011. С. 983–984.
• Roback JD, Combs MR, Grossman B, Hillyer C. Technical Manual of the American Association of Blood Banks. 16th ed. Bethesda, Md: AABB Press; 2008;
• iprin JH, Payne E, Hamidi J, Roberts I, Regan F. ABO incompatibility due to immunoglobulin G anti-B antibodies presenting with severe fetal anemia. Transfus Med 2005;15:57–60;
• Thompson S, Eggington J, Dodd A (2003) Late developing red cell antibodies in pregnancy. Transfusion Medicine 13: 8-9;
• Mollison PL, Engelfret CP, Contreras M, editors (2005) Blood transfusion in clinical medicine, (11th edn), Oxford Blackwell Science, New Jersey. Pg no: 508;
• Hendrickson Jeanne E., Delaney Meghan, Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn: Modern Practice and Future Investigations, Transfusion Medicine. Reviews (2016), doi: 10.1016/j.tmrv.2016.05.008.

Диагностика аутоиммунных заболеваний и синдромов

Антиядерные (антинуклеарные) антитела, ANA — (от англ. anti-nuclear antibodies; в России широко распространен менее удачный синоним — АНФ, антинуклеарный фактор, который не отражает давно установленную биологическую природу явления) — антитела против основных компонентов ядра клетки (нуклеопротеиды, белки хроматина и др.).

При системных аутоиммунных заболеваниях, а также в процессе развития многих других патологических состояний происходит сенсибилизация лимфоцитов к собственным белкам организма и вырабатываются аутоантитела, направленные против антигенов компонентов клеточных ядер и цитоплазмы.

Образующиеся иммунные комплексы аутоантиген-аутоантитело откладываются на базальных мембранах различных тканей и органов (кожа, почки, синовиальные, серозные оболочки, мозг и т. п.), а также снабжающих их кровью сосудов, активируя систему комплемента и вызывая воспаление и повреждение тканей.

При этом повышается лизосомальная активность, выделяются медиаторы воспаления. Цитотоксическое действие оказывают фиксируемый иммунными комплексами комплемент и сенсибилизированные лимфоциты. Поражение сосудов на уровне микроциркуляторного русла лежит в основе системного повреждения соединительной ткани и паренхиматозных органов.

Исследование на антиядерные антитела проводят, если возникает подозрение на аутоиммунное заболевание или присоединение аутоиммунного компонента, играющего существенную роль в патогенезе многих нозоформ.

Тест на ANA высокочувствителен (до 98%) при системной красной волчанке, однако  положительные результаты могут наблюдаться при других коллагенозах и иммунокомплексных заболеваниях, а также при прочих заболеваниях, протекающих с развитием аутоиммунного компонента.

Результаты теста, полученные в разных лабораториях, могут отличаться вследствие особенностей использующихся методов. Поэтому полноценный лабораторный ответ при исследовании антинуклеарных антител обязательно должен включать описание использованного метода.

Очень обширный перечень антигенов, объединенных в понятие «ядерные», требует также обязательного уточнения, антитела к каким из них могут быть выявлены используемым методом, а к каким — не могут.

Иммунофлюоресцентные методы, в которых в качестве субстрата используются животные клетки, позволяют, помимо антиядерных антител, выявлять и дифференцировать также антитела к некоторым компонентам цитоплазмы, что расширяет их возможности.

Показания к назначению анализа: диагностика и дифференциальная диагностика системных заболеваний соединительной ткани (особенно СКВ), аутоиммунного гепатита, вирусного гепатита с аутоиммунным компонентом (индуцированным вирусами или лечебными вмешательствами), первичного билиарного цирроза, рассеянного склероза; выявление аутоиммунного компонента при различных заболеваниях, в патогенезе которых может играть роль аутоагрессия. Материал для исследования: сыворотка крови.

• Для определения антинуклеарных антител используется методика непрямой иммунофлюоресценции с использованием в качестве субстрата клеток культивируемой линии Нер-2.
• Все вышеперечисленные особенности обязательно отражаются в лабораторном заключении, где, помимо указания типа свечения и соответствующего ему наиболее вероятного типа антител, даются также рекомендации по трактовке результатов в смысле возможной ассоциации с конкретными нозоформами или синдромами, а также необходимые дополнительные лабораторные исследования.
• Достоинством метода иммунофлюоресценции с использованием клеток злокачественных культивируемых линий является также возможность выявления антител к некоторым антигенам цитоплазматической локализации: митохондриям, актину, лизосомам и др.

Образец (исследуемая сыворотка крови) инкубируется с субстратом, если в сыворотке присутствуют аутоантитела к ядерным или цитоплазматическим антигенам, они связываются с соответствующими компонентами субстрата с образованием комплекса антиген-антитело, который выявляется конъюгатом — антителами против иммуноглобулинов человека, меченными ФИТЦ. В результате при изучении с помощью люминесцентного микроскопа выявляется специфическая флюоресценция соответствующих ядерных или цитоплазматических структур клеток. Использование в качестве субстрата клеток злокачественной культивируемой линии благодаря их особенностям (высокое ядерно-цитоплазматическое соотношение, крупные размеры, наличие большого количества митозов) позволяет оценить различные типы свечения, характерные для присутствия в образце крови широкого спектра антител к различным антигенам, имеющих различные клинические ассоциации.Следует иметь в виду, что часть из определяемых типов свечения является высокоспецифичной, четко ассоциирована с определенными заболеваниями и имеет вполне определенную диагностическую значимость, в особенности при выявлении в высоких титрах; однако некоторые антитела к различным антигенам могут давать сходные типы свечения, в таких случаях может требоваться дальнейшее обследование для уточнения конкретного антигена, к которому направлены аутоантитела. С другой стороны, определенный тип антител может встречаться при нескольких нозологических формах. Существуют также антитела (они встречаются редко), реагирующие исключительно с компонентами веретенного аппарата клеток; обычно они не связаны с аутоиммунными заболеваниями, и их обнаружение расценивается как ложнопозитивный, не имеющий клинических ассоциаций результат.Некоторые из выявляемых антиядерных и антицитоплазматических антител с характерными для них видами свечения и клиническими ассоциациями приведены ниже:

• ядерный гомогенный тип — антитела (АТ) к ДНК (двух- и односпиральной), антитела к ДНП (дезоксинуклеопротеид — комплекс ДНК с гистонами), антитела к гистонам, антитела к другим компонентам хроматина (протамины и т.д.); клинические ассоциации — СКВ (анти-ДНК, антитела к гистонам — в высоких титрах); лекарственная волчанка, ревматоидный артрит (антитела к гистонам);
• ядерный периферический тип — АТ к двухспиральной ДНК, гистонам; клинические ассоциации — СКВ, лекарственная волчанка);
• ядерно-мембранный ламиновый тип — АТ  к ламинам (фибриллярным белкам мембраны ядра); клинические ассоциации — СКВ, линейная склеродермия, ревматоидный артрит, сочетанный синдром гепатит/тромбопения/анемия;
• ядерно-мембранный кольцеобразный тип с крапчатым свечением цитоплазмы — антимитохондриальные антитела к компонентам митохондрий М2 (пируватдегидрогеназный комплекс), М3, М6; клинические ассоциации см. митохондриальный тип;
• ядерные каналы — АТ к белкам комплекса канальцев ядерной мембраны; клинические ассоциации — полимиозит;
• перихроминовый тип — АТ к перихромину; клинические ассоциации — СКВ;
• гетерогенный ядерный РНП (рибонуклеопротеин) — АТ к различным компонентам матрикса ядра; клинические ассоциации — смешанное заболевание соединительной ткани (СЗСТ);
• Sm/РНП  — АТ к ядерному РНП или Sm-комплексу; клинические ассоциации — СКВ, СЗСТ (антитела к Sm); синдром Шегрена, склеродермия, ревматоидный артрит, СКВ, дискоидная волчанка, вызванная прокаинамидом (антитела к РНП);
• центромерный тип — АТ к центромере (кинетохору); клинические ассоциации — синдром CREST (кальциноз, феномен Рейно, дисфункция пищевода, склеродактилия, телеангиэктазия), склеродермия, первичный билиарный цирроз
• ядерный крапчатый тип (NSP1) — АТ против слабо охарактеризованных белков, часто сочетающиеся с антителами к актину или митохондриям; клинические ассоциации — первичный билиарный цирроз (NSP1 + митохондриальный тип), хронический активный гепатит (NSP1 + актин);
• ядрышковый гомогенный тип — АТ к нуклеолину и другим компонентам ядрышек; клинические ассоциации — сочетанный синдром полимиозита/склеродермии, склеродермия в основном с поражением почек;  
• ядрышково-кластерный тип — АТ к фибриллярину (7-2-РНК), антитела к рибонуклеопротеину U3РНП; клинические ассоциации — склеродермия, обнаруживаемая в основном у молодых мужчин;
• ядрышково-крапчатый тип — АТ к Scl-70 (АТ к топоизомеразе 1); клинические ассоциации — склеродермия;
• митохондриальный (цитоплазматический) тип — АТ к М2 (пируватдегидрогеназный комплекс), М3, М6 компонентам митохондрий (антитела к М1 и М5 на клетках Hep-2 не выявляются); клинические ассоциации — первичный билиарный цирроз, лекарственная СКВ (антитела к М3, М6), хронический активный гепатит, синдром Рейнольдса, синдром Шегрена, ревматоидный артрит;
• мелкокрапчатый (цитоплазматический) тип — АТ к различным цитоплазматическим белкам, например, SPR (signal recognition particle — частица, распознающая сигнал); клинические ассоциации — миозит;
• перинуклеарный тип — АТ к антигенам Jo-7, PL1, PL7, PL12; клинические ассоциации — полимиозит, в основном в сочетании с соединительнотканным заболеванием легких; дерматомиозит;
• рибосомальный тип — АТ к антигенам рибосом; клинические ассоциации — СКВ, в основном с неврологической симптоматикой, ревматоидный артрит, синдром Шарпа;
• актин — АТ к актину (антитела к гладкой мускулатуре); клинические ассоциации — хронический активный гепатит, первичный билиарный цирроз;
• тубулин — АТ к тубулину; клинические ассоциации — алкогольный цирроз, тиреоидит Хашимото, склеродермия, синдром CREST, феномен Рейно;
• цитокератин — АТ к цитокератину; клинические ассоциации — ревматоидный артрит, склеродермия, СКВ.

У здоровых лиц моложе 60 лет следует ожидать отрицательных результатов на антитела к компонентам ядра и цитоплазмы; в низком титре (слабоположительный результат) эти антитела все же обнаруживаются у 2-3% (по некоторым данным, до 10%) практически здоровых людей, однако никогда нельзя предсказать, не разовьется ли у этих людей аутоиммунное заболевание в будущем (так, по данным некоторых авторов, антитела к ДНК начинают выявляться задолго до начала клинических проявлений СКВ, латентный период может продолжаться годами). После  60 лет частота слабоположительных результатов с возрастом постоянно растет. Клиническая значимость этих результатов остается неясной; как правило, они выявляются только в первичном (скрининговом) разведении 1:40. Исходя из этого, при выявлении положительного результата в скрининговом титре 1:40 всегда необходимо титрование, как минимум до диагностического титра 1:80. В любом случае представляется целесообразным последующее регулярное клинико-лабо­ра­торное наблюдение лиц, у которых выявлены ANA в низком титре.

ОГРАНИЧЕНИЯ МЕТОДА Положительный результат предполагает наличие определенных заболеваний (см. ниже), однако, как и результат любых лабораторных исследований, может нуждаться в подтверждении или уточнении с помощью других методов, а также в установлении клинико-лабораторных корреляций.

Надо иметь в виду, что различные лекарственные препараты могут вызывать образование аутоантител (гидралазин, прокаинамид, фенитоин, карбамазепин, изониазид, хлорпромазин, пеницилламин, леводофа, пенициллин, фенилбутазон, пероральные контрацептивы, хинидин).

Наиболее частыми мишенями для этих ятрогенных аутоантител являются ядерные гистоны, что приводит к развитию гомогенного или гомогенного периферического типа свечения.

• Системные поражения соединительной ткани:

1. — системная красная волчанка (СКВ), — ревматоидный артрит,- синдром Шегрена, — склеродермия,- дерматомиозит,
2. — узелковый периартериит и др.

   ;

• Инфекции (туберкулез, инфекционный мононуклеоз, острый и особенно хронический вирусный гепатит, подострый инфекционный эндокардит, ВИЧ-инфекция и др.);
• Хронический аутоиммунный гепатит, первичный билиарный цирроз печени;
• Сахарный диабет (инсулинзависимый); 
• Множественный склероз; 
• Легочной фиброз;
• Системные васкулиты.

Антинуклеарные антитела также могут выявляться при острых и хронических лейкозах, приобретенной гемолитической анемии, болезни Вальденстрема, малярии, хронической почечной недостаточности, тромбоцитопениях, лимфопролиферативных заболеваниях, миастении и тимомах.

Титры антинуклеарных антител при узелковом периартериите могут достигать 1:100, при дерматомиозите — 1:500, СКВ — 1:1000 и выше.

При СКВ тест на выявление антинуклеарных антител методом непрямой иммунофлюоресценции обладает высокой степенью чувствительности (до 98% по данным разных авторов), но умеренной специфичностью (78%), так как антинуклеарные антитела могут встречаться и при других, указанных выше, заболеваниях.

Для сравнения, тест определения антител к нативной ДНК с помощью ИФА в диагностике СКВ обладает значительно меньшей чувствительностью — 38% (т.к.

патогенетическую роль в развитии СКВ могут играть не только антитела к ДНК, но и антитела к гистонам, дезоксирибонуклеопротеину и многим другим ядерным антигенам); однако специфичность определения антител к нативной ДНК для диагноза СКВ является почти абсолютной (98%).

Клиническая интерпретация этих различий в чувствительности и специфичности разных лабораторных тестов в диагностике СКВ выглядит следующим образом: отрицательный результат обнаружения антител к нативной ДНК с помощью ИФА не исключает диагноз СКВ, обнаружение же этих антител практически со 100% вероятностью подтверждает диагноз.

Другая ситуация имеется в отношении АНФ: отрицательный (особенно многократный) результат обнаружения антинуклеарных антител методом непрямой иммунофлюоресценции делает диагноз СКВ (во всяком случае, активной формы) весьма сомнительным (т.к. метод обнаруживает практически все аутоантитела, встречающиеся при СКВ), обнаружение же антинуклеарных антител не всегда будет достаточным основанием для постановки диагноза СКВ, оно подтверждает наличие феномена аутоиммунитета и обычно требует для установления окончательного диагноза дальнейшей клинико-лабораторной дифференциации с учетом типа свечения, титра антител, проведения дополнительных уточняющих или подтверждающих тестов, рекомендованных лабораторией, сопоставления результатов с клинической картиной.

При СКВ корреляция между величиной титра ANA и клиническим состоянием обычно отсутствует, хотя сохранение высоких титров в течение длительного времени является неблагоприятным прогностическим признаком.

Снижение уровня антител предвещает ремиссию, но иногда — летальный исход (феномен потребления антител: при нарастающем аутоиммунном повреждении тканей темп высвобождения ядерных антигенов, с которыми связываются наработанные антиядерные антитела, превышает скорость синтеза новых аутоантител).

При склеродермии частота выявления антител к ядерным антигенам составляет 60-80%, их титр обычно ниже, чем при СКВ. При ревматоидном артрите часто встречаются СКВ-подобные формы течения, поэтому довольно часто выявляются ANA.

При дерматомиозите антитела к ядерным антигенам в крови встречаются в 20-60% случаев, при узелковом периартериите — в 17% (титр до 1:100), при болезни Шегрена — в 56% в сочетании с артритом и в 88% случаев — при комбинации с синдромом Гужеро-Шегрена.

При дискоидной (кожной) красной волчанке антинуклеарный фактор выявляется у 50% больных.

Частота обнаружения антинуклеарных антител при ревматическихзаболеваниях и у здоровых лиц (Насонова В.А. и др., 1997)

Заболевание	Частота выявления ANA, %	Титры
СКВ — активная форма	98-100	+++
Дискоидная красная волчанка	40	++, +++
Лекарственная волчанка	100	++
Системная склеродермия	70	++, +++
Синдром Шегрена	60	++, +++
Смешанное заболевание соединительной ткани	100	++, +++
Болезнь Рейно	60	++, +++
Ревматоидный артрит	40	+, ++
Ювенильный хронический артрит	20	+, ++
Полимиозит и дерматомиозит	30	+
Узелковый периартериит	17	+
Здоровые лица до 40 лет	3	+
Здоровые лица после 40 лет	25	+