Бактероиды группы bacteroides fragilis. бактероиды группы bacteroides ureolytсus. принципы микробиологической диагностики бактероидов. лечение заражений бактероидами.

Назад к списку

29.08.2017

Бактероиды (Bacteroides) были впервые обнаружены в 1898 году учеными Вейоном и Зюбером (A. Veillon, H. Zuber).

Микроорганизмы выделены у больного с абдоминальным абсцессом и получили название Bacillus fragilis. Спустя 14 лет Дистазо (A. Distaso) обнаружил их у здоровых людей, а через семь лет Кастеллани (A.

Castellani) и Чалмерс (A. J. Chalmers) дали этим палочкам название Бактероиды.

Внешний вид под микроскопом

Бактероиды при микроскопии могут иметь разную форму. Преимущественно это небольшие палочки, не окрашивающиеся по Граму. У отдельных видов эти палочки не обособляются при размножении, в результате чего получаются скопления бактерий, напоминающие ветви.

Иногда у бактероидов имеются в одном из концов утолщенные вакуоли, за счет чего клетка приобретает форму кеглей или булавы. Поэтому их легко спутать с коринебактериями или спорообразующими бактериями.

Бактероиды имеют жгутики и способны к образованию капсулы, позволяющей переждать неблагоприятные для жизни условия.

Где обитает

В норме представители Bacteroides у человека колонизируют толстую кишку и являются типичными представителями нормофлоры, наряду с лакто- и бифидобактериями. В фекалиях здорового человека около 40-50% всех микробных клеток составляют бактероиды.

Классификация

• Царство
  Bacteria
• Тип
  Bacteroidetes
• Класс
  Bacteroidia
• Порядок
  Bacteroidales
• Семейство
  Bacteroidaceae
• Род
  Bacteroides
• Prevotella

Свойства

Бактероиды способны утилизировать сахарозу, мальтозу, глюкозу, рамнозу. Продуцируют янтарную, изовалериановую, уксусную и масляную кислоту. Вырабатывают вещества, способные инактивировать антибиотики пенициллового и цефалоспоринового ряда. Для роста необходим углекислый газ в концентрации 5-10% и температурный диапазон от +25 до +45°С. Оптимальная температура +37°С.

Функции

Биологическая роль бактероидов в толстом кишечнике изучена недостаточно. Однако доказана их антагонистическая активность по отношению к сальмонеллам, шигеллам и некоторым патологическим эшерихиям. Можно предположить, что, колонизируя толстый кишечник, представители Bacteroides защищают своего хозяина от инфекционных энтероколитов, вызванных патогенными микроорганизмами.

Вызываемые заболевания

В условиях нарушения иммунитета бактероиды проявляют свою патогенную активность.

Они не вырабатывают эндотоксичные вещества, но, поскольку имеют полисахаридную капсулу, могут спровоцировать выработку антител в организме хозяина.

В ассоциации с другими патогенными и условно-патогенными бактериями, Bacteroides способны вызывать перитонит, кольпит, пневмонию, пародонтоз, абсцессы, аппендицит, эндокардиты, заболевания слизистых оболочек и кожи.

Профилактика и лечение

Для подавления роста и размножения бактероидов используются антибиотики, в частности, ципрофлоксацин, офлоксацин, метронидазол, клиндамицин, левомицитин.

Общеукрепляющие процедуры и элементарная гигиена, защита от стрессов и нормализация пищевого поведения (отказ от голодания и переедания), а также сбалансированный рацион питания способствуют защите от чрезмерного размножения бактероидов.

Назад к списку

Bacteroides fragilis характеристика, морфология, патология, культура / биология

Bacteroides fragilis представляет собой группу бактерий с облигатной анаэробной бациллярной формой, не спорулированной, грамотрицательной. Она включает в себя B. fragilis, B. distasonis, B. ovatus, B. vulgatus, B. thetaiotaomicron., B. caccae, B. eggerthii, B. merdae, B. stercoris и B. униформис.  

Все эти бациллы имеют сходство по факторам вирулентности и устойчивости к антибиотикам. Кроме того, они представляют 1% микробиоты толстой кишки человека, где они обычно живут в безвредных отношениях между хозяином и хозяином.

Тем не менее, штаммы группы Bacteroides fragilis являются патогенными микроорганизмами, наиболее часто встречающимися при клинически важных инфекциях, вызываемых анаэробными бактериями или смешанными инфекциями.

Это означает, что важно не количество этих бактерий в толстой кишке, а их факторы вирулентности, которые делают их процветающими в качестве важных инфекционных агентов.

С другой стороны, эти микроорганизмы относительно устойчивы к кислороду, и их участие в полимикробных инфекциях имеет важное значение. То есть они помогают другим анаэробам оставаться жизнеспособными, помогая снизить вероятность окислительно-восстановительного воздействия..

Большинство инфекций являются оппортунистическими и эндогенными. Это означает, что они представлены инвазией слизистой оболочки кишечника опухолями, операциями, дивертикулезом или другими причинами, и, покидая свою нишу, они вызывают сепсис и абсцесс брюшной полости..

индекс

• 1 Характеристики
• 2 Таксономия
• 3 Морфология
• 4 Факторы вирулентности
• 5 патологий
• 6 Биохимические характеристики
• 7 Диагноз
• 8 Выращивание
• 9 Лечение
• 10 ссылок

черты

Bacteroides fragilis является одним из видов этого рода, который устойчив к желчи, а также имеет высокую устойчивость к противомикробным агентам.

Эта устойчивость встречается главным образом против бета-лактамных антибиотиков (пенициллина и цефалоспоринов) из-за производства бета-лактамаз, среди которых преобладает цефалоспориназа..

Тем не менее, некоторые бета-лактамные антибиотики устойчивы к воздействию этих ферментов и, следовательно, иногда полезны против B. fragilis. Этими антибиотиками являются тикарциллин, пиперациллин, цефокситин и имипенем..

Но проблема резистентности не стоит на месте, так что каждый раз бактерии приобретают все больше механизмов, чтобы уклоняться от действия этих лекарств. Таким образом, проценты лекарственной устойчивости, упомянутые выше, уже зарегистрированы, а также для тетрациклинов и клиндамицина..

На сегодняшний день метронидазол и хлорамфеникол эффективны против почти всех штаммов B. fragilis.

таксономия

• царство: бактерия
• фила: Bacterioidetes
• класс: Bacteroidia
• заказ: Bacteroidales
• семья: Bacteroidaceae
• жанр: Bacteroides
• вид: ломкая

морфология

Микроскопически они представляют собой относительно короткие, бледные грамотрицательные бациллы с закругленными концами, которые придают им кокобацилярный вид.

Размеры бацилл от 0,5 до 0,8 мкм в диаметре и от 1,5 до 9 мкм в длину.

Они также обладают определенным полиморфизмом (как по размеру, так и по форме), когда они происходят из жидких культур, а также показывают неравномерность в окрашивании и некоторых вакуолях..

Эти бациллы не образуют спор и не обладают жгутиками, то есть они неподвижны.

Колонии от белого до серого полупрозрачные, гладкие и негемолитические. Они представляют изгибы или кольцевые структуры внутри колонии. Мера 1 — 3 мм в диаметре.

Факторы вирулентности

Bacteroides fragilis это довольно опасный микроорганизм.

Он продуцирует ферменты нейраминидазу, гиалуронидазу, желатиназу, фибринолизин, супероксиддисмутазу, каталазу, ДНКазу и гепариназу. Большинство из этих ферментов сотрудничают для вторжения в ткани.

Супероксиддисмутаза и каталаза служат для устранения токсичных свободных радикалов, таких как супероксидный ион О2-  и перекись водорода Н2О2 соответственно.

Это представляет собой фактор вирулентности, поскольку он дает большее преимущество выживания и пролиферации в тканях по сравнению с другими облигатными анаэробами, которые не обладают этими ферментами..

Кроме того, он имеет полисахаридную капсулу, которую можно легко продемонстрировать с помощью окраски рутениевым красным, китайскими чернилами или с помощью электронной микроскопии. Капсула является первичным элементом, позволяющим избежать фагоцитоза клетками иммунной системы..

Он также содержит эндототоксин в клеточной стенке, как и все грамотрицательные бактерии. Однако он не содержит липид A, 2-кетодезоксиоктанато, гептозу или бета-гидрокситриновую кислоту..

Следовательно, он обладает слабой биологической активностью по сравнению с эндотоксинами других грамотрицательных бактерий. Это также производит энтеротоксин (токсин B).

Наконец, устойчивость к антибиотикам — это характеристика, которая увеличивает вирулентность, поскольку затрудняет лечение..

Все факторы вирулентности, упомянутые выше, играют фундаментальную роль в патогенезе..

патологиями

1. Вызывает воспалительную диарею, хотя распространена бессимптомная колонизация.
2. Исследования на людях предполагают связь между инфекцией Bacteroides fragilis энтеротоксигенный с воспалительным заболеванием кишечника и раком толстой кишки.
3. Он часто присутствует при полимикробных инфекциях.

Биохимические характеристики

Группа B. fragilis Это можно определить по определенным биохимическим тестам:

Он устойчив к дискам пенициллина 2 U и к диску канамицина 1 мкг. Чувствителен к рифампицину диск 15 мкг.

Он растет в среде с 20% желчи, ферментирует сахарозу, не производит пигмент, гидролизует эскулин, уменьшает нитраты и является отрицательным индолом.

Точно так же кислоты, которые это производит B. fragilis Из пептонного дрожжевого бульона в виде глюкозы находятся уксусная кислота, пропионовая кислота, янтарная кислота и фенилуксусная кислота.

Это положительная каталаза, которая является необычной особенностью анаэробных бактерий. Это механизм, который при полимикробных инфекциях способствует распространению других анаэробных бактерий, поскольку этот микроорганизм участвует в устранении токсических веществ, поступающих из кислорода..

диагностика

Лучшим образцом всегда будет гной или жидкость, взятые непосредственно из травмы. Отбор проб и транспортировка должны производиться в бескислородной атмосфере и как можно скорее перемещаться в лабораторию..

Специальные трубки могут быть использованы для транспортировки анаэробов или могут быть транспортированы в шприце, не оставляя воздух внутри и защищая его от окружающей среды..

выращивание

Они растут на кровяном агаре в условиях анаэробиоза при 37 ° С.

Следует отметить, что большинство анаэробных инфекций являются полимикробными, и по этой причине могут присутствовать аэробные микроорганизмы, такие как энтеробактерии. По этой причине необходимо использовать антибиотики в питательных средах для выделения анаэробов.. 

Наиболее используемым антибиотиком для этой цели является аминогликозид, поскольку все анаэробы к нему устойчивы..

грамм

Окрашенные по Граму пятна прямого клинического материала, показывающие грамположительные и грамотрицательные бактерии или оба, очень наводят на мысль об анаэробной инфекции. Следовательно, окрашивание по Граму обычно полезно при лечении этих инфекций..

Bacteroides fragilis это наблюдается как отрицательная граммовая палочка.

лечение

Подход почти всегда выполняется эмпирически, из-за того, насколько трудны и медленны культуры, в сочетании с тем, что в анаэробах метод антибиограммы менее стандартизирован для этих микроорганизмов.

Поэтому антибиотики отбираются с учетом ожидаемой восприимчивости анаэробов, которые обычно вызывают инфекцию в зависимости от места заражения..

В случае абдоминальных инфекций требуются антибиотики, устойчивые к бета-лактамазам.

в B. fragilis, обычно используются метронидазол, имипенем, азтреонам или цефтриаксон.

ссылки

1. Райан К.Дж., Рэй С. Sherris. микробиология Medical, 6th edition McGraw-Hill, Нью-Йорк, США; 2010.
2. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Микробиологический диагноз. (5-е изд.). Аргентина, редакция Panamericana S.A..
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. Bailey & Scott Microbiological Diagnosis. 12 изд. Аргентина. Редакция Panamericana S.A; 2009.
4. Гонсалес М., Гонсалес Н. Руководство по медицинской микробиологии. 2-е издание, Венесуэла: Управление средств массовой информации и публикаций Университета Карабобо; 2011
5. Участники Википедии. Bacteroides fragilis. Википедия, Свободная энциклопедия. 31 октября 2018 года, 13:51 UTC. Доступно по адресу: wikipedia.org/
6. Чен Л.А., Ван Мербеке С., Албесиан Е. и др. Обнаружение кала энтеротоксигенных Bacteroides fragilis. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2015; 34 (9): 1871-7.

ПЦР-диагностика анаэробных инфекций, вызываемых бактериями рода Bacteroides

Струкова Л.А. (специалист по продукции), Атрошкина М. Е. (научный сотрудник) OOO НПФ «Литех»

В настоящее время отмечается значительное увеличение доли инфекционных заболеваний, в патогенезе которых ведущую роль играют анаэробные бактерии. Подобные инфекции, как правило, полимикробные, при этом анаэробные возбудители встречаются в ассоциации с другими анаэробными или аэробными микроорганизмами.

Выявление анаэробных микроорганизмов традиционно является серьезной проблемой для клинической бактериологической лаборатории.

Большинство видов плохо культивируются или не культивируются вообще, кроме того стандартные микробиологические методы длительны по времени и их результаты становятся известны лишь на 3 – 4 день от момента взятия материала.

Однако, во многих случаях, в частности при развитии анаэробной инфекции в ранах у хирургических больных, времени на длительные исследования просто нет, поскольку необходим срочный выбор адекватной антибактериальной терапии.

Ускорить диагностику и облегчить понимание генетических основ патогенности и антибиотикорезистентности анаэробных бактерий, вызывающих тяжелые инфекции человека, возможно путем применения в практике бактериологических лабораторий новых методов на основе анализа генетического материала бактерий, в частности метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) (1).

Возбудителей анаэробных инфекций принято разделять на 2 группы. К первой группе относят спорообразующих анаэробов, или клостридий. Вторая группа представлена неспорообразующими, или неклостридиальными, анаэробами (бактероиды, фузобактерии, пептококки, пептострептококкиидр.).

Анализ видового состава бактерий, выделяемых из очагов воспаления с участием анаэробной микрофлоры, показал, что среди неспорообразующих анаэробов основную долю составляют Bacteroides fragilis (85,7 %), Peptococcus spp. (71,4 %), Peptostreptococcus spp.

(69,8 %), Prevotella melaninogenica (68,7 %), Fusobacterium nucleatum (42,6 %) Частота выделения неспорообразующих анаэробов при тяжелых гнойных заболеваниях колеблется от 57,1 % до 98,8 % в зависимости от характера и локализации патологического процесса. (2).

Осознавая необходимость и востребованность надежных тест-систем для выявления анаэробной флоры, начиная с 2012 года в ООО НПФ «Литех» ведутся работы над созданием соответствующих диагностических панелей. Поскольку среди анаэробов, выделяемых из клинического материала человека, представители рода Bacteroides spp.

 занимают лидирующие позиции, а их рутинная фенотипическая идентификация представляет собой весьма трудоемкий процесс с частыми ошибками (1), первыми на рынок диагностических услуг выпущены ПЦР тест-системы «БАКТОПОЛ» для обнаружения различных видов бактероидов, а также штаммов B.

fragilis, продуцирующих энтеротоксин:

1. Бактопол-1 (Bacteroides caccae); 2. Бактопол-2 (Bacteroides distasonis, merdae); 3. Бактопол-3 (Bacteroides eggerthii, stercoris, uniformis); 4. Бактопол-4 (Bacteroides fragilis ,vulgatus, thetaiotomicron, ovatus); 5. Бактопол-токсин (Bacteroides fragilis toxin, BFT).

Наборы серии «БАКТОПОЛ» реализуют принцип обнаружения специфичных участков геномной ДНК бактероидов в реакции амплификации с гибридизацией с флуоресцентными зондами. Детекция продуктов ПЦР происходит в ходе реакции (в режиме реального времени) или после окончания процесса. Возможна электрофоретическая детекция.

Материалом исследования служит клинический материал, забираемый от пациентов — кал, урогенитальные соскобы, раневое отделяемое, мазки из зева и др.

Применение наборов серии «БАКТОПОЛ» позволяет установить видовой состав бактерий рода Bacteroides в клинических образцах, а также дать оценку патогенного потенциала Bacteroides fragilis путем обнаружения генов продукции энтеротоксина.

На сегодняшний день к роду Bacteroides spp. относят 14 видов, 10 из которых принадлежат к группе B. fragilis: B. caccae, B. distasonis, B. eggerthii, B. fragilis, B. merdae, B. ovatus, B. stercoris, B. thetaiotaomicron, B. uniformisи B. vulgatus.

Присутствуя в организме человека, бактероиды могут вызывать различные гнойно-воспалительные заболевания (перитонит, абсцессы, эндокардит, сепсис, тонзиллит, пародонтоз, поражения костей и суставов) после травм, оперативных вмешательств, инструментальных исследований, при онкопатологиях или иммунодефиците.

Бактероиды являются причиной  заболеваний женских внутренних половых органов: цервицитов, эндометритов, инфекций малого таза. Обнаруживают бактероиды и у мужчин (примерно у 6 % пациентов с осложненным постгонорейным уретритом), у больных с хроническим течением заболевания и частыми рецидивами.

У детей наличие бактероидов отмечено при перитонитах, остеомиелитах, целлюлитах, бактериемии. Бактероиды могут быть ассоциированы с болезнью Крона (B. vulgatus) и другими заболеваниями кишечника (B. fragilis , B. thetaiotaomicron и B. caccae) (3). Смертность при бактериемии, вызванной Bacteroides, может составлять до 50% в зависимости от выявленного вида ( В. thetaiotaomicron> B.

distasonis> B. fragilis); и пока не ясно, связано ли это с различиями в факторах вирулентности или с антимикробной чувствительностью (4). Несомненно, уровень смертности может быть существенно снижен за счет своевременной диагностики инфицирования бактероидами и назначения этиотропной антимикробной терапии.

В патогенезе анаэробных инфекций важную роль играет воздействие бактериальных токсинов на ткани и органы человека (2). Изоляты B.

fragilis, выделяемые, как правило, при сепсисе и желудочно кишечных заболеваниях, продуцируют токсин -Bacteroides fragilis toxin, BFT, который является цинковой металлопротеазой с молекулярным весом 20 kDa. Энтеротоксигенные штаммы могут продуцировать три варианта (изотипа) энтеротоксинов, кодируемых генами bft-1, bft-2 и bft-3 (5).

 Энтеротоксигенные штаммы с высокой частотой выделяют также у пациентов с инфекциями легких, крови и при абсцессах. Энтеротоксин разрушает клеточные контакты между эпителиальными клетками и является потенциальной причиной диареи (до 10% случаев) (6). Продуцирующие энтеротоксин изоляты B.

fragilis обнаружены у детей младшего возраста, страдающих диареей (1-5 лет) (3). Тем не менее, некоторые клинические исследования свидетельствуют, что до 20 % человеческой популяции являются асимптоматическими носителями энтеротоксигенных штаммов (5).

Лабораторная диагностика анаэробной инфекции в среднем занимает от 7 до 10 суток, что не может удовлетворять клиницистов.

Основными способами диагностики анаэробной инфекции являются биохимический, культуральный, микроскопический, газожидкостной хроматографии, люминесцентной микроскопии, способы определения токсинов анаэробов в отделяемом из ран и крови больных.

Но всем этим способам присущи те или иные недостатки: длительность исследования, малая точность, громоздкость анализа, неотработанность методик и др.

В последнее время накапливается все больше информации об успешном применении метода ПЦР для быстрого и качественного обнаружения бактерий рода Bacteroides по сравнению с традиционными способами идентификации анаэробных микроорганизмов. ПЦР-диагностика занимает всего несколько часов и отличается высокой чувствительностью и специфичностью.

При изучении 400 образцов хирургической раневой инфекции путем количественной ПЦР в режиме реального времени (кРВ-ПЦР) Tong J. с соавт. в 132 образцах (33%) идентифицировали виды Bacteroides spp (7). Методом культивирования бактероиды были обнаружены только в 31 образце (8%). B.

uniformis был наиболее распространенным видом (44 положительных образца) по результатам кРВ-ПЦР, в то время как метод культивирования идентифицировал эту бактерию как B. fragilis (16 положительных образцов).

Данное исследование подтвердило, что ПЦР является быстрым, специфичным и чувствительным методом, который имеет большой потенциал для выявления группы B. fragilis и родственных организмов в образцах ран.

Liu C. и соавт. представили новую схему для идентификации 10 видов бактероидов из группы Bacteroides fragilis с помощью мультиплексной ПЦР. В результате были идентифицированы 155 изолятов этой группы, ранее определенных с помощью стандартных фенотипических тестов (8).

Эффективность стандартных способов идентификации составила всего 84.5%. Таким образом, мультиплексная ПЦР оказалась простым, быстрым и надежным методом для определения видов группы B.fragilis.

Этот метод может позволить более точно определять роль представителей этой группы в развитии инфекций и их степень устойчивости к противомикробным препаратам.

Для обнаружения токсинов «золотым стандартом» в мире является исследование цитотоксического эффекта на различные клеточные линии, в случае B. fragilis – это линия HT-29.

Наличие цитопатического эффекта (ЦПЭ) должно сравниваться с отрицательным контролем (фосфатно-солевой буфер или клеточная среда).

Если ЦПЭ обнаружен, проводят нейтрализацию с антитоксином для подтверждения энтеротоксина, поскольку некоторые вирусы и бактерии также могут привести к возникновению ЦПЭ у клеточных линий. Недостатками этого метода являются его трудоемкость и большие временные затраты (1).

В течение последних 5 лет было разработано много способов на основе метода ПЦР для обнаружения токсина B. fragilis. Чувствительность и специфичность этих способов по сравнению с культивированием составляют около 91 % и 100 %, соответственно, но эти значения могут быть немного меньше при работе с образцами кала из-за присутствия ингибиторов ПЦР (1).

В последние годы было отмечено повышение устойчивости к противомикробным препаратам для некоторых анаэробных бактерий, особенно для видов группы B. fragilis (9).

Связанная с продукцией пенициллаз устойчивость к пенициллинам и цефалоспоринам среди анаэробов приближается к 100%, быстро растет резистентность к тетрациклинам; резистентность к цефамицину (цефокситину), эритромицину и клиндамицину составляет около 12-30% во всем мире, что делает их непригодными для эмпирической терапии против Bacteroides (1). Интересно, что B. fragilis более восприимчив к антимикробным препаратам, чем другие виды Bacteroides. B. vulgatus наиболее устойчив к ампициллину-сульбактаму и пиперациллин-тазобактаму. Штаммы B. thetaiotaomicron/ovatus показывают самый высокий уровень устойчивости к карбапенемам с неизвестным механизмом резистентности. B. vulgatus резистентен к моксифлоксацину (10).

Учитывая устойчивость отдельных видов Bacteroides spp. к разным антибиотикам, при выборе адекватной антимикробной терапии желательно опираться на данные ПЦР-тестирования, охватывающего все разнообразие видов, ассоциированных с тяжелыми инфекциями человека.

Таким образом, метод ПЦР имеет решающее значение для диагностики инфекций, вызванных представителями рода Bacteroides. Несмотря на тот факт, что роль анаэробных бактерии в патогенезе различных заболеваний человека подтверждена, качество лабораторной диагностики анаэробных инфекций остается спорным.

Тем не менее, выявление и изучение важных генов анаэробных бактерий с помощью молекулярно-генетических методов могут привести к получению более точных данных об их патогенности и позволят избежать проблем, связанных с особыми условиями культивирования и крайне медленным ростом (1).

Применение наборов серии «БАКТОПОЛ» как дополнение к традиционному бактериологическому тестированию, позволяет существенно повысить результативность и информативность проводимых клинико-лабораторных исследований, что в свою очередь снизит риск возникновения осложнений и смерти при инфекциях, вызванных группой B.

fragilis, а также будет способствовать назначению эффективной этиотропной терапии.

Наша клиника проводит все виды анализов (анализ на сахар, на аллергию, ПЦР, генетический анализ и др.) с применением современного оборудования и проверенных методов.

Литература:

1) Nagy E, et al. The place of molecular genetic methods in the diagnostics of human pathogenic anaerobic bacteria. A minireview. Acta Microbiol Immunol Hung. 2006 Jun; 53(2):183-94. 2) А. М. Светухин А. Б. Земляной В. Г. Истратов Л. А. Блатун Р. П. Терехова. Клиническое значение ранней диагностики анаэробной неклостридиальной инфекции.Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова № 8. 2005. 3) Hannah M.

Wexler. Bacteroides: the Good, the Bad, and the Nitty-Gritty. Clin Microbiol Rev. 2007 October; 20(4): 593–621. 4) Brook, I. 2002. Clinical review: bacteremia caused by anaerobic bacteria in children. Crit. Care. 6:205-211. 5) Merino VR et al. Quantitative detection of enterotoxigenic Bacteroides fragilis subtypes isolated from children with and without diarrhea. J Clin Microbiol.

2011 Jan; 49(1):416-8. 6) Durmaz B, Dalgalar M, Durmaz R. Prevalence of enterotoxigenic Bacteroides fragilis in patients with diarrhea: a controlled study. Anaerobe. Dec 2005; 11(6):318-21.Anaerobe. 2005 Dec; 11(6):318-21. 7) Tong J, Liu C, Summanen P, Xu H, Finegold SM.

Application of quantitative real-time PCR for rapid identification of Bacteroides fragilis group and related organisms in human wound samples. Anaerobe.2011 Apr;17(2):64-8. 8) Liu C. et al. Rapid identification of the species of the Bacteroides fragilis group by multiplex PCR assays using group- and species-specific primers. FEMS Microbiol Lett. 2003 May 16; 222(1):9-16.

9) Simmon KE, Mirrett S, Reller LB, Petti CA. Genotypic diversity of anaerobic isolates from bloodstream infections. J Clin Microbiol. 2008 May; 46(5):1596-601.

10) Fernández-Canigia L. et al. First national survey of antibiotic susceptibility of the Bacteroides fragilis group: emerging resistance to carbapenems in Argentina. Antimicrob Agents Chemother. 2012 Mar;56(3):1309-14.

4.Бактероиды

Бактероиды относятся
к условно-патогенным бактериям.

По классификации
Берджи род Bacteroides отнесен к двум группам.

Группа 4.
Грамотрицательные аэробные/микроаэрофильные
палочки и кокки. В эту группу входят
такие виды как B.urealyticusиB.gracilis.B.urealyticusможет вызывать инфекции дыхательных
путей, кишечного тракта, мочеполовых
путей,B.gracilis– анаэробные плевро-легочные инфекции,
инфекции головы и шеи.

Группа 6.
Грамотрицательные анаэробные прямые,
изогнутые и спиральные бактерии. Наиболее
этиологически значимыми в патологии
человека являются B. fragilis и B. melaninogenicus.
Это строгие анаэробы, которые могут
вызывать гнойно-воспалительные
заболевания различной локализации,
чаще — у лиц с иммунодефицитами.

2.Характеристика возбудителя

1. Классификация (см. п. 1)

2. Морфологические и тинкториальные свойства

Бактероиды –
полиморфные средних размеров палочки,
располагающиеся поодиночке или парами,
неподвижны, (2 вида – перитрихи), не
образуют спор, некоторые штаммы образуют
капсулу (B.fragilis).

Бактероиды требуют
специальных сред, присутствия 10% СО2и витамина К. Для их культивирования
используют КАБ-среду, среды с гемином,
пептонный бульон с дрожжевым экстрактом
и глюкозой. Растут на средах с желчью.

Размножение медленное, посевы инкубируют
5 дней. Бактероиды образуют на кровяной
среде небольшие выпуклые непигментированные
колонии, B.melaninogenicus дает колонии черного
или темно-коричневого цвета.

В жидких
средах образуют помутнение с выпадением
осадка.

ПризнакиВиды	Каталаза	H2S	Глюкоза	Лактоза	Мальтоза	Сахароза	Желатин
B. urealyticus	–	+	–	–	–	–	+
B. gracilis	–	+	–	–	–	–	–
B. fragilis	+	+	К	К	К	К	–
B. melaninogenicus	–	–	К	К	К	К	+

Экзотоксинов не
образуют. ЛПС наружной мембраны клеточной
стенки — эндотоксин.

Антигенная структура
по О – антигену вариабельна, мало
изучена.

Во внешней среде
малоустойчивы. Чувствительны к различным
дезрастворам.

1. Патогенность для животных

Около 15 видов
бактероидов могут вызывать различные
заболевания у животных. Вышеперечисленные
4 вида для них непатогенны.

1. Патогенез и эпидемиология инфекций, вызванных бактероидами

Бактероиды являются
обитателями толстого кишечника человека
и некоторых животных, значительно реже
их обнаруживают в микрофлоре в
респираторном и мочеполовом тракте.

Вызывают гнойно-воспалительные
заболевания, возникающие, в основном,
как эндогенная инфекция.

В ассоциациях
с другими микроорганизмами встречаются
при перитонитах, абсцессах брюшной
полости, легких, циститах, инфекционных
поражениях клапанов сердца.

Факторами
патогенности являются капсула, пили,
белки наружной мембраны, которые
участвуют в адгезии. Капсульный
полисахарид защищает от фагоцитоза.
Продуцируют ряд ферментов: нейраминидазу,
фибринолизин, гепариназу, ДНК-азу. При
гибели выделяют эндотоксин.

При некоторых
формах инфекционного процесса, вызываемого
бактероидами (сепсис, воспаление
урогенитальной сферы), обнаруживаются
антитела, титр которых значительно
выше, чем у здоровых людей. После
перенесенного заболевания титр антител
постепенно снижается в течение нескольких
месяцев. Значение выявляемых антител
в создании невосприимчивости неизвестно.

Исследуемый
материал– кровь, гной и др. в зависимости
от локализации.

• Методы диагностики:
• Грамотрицательные
  полиморфные палочки, располагающиеся
  поодиночке или парами.
• 2.
  Бактериологический метод

Выделение
чистой культуры проводится в анаэробных
или микроаэрофильных условиях. Посев
проводится на плотную или жидкую среду
КАБ, на тиогликолевые среды с гемином
и витамином К.

Учитывают культуральные,
морфологические и тинкториальные
свойства (см. выше). Производят пересев
из подозрительных колоний на плотную
среду КАБ для выделения чистой культуры.

Идентифицируют по биохимическим
свойствам, используя специальные
тест-системы. Определяют чувствительность
к антибиотикам.

1. Специфическая профилактика и лечение не разработаны.

Патогенные бактероиды, превотелла и фузобактерии

Патогенные бактероиды, превотелла и фузобактерии

Эту группу возбудителей ранее часто под общим названием «бактероиды» относили к одному семейству Bacteroidaceae. Теперь в составе этого семейства остался лишь род Bacteroides.

Bacteroides melaninogenicus перенесен в род Prevotella, выделенный в семейство Prevotellaceae, а вид этот стал называться Prevotella melaninogenica. Род Fusobacterium также выделен в отдельное семейство Fusobacteriaceae, которое отнесено даже к другому типу – Fusobacteria.

Бактероиды, превотелла и фузобактерии – анаэробные грамотрицательные прямые и изогнутые палочки, широко распространенные в природе. Основной средой их обитания являются слизистые оболочки ротовой полости, желудочно-кишечного тракта, мочеполовых путей человека и животных.

При определенных условиях эти бактерии могут стать причиной гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации: аппендицита, перитонита, сепсиса, парапроктита, гангрены отдельных органов, раневой инфекции и т. п.

Очень часто эти процессы вызываются бактероидами, превотеллой и фузобактериями (аспорогенная анаэробная микрофлора) в ассоциации с другими микроорганизмами (факультативные анаэробы и облигатные спорогенные анаэробы).

Особенностью течения заболевания при такой микст-инфекции являются быстрота развития процесса, некротизация тканей, признаки выраженной интоксикации, трудности диагностики и лечения. Все это – следствие синергизма, когда патогенные свойства различных микроорганизмов взаимно усиливаются. Довольно редко бактероиды, превотелла и фузобактерии выделяются из патологического материала в чистой культуре, обычно рост наблюдается в ассоциации с другими бактериями. В чистой культуре эти возбудители чаще выделяются посевом крови при сепсисе и посевом спинномозговой жидкости – при менингите.

Важным условием для развития инфекции, вызываемой бактероидами, превотеллой или фузобактериями, служит наличие предрасполагающих факторов, приводящих к снижению уровня кислорода или окислительно-восстановительного потенциала в тканях.

Такими факторами могут быть травма, спазмы и сужения сосудов, некроз, сопутствующие инфекции, вызванные другими бактериями.

Общими предрасполагающими факторами следует считать также хирургические вмешательства (особенно при операциях на кишечнике или в полости рта), лейкозы, злокачественные новообразования, диабет, артериосклероз, алкоголизм, использование антибиотиков, иммунодепрессантов и кортикостероидов, рентгеновское и гамма-облучение.

Род Bacteroides включает 26 видов облигатных анаэробов, большинство из которых может быть причиной заболеваний человека.

По морфологии это прямые или слегка изогнутые палочки размером 0,5 – 0,8 ? 1 – 2 мкм, могут располагаться поодиночке, парами или короткими цепочками из 3 – 4 клеток, грамотрицательны, спор не образуют, некоторые виды образуют капсулы, некоторые – подвижны (перитрихи).

По последним двум свойствам и требовательности к питательным средам и особенностям роста все виды можно условно разделить на 3 группы (по Prevot, 1966). 1. Неподвижные, иногда образующие капсулы бактероиды (B. fragilis и другие виды).

Представители именно этой группы, а также Prevotella melaninogenica чаще всего бывают причиной заболеваний человека. 2. Неподвижные, образующие капсулу, нуждающиеся при росте на средах в нативной сыворотке или асцитической жидкости. 3. Подвижные, не образующие капсул, образующие газ или не образующие газа при ферментации.

B. fragilis растет медленно (5 – 7 сут.) на плотных и жидких средах, добавление свежей крови или сыворотки необязательно, но значительно ускоряет рост. Колонии на кровяном агаре появляются на 3 – 5-й день, их диаметр меньше 1 мм, гемолиза нет.

На мясном бульоне через 48 ч B. fragilis дает диффузное помутнение; ферментирует некоторые сахара с образованием кислоты и небольшого количества газа; желатин не разжижает, индола и сероводорода не образует. Имеется несколько подвидов этого микроба.

Содержание Г + Ц в ДНК составляет 40,5 – 42,0 мол %.

Род Prevotella включает 24 вида, в том числе P. melaninogenica (= Bacteroides melaninogenicus). Этот вид хорошо растет на кровяном агаре, образуя гладкие или шероховатые колонии диаметром 1 – 3 мм, иногда наблюдается гемолиз.

Культура обычно имеет неприятный гнилостный запах. Для роста требуется гемин и витамин К. На кровяном агаре образует черный пигмент, представляющий собой комплекс гематина с бактериальным протеином; пигментирован обычно центр колонии.

Непостоянно ферментирует некоторые углеводы с образованием кислоты и газа.

Оптимальная температура роста бактероидов и превотеллы 37 °C при рН 7,6 – 7,8. Рост некоторых видов стимулируется не только кровью, но и добавлением в среду глюкозы, цистеина, иногда желчи.

Биохимические свойства (протеолитические и сахаролитические) зависят, прежде всего, от вида и подвида бактероида и превотеллы и могут быть использованы для дифференциации выделенной культуры.

Для этих же целей используют определение конечных кислых продуктов брожения на специальной среде (пептонно-дрожжевой бульон с глюкозой), которыми могут быть летучие и нелетучие органические кислоты (пропионовая, уксусная, бутиловая, янтарная, молочная и др.).

В антигенном отношении бактероиды и превотеллы неоднородны, их серологическая классификация пока только уточняется. Установлено, что, например, у вида B. fragilis имеется свыше 20 сероваров, у B. melaninogenicus – 4 сероварианта.

Факторами патогенности бактероидов являются некоторые ферменты (нейраминидаза, нуклеазы, фибринолизин). Капсульный полисахарид у B. fragilis способен подавлять фагоцитоз.

У других бактероидов и превотелл в качестве факторов патогенности выступают белки наружной мембраны и липополисахарид клеточной стенки.

При септицемии и тяжелых воспалительных процессах, вызванных бактероидами и превотеллами, в сыворотке крови больных в довольно высоких титрах появляются антитела, сохраняющиеся в течение нескольких месяцев. Они могут быть обнаружены в реакциях агглютинации, преципитации в геле, РПГА.

Единственным эффективным методом диагностики заболеваний, вызванных бактероидами и превотеллами, является бактериологический.

Материал для посева – кровь, мокрота, гной из абсцессов и других полостей, испражнения – засевают на специальные питательные среды; инкубируют в анаэробных условиях при 37 °C.

Следует учитывать, что многие штаммы анаэробов чрезвычайно чувствительны к кислороду и при последующих пересевах быстро теряют жизнеспособность.

Идентификация патогенных бактероидов основана на изучении культуральных, биохимических признаков, толерантности к кислороду и СО2 и некоторых других свойств. Специфическая профилактика не разработана. Лечение антибиотиками проводят в соответствии с индивидуальной чувствительностью конкретного штамма-возбудителя при изучении выделенной чистой культуры. Хороший эффект дает сочетание антибиотиков с метронидазолом.

Род Fusobacterium включает 16 видов, многие из которых являются естественными обитателями организма теплокровных животных и человека. Наиболее частыми возбудителями воспалительно-некротических заболеваний человека (устаревшее название заболевания – некробациллез) являются два вида – F. necrophоrum и F. nucleatum.

Эти бактерии грамнегативны, чрезвычайно склонны к полиморфизму. Чаще имеют вид прямых или слегка изогнутых веретенообразных палочек с заостренными концами размером 0,5 – 1,5 ? 2 – 3 мкм, но в чистой культуре могут встречаться нитевидные формы до 80 – 100 мкм и ветвящиеся формы.

В старых культурах преобладают короткие палочки, которые на средах бывают значительно толще, чем в патологическом материале.

Бактерии неподвижны, спор и капсул не образуют; по Леффлеру и разведенным фуксином красятся неравномерно: слабо окрашенные участки бывают значительно толще, чем хорошо окрашенные, и располагаются на одинаковом расстоянии по длине микроба, имитируя присутствие спор.

Температурный оптимум для их роста 37 °C, рН 7,6. Фузобактерии хорошо растут на мясных жидких средах, печеночном бульоне, сердечно-мозговом бульоне с глюкозой под вазелиновым маслом.

Рост сопровождается помутнением среды, образованием газа и запаха, напоминающего сыр, добавление к среде бычьей сыворотки или асцитической жидкости значительно ускоряет рост.

В строго анаэробных условиях на сывороточном агаре фузобактерии образуют маленькие, круглые с ровными или неровными краями, непрозрачные, грязновато-белые с желтоватым центром колонии. На кровяных средах обычно вызывают гемолиз.

Желатин и свернутую сыворотку не разжижают, обычно не восстанавливают нитраты в нитриты. Как правило, выделяют индол и сероводород, не растут в присутствии желчи и желчных солей.

Биохимические свойства могут быть использованы для дифференциально-диагностических целей: в зависимости от вида фузобактерии могут или не могут ферментировать глюкозу, левулезу, маннозу, гидролизовать эскулин и крахмал, выделять липазу, образовывать летучие органические кислоты на пептонно-дрожжевом бульоне с глюкозой.

Антигенное строение фузобактерий, как и постинфекционный иммунитет, мало изучены. Патогенные свойства связаны с эндотоксином – липополисахаридом клеточной стенки, а также с ферментами агрессии и защиты: плазмокоагулазой, фибринолизином, нуклеазами.

Некоторые штаммы вырабатывают гемотоксин; такие штаммы обладают значительной вирулентностью и иногда могут вызвать внутрилабораторное заражение.

Фузобактерии при температуре 65 °C погибают в течение 15 мин, при кипячении – моментально. При высушивании на воздухе погибают через 24 – 48 ч. Рабочие растворы дезинфицирующих веществ убивают их в течение 10 – 20 мин. В испражнениях животных и человека фузобактерии могут сохраняться до 30 – 50 сут.

При лабораторной диагностике заболеваний, вызванных фузобактериями, можно использовать микроскопический, бактериологический и биологический методы. Микроскопический метод применяют для диагностики поражений кожи и слизистых оболочек.

Материал для приготовления мазка берут на границе живой и некротизированной ткани, мазок фиксируют и окрашивают по Граму, Леффлеру или водным фуксином. Возбудитель имеет вид зернистоокрашенных длинных нитей и палочек.

Для бактериологического исследования берут гной из язв на поверхности тела или из полостей при поражении внутренних органов, трупный материал. Посев чаще всего делают на кровяной агар, инкубируют в анаэробных условиях. Чистую культуру идентифицируют по биохимическим свойствам.

Биологический метод используют параллельно с бактериологическим и чаще применяют при работе с сильно загрязненным посторонней флорой патологическим материалом. Белым мышам материал вводят у основания хвоста, где развивается некроз, и они погибают на 8 – 10-е сут.

; при посеве материала, взятого на границе живой и пораженной ткани, легко можно выделить возбудителя. Кроликов заражают подкожно в область брюшных мышц или под кожу уха и внутривенно. Некротический процесс захватывает большие участки кожи, где на 4 – 5-е сутки можно легко обнаружить возбудителя или выделить чистую культуру.

Специфическая профилактика не разработана. Лечение проводят антибиотиками, к которым данный штамм чувствителен, в сочетании с парентеральным введением метронидазола (метрогила).