Морфология палочки инфлюэнзы. культуральные свойства палочки инфлюэнзы. биохимические свойства палочки инфлюэнзы.

1

Бейшеналиева С.Т. 1

Кырбашова М.Т. 1
1 Кыргызский государственный университет им. И. Арабаева
В данной статье рассматривали биохимические свойства патогенной и условно-патогенной микрофлоры пищевых продуктов. Исследование качества пищевых продуктов путем выявления в них неспецифической микрофлоры является актуальным для современной биологии и медицины.

В пищевых продуктах содержатся белки, углеводы, витамины и другие питательные вещества, а это способствует не только сохранению, но и размножению различных микроорганизмов. Целью нашего исследования явилось изучение биохимических свойств выявленных неспецифических микроорганизмов пищевых продуктов.

Для определения биохимических свойств исследуемых микроорганизмов их инкубировали при температуре 37 °С на 18–24 ч. Цвет среды Кесслера изменился с красного на желтый. Это доказывает, что бактерии группы кишечных палочек ферментируют среду Кесслера с образованием газа. Установлено, что Proteus vulgaris образует индол.

Показано, что семейства Enterobacteriaceae ферментируют углеводы с кислотообразованием и выделяют сероводород. Для межродовой и видовой биохимической дифференциации энтеробактерий определяли с помощью системы индикаторные бумажные тесты. Определена оксидазная активность группы Proteus, индикаторные бумажные тесты меняют свой цвет на синий.

Установлено, что Staphylococcus aureus ферментирует лецитовителлин и активирует естественную систему свертывания крови и вызывает плазмокоагуляцию.

неспецифическая микрофлорабиохимические свойства микроорганизмов

1. Джей Дж.М., Лесснер М.Дж., Гольден Д.А. Современная пищевая микробиология. М.: БИНОМ. Лаб. знаний, 2012. 887 с.
2. Васильев С.И.

Основы промышленной безопасности. Ч. 1. Красноярск: Сиб. федер. ун-т, 2012. 502 с.
3. Мудрецова-Висс К.А., Дедюхина В.П. Микробиология, санитария и гигиена. М.: ИД ФОРУМ: ИНФРА-М, 2010. 400 с.
4. Иващенко С.В. Пищевая микробиология. Саратов, 2016. 62 с.
5. Куранова Н.Г. Микробиология. Ч. 2. Метаболизм прокариот. М.: Прометей, 2017. 135 с. 6. Курбанова А.А.

Вопросы разработки способов микробиологической устойчивости хлеба при относительно длительном хранении // Вестник Московского государственного университета. Серия: Естественные науки. 2012. № 4. С. 53–56. 7. Азизов Б.М., Чепегин И.В. Производственная санитария и гигиена труда. М.: НИЦ ИНФРА-М, 2015. 432 с.
8. Степаненко И.С., Холодок Г.Н., Кольцов И.П.

Культуральные свойства клинически значимых микроорганизмов // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2014. № 3. С. 165–166. 9. Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно-патогенных бактериях // Журнал микробиологии. 1997. № 4. С. 20–26.
10. Глик Б. Молекулярная биотехнология. Принципы применения. М.: Мир, 2002. 589 с.
11.

McFaddin J.F. Biochemical Tests for the Identification of Medical Bacteria, 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA. 2000. 12. Ассонов Н.Р. Микробиология. М.: Колос, 2011. 352 с.

В настоящее время исследование качества пищевых продуктов путем выявления в них неспецифической микрофлоры является актуальным для современной биологии и медицины.

Размножение некоторых микроорганизмов приводит к непригодности пищевых продуктов к употреблению. Многие из производимых в мире продуктов не доходят до потребителя в связи с их порчей (в большинстве случаев микробами) [1–3].

Содержание в пищевых продуктах белков, углеводов, витаминов и других питательных веществ благоприятствует не только сохранению, но и размножению различных микроорганизмов [4, 5].

В молочнокислых и полученных путем брожения пищевых продуктах находятся в большом количестве микробы, которые придают им вкусовые качества и определенную консистенцию (специфическая микрофлора).

Кроме того, в продуктах могут содержаться микроорганизмы или их споры, попавшие из внешней среды (неспецифическая микрофлора) [6–8].

В отдельных случаях пищевые продукты могут быть обсеменены сальмонеллами, шигеллами, стафилококками, клостридиями ботулизма, E. coli, B. cereus, Cl. perfringens и другими бактериями, приводящими к возникновению у людей пищевых токсикоинфекций и других заболеваний [9–11]. Поэтому актуально выявление и исследование культуральных, биохимических свойств микрофлоры пищи.

Целью нашего исследования явилось изучение биохимических свойств выявленных неспецифических микроорганизмов пищевых продуктов.

Материалы и методы исследования

Исследование проводилось в бактериологической лаборатории Департамента профилактики заболеваний и госсанэпиднадзора Кыргызской Республики. Объекты исследования – выявленная патогенная и условно-патогенная микрофлора пищевых продуктов.

Во время исследования использовали биохимические методы микробиологии (бродильный метод, методы определения лецитоветиллазы, индикаторные бумажные тесты) [12]. Определение бактерий группы кишечных палочек (БГКП) в пищевых продуктах производили бродильным методом посевом на среды Кесслера, – 37 °С – 18–24 ч.

, высев на Эндо – 37 °С – 24 ч. (ГОСТ 30518-97, ГОСТ 10444.15-94). Определение семейства Enterobacteriacea производили с помощью системы индикаторные бумажные (СИБ) тесты – индолообразования (СТ 28560-90, ГОСТ 30726-2001).

А идентификацию Staphylococcus aureus – определением лецитоветиллазы (лецитиназа), реакцией плазмокоагуляция (ГОСТ 9225-84).

Результаты исследования и их обсуждение

Из молочных продуктов, кондитерских изделий и готовых кулинарных изделий выделены бактерии группы кишечных палочек. Характерные биохимические свойства бактерии группы кишечных палочек мы описываем ниже.

Для определения биохимических свойств БГКП 0,1 г продукта (разведение 1:10) высевали на 9 мл среды Кесслера с поплавками при температуре 37 °С и инкубировали на 16–24 ч. После инубации наблюдали выделение газа и изменение цвета среды. Цвет среды Кесслера изменился с красного на желтый. Это доказывает, что БГКП ферментировал среды Кесслера с образованием газа (рис. 1).

а) б)

Рис. 1. Биохимические свойства семейства Enterobacteriaceae: а) отрицательный, б) положительный (ферментировали среды Кесслера с образованием газа)

а) б)

Рис. 2. Биохимические свойства семейства Enterobacteriaceae: а) среда лактоза до посева, б) среда лактоза после посева

Затем, чтобы дальше исследовать биохимические свойства БГКП, производили посев на лактозную среду.

После инкубации при температуре 37 °С на 24 ч на лактозной среде наблюдали выделение пузырьков и изменение цвета среды. Как видно на рис.

2, изменился цвет среды с темно-зеленого на желтый, выделение пузырьков доказывает, что эти микроорганизмы, ферментируя лактозную среду, образуют кислоту и газы.

Чтобы определить биохимические свойства E. coli, 0,1 г продукта (разведение 1:10) высевали на 9 мл среды Кесслера с поплавками при температуре 44 °С, инкубировали на 16–24 ч. После инкубации наблюдали выделение газа и изменение цвета среды. Цвет среды Кесслера изменился с красного на желтый. Это доказывает, что E. coli ферментировал среды Кесслера с образованием газа (рис.

1). Для дальнейщего исследования биохимических свойств E. coli производили посев на лактозную среду. После инкубации при температуре 37 °С на 24 ч на среде лактоза наблюдали выделение пузырьков и изменение цвета лактозной среды. Цвет лактозной среды изменялся с темно-зеленого на желтый и выделялись газы. Эти свойства характерны для семейства Enterobacteriaceae (рис. 2).

Для межродовой и видовой биохимической дифференциации энтеробактерий определяли с помощью системы индикаторные бумажные тесты (СИБ-тесты).

Биохимические свойства группы Proteus определяются с помощью СИБ-тестов. После инкубации наблюдали следующие изменения. Результат анализа регистрировался визуально. При определении оксидазной активности группы Proteus СИБ тест меняет свой цвет на синий. Это доказывает, что эти выросшие культуры на поверхности агара группы Proteus.

Из колонии группы Proteus vulgaris брали бактериологической петлей и посевали штрихом по косяку и уколом в столбик комбинированной среды для первичной биохимической идентификации микробов на среду Клиглера (1) и Симонса (2) (Проба № 2118-2121, рис. 3). На рис.

4 видно, что идет почернение среды Клиглера, образование сероводорода, ферментация глюкозы с изменениями окраски столбика среды, кислотообразования. А среда Симонса не изменилась.

Почернение среды Клиглера, появляющееся в средней или нижней части столбика, происходит при образовании выделенным микробом сероводорода, что свойственно представителям рода Рroteus vulgaris, Р. mirabilis.

Рис. 3. Биохимические свойства Proteus vulgaris. Среда Клиглера (1) и Симонса (2) до пересева

Рис. 4. Биохимические свойства Proteus vulgaris. Среда Клиглера (1) и Симонса (2) после пересева

При проведении дополнительного биохимического анализа Proteus vulgaris определяли индолообразование. Для выявления индола в пробирки разливали 6 мл среды и засевали суспензией бактерий. Инкубировали при температуре 37 °С в течение 18–24 ч.

Затем для определения индола складывали по намеченной на ней линии вдвое и пинцетом опускали на дно пробирки. Контроль произвели СИБ-диской, помещенной в пробирку со стерильным натрия хлорида раствором 0,9 %. Обе пробирки инкубировали при температуре (37 ± 1) °С.

На пробе индолообразования подтверждено, что конец индола окрашивался в розово-малиновый цвет.

Staphylococcus aureus в анаэробных условиях ферментирует маннит. Биохимические свойства Staphylococcus aureus определяли с помощью лецитоветиллазы и плазмокоагуляции.

При определении лецитоветиллазы (лецитиназа) посевали на среду желточно-солевой агар – хлористый натрий является элективным фактором, он подавляет рост большинства представителей другой микрофлоры, главным образом грамотрицательной. Одним из компонентов яичного желтка является лецитовителлин.

Лецитовителлин является субстратом для фермента лецитовителлазы (лецитиназы), относящегося к группе липаз и продуцируемого некоторыми стафилококками. На желточно-солевом агаре (рис. 5) колонии Staphylococcus aureus – S-формы, выпуклые, круглые и блестящие.

Наличие пигмента легко определяется на глаз. Вокруг колонии S. аureus образовался радужный венчик. Это доказывает, что S. aureus обладает лецитовителлазной активностью.

Рис. 5. Биохимическая идентификация Staphylococcus aureus

Для окончательной идентификации Staphylococcus aureus определяли фермент плазмокоагулазы. В пробирку, содержащую цитратную плазму крови, вносили с петлей суточной агаровой культуры исследуемого штамма и штатив с пробирками инкубировали на 4 часа в термостат при 37 °С.

После инкубации учитывали результат, в пробирке (рис. 6) появился студнеобразный сгусток. Под действием фермента плазмокоагулазы активируется естественная система свертывания крови (плазминоген протромбин). Появление студнеобразного сгустка любого размера считается положительным результатом реакции.

Положительным результатом следует считать наличие плазмокоагуляции в первые 4 часа инкубации. Отсутствие свертывания плазмы в течение 18 ч расценивается как отрицательный результат.

В качестве контроля рекомендуется ставить реакцию с заведомо коагулирующим и некоагулирующим штаммами, а также оставлять одну пробирку с плазмой незасеянной (рис. 6).

Рис. 6. Биохимические свойства Staphylococcus aureus. Реакция плазмокоагуляции

Выводы

1. Показано, что семейства Enterobacteriaceae ферментируют углеводы с кислотообразованием и выделяют сероводород.

2. Установлено, что Staphylococcus aureus ферментирует лецитовителлин и активирует естественную систему свертывания крови и вызывает плазмокоагуляцию.

3. Показано, что Proteus vulgaris обладает сахаролитической и протеолитической активностью.

Библиографическая ссылка

Бейшеналиева С.Т., Кырбашова М.Т. БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПАТОГЕННЫХ И УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. – 2020. – № 12. – С. 7-11;
URL: https://applied-research.ru/ru/article/view?id=13151 (дата обращения: 18.04.2022).

Фенотипические формы corynebacterim pseudotuberculosis и их основные свойства — современные проблемы науки и образования (сетевое издание)

1

Заболотных М.В. 1

Колычев Н.М. 1

Трофимов И.Г. 1
1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет им. П. А.

Столыпина», Омск, Россия
На основании собственных исследований определены основные фенотипические формы возбудителя казеозного лимфаденита овец и описаны их морфологические, тинкториальные, биохимические, патогенные и вирулентные свойства.

При помощи световой и электронной микроскопии доказано разнообразие их клеточного состава, способов размножения и биохимичекой активности, что отражает структурную и функциональную вариабельность, свойственную коринебактериям. Полученные результаты исследований послужили основой для разработки бактериологической диагностики казеозного лимфаденита овец. Доказано, что C.

рseudotuberculosis обладает не только вариабельностью фенотипических свойств, но имеет три и более морфологических варианта, адаптированных и циркулирующих среди овец на территории Западной Сибири.

генотипическая характеристикаказеозный лимфаденит овецбактериологическая диагностика

1. Колычев Н. М.

Казеозный лимфаденит овец и биологические свойства возбудителя // Эпизоотология, диагностика, лечение и профилактика инфекционных и инвазионных болезней животных: Сб. науч. тр. / ОмСХИ/ Н. М. Колычев, М. В. Заболотных. – Омск, 1991. – С. 4-9.
2. Колычев Н. М. Казеозный лимфаденит (псевдотуберкулез) овец / Н. М. Колычев, И. Г. Трофимов. – Омск: Ом. обл. тип., 1993. – 214 с.
3.

Колычев Н. М. Характеристика популяций возбудителя казеозного лимфаденита овец/ Н. М. Колычев, Л. В. Гежес, Е. В. Лебеденко, М. В.Заболотных // Ветеринария. – 2002. – № 9. – С. 20-23.
4. Колычев Н. М. Биология коринебактерий / Н. М. Колычев, М. В. Заболотных. – Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2008. – 100 с.
5. Колычев Н. М. Устойчивость возбудителя казеозного лимфаденита овец / Н.

М. Колычев, А. В. Заболотных, М. В. Заболотных, В. И. Плешакова, К. П. Масловский, Н. Т. Понкратова, С. А. Понкратов, Д. Н. Пилюгин, М. Ю. Макарова // Ветеринария. – 2000. – № 3. – С. 21-23.

Введение

В настоящее время среди приоритетных программ ветеринарной науки и практики особое место занимает изучение возбудителей инфекционных болезней, общих для человека и животных, их биологической роли, циркуляции и адаптации в определенных эколого-географических зонах.

Происходящая в последнее время трансформация возбудителей ряда инфекционных болезней, связанная с изменением основных морфологических, биохимических, антигенных, генетических свойств, усугубляется многообразием путей и способов их передачи, длительностью персистирования в зараженном организме, выживанием и накоплением микроорганизмов во внешней среде.

Все вышеуказанное ставит на одно из первых мест проблемы, непосредственно связанные с бактериологической диагностикой редко встречающихся, трансформирующихся, атипичных форм во всем их многообразии биологических свойств. Среди многочисленных заразных болезней имеются такие, биология возбудителя которых еще слабо изучена, а таксономическое положение постоянно изменяется. К подобному роду болезням относятся коринебактериозы и, в частности, казеозный лимфаденит (псевдотуберкулез) овец, этиологическим фактором, которого является Corynebacterim  pseudotuberculosis [1-5]. Цель наших исследований: изучить основные свойства коринебактерий, выделенных от больных овец в Западной Сибири.

Материалы и методы. В лабораторных опытах использовали референтные штаммы Corynebacterium pseudotuberculosis № 146S; № 74R; № 209R; № 70R; депонирование в ВГНКИ в 1991 г. М. В. Заболотных, Н. М. Колычевым, И. Г. Трофимовым, а также культуры 37- I, 61-R, 69-S, 214-R, 220-R, 50-S, выделенные нами от больных овец в хозяйствах Омской области.

Выделение коринебактерий осуществляли путем прямых посевов на питательные среды: мясо-пептонный агар (МПА), сыворочно-теллуритовый агар (СТА), кровяной теллуритовый агар (КТА), рН сред 7,2-7,4. Морфологические тинкториальные и культуральные свойства выделенных культур изучали общепринятыми в микробиологии методами.

Морфологию коринебактерий изучали при помощи светового, фазово-контрастного и электронного (ЭМ-125) микроскопов. Для выявления L-трансформации проводили посев культур на питательную среду Школьниковой в модификации Дорожковой (1984). Биохимические свойства коринебактерий изучали на жидких средах Гисса. Гемолитические свойства культур изучали на кровяном агаре по методу H.

Carne (1939) и МПБ с добавлением 5 % взвеси эритроцитов барана. Токсичные свойства коринебактерий изучали in vitro по методу M.М. Zaki (1965) и D.H. Burrell (1979). Патогенные и вирулентные свойства выделенных культур изучали на белых мышах, морских свинках и овцах породы советский меринос. Генотипические свойства изучали у 40 культур C. pseudotuberculosis, выделенных от овец Омской области.

В качестве контроля использовали ДНК эталонных штаммов микобактерий (BCG) и бруцелл (шт. 19).

Результаты исследований и обсуждение. При бактериологическом исследовании патологического материала в 88 % случаях были выделены культуры в R- и S-формах, которые типировали как C . pseudotuberculosis. Кроме того, в органах и мышечной ткани в 46 % случаев обнаруживалась микрофлора из рода Salmonella, Staphylococcus, Proteus, Esherichia и сульфитредуцирующие клостридии.

Морфологические свойства. Коринебактерии представляли собой полиморфные неподвижные, не образующие спор и капсул палочки или овоиды, которые часто имели на концах клеток булавовидные утолщения и содержали неравномерно окрашивающиеся гранулы волютина.

Чаще всего они располагались кучками, реже в виде китайских иероглифов, а иногда одиночно. Бактериальные клетки имели следующие размеры длины и ширины: палочковидные — 2,54-3,15 и 0,92-0,94, овоидные — 0,52-0,68 и 0,40-0,60, кокковые — 0,70-0,86 и 0,70-0,90 мкм соответственно. Электронно-микроскопические исследования С.

pseudotuberculosis показали, что клетки имели округлую, овальную или слегка вытянутую формы. Микрокапсула была представлена тонким, осмиофильным мелкозернистым слоем, отделенным от клеточной стенки осмиофобным слоем шириной около 16,6 нм.

В большинстве клеток выявлена пятислойная структура клеточной стенки 15-20 нм и трехслойная структура цитоплазматической мембраны. Цитоплазматическая мембрана асимметричная, переплазматическая зона расширена.

Цитоплазма клеток коринебактерий была представлена мелко-гранулярным компонентом с зонами повышенной плотности размером 20-40 нм (рибосомы, полисомы).

В различных частях клеток обнаруживали значительное количество внутрицитоплазматических мембранных структур, расположенных в непосредственной близости от плазмолеммы и сохраняющих с ней анатомическую связь.

В ультратонких срезах коринебактерий нуклеоид был представлен небольшой, достаточно дифференцированной осмиофобной зоной, в которой располагались тяжи, образованные слипшимися нитями ДНК. На электронограммах коринебактерий выявлялись достаточно крупные и многочисленные включения — гранулы волютина, которые были представлены множеством зёрен различной величины 0,18-0,20 мкм, имели разрыхленную центральную часть и плотную осмиофильную периферию. Такие гранулы располагались вблизи от нуклеоида или на концах клеток. Деление коринебактерий происходило путем образования перетяжки с последующим ее расщеплением (рис. 1).

Рис. 1. C. рseudotuberculosis МК — микрокапсула, КС — клеточная стенка, ЦМ — цитоплазматическая мембрана, Н — нуклеоид, П — полисомы, Г — гранулы волютина, МС — мембранные структуры. Электронная микроскопия (х 60000)

R-формы коринебактерий отличались от S- и I-форм менее выраженным полиморфизмом, наличием мелкозернистой микрокапсулы, тонкой клеточной стенкой с более четким разделением на слои, трехслойной структурой цитоплазматической мембраны, образованием мембранных структур в цитоплазме. S-формы коринебактерий обладали достаточно выраженным полиморфизмом.

Клеточная стенка четкого разделения на слои не имела и во многих клетках была представлена осмиофильной структурой с выделением более плотных наружного и внутреннего слоев, между которыми находился слой умеренной электронной плотности. Нуклеоид имел вид длинной узкой осмиофобной зоны, заполненной отдельными, собранными в пучки или слипшимися нитями ДНК.

В некоторых клетках нуклеоид представлен двумя фрагментами и смещен к периферии.

I-формы коринебактерий также имели выраженный полиморфизм. У двухсуточных агаровых культур преобладали округлые и овальные клетки, имеющие гомогенную клеточную стенку. Периплазматическое пространство и цитоплазматическая мембрана выражены четко. Цитоплазма большинства клеток  мелкозернистая, рибосомы и полисомы расположены в ней равномерно.

Нуклеоид имел неодинаковые размеры, ДНК располагалась чаще всего в виде рыхлого клубка. Деление таких клеток осуществлялось узкой светлой, слоистого строения перегородкой. Кроме типичных клеточных форм находили клетки с деструктивными изменениями клеточных стенок или совсем ее лишенных (L — формы).

Редко встречались единичные лизированные светлые клетки.

Тинкториальные свойства.

При окраске простым методом R, I, S-формы коринебактерий хорошо воспринимали фуксин Циля, генцианвиолет, бриллиантовый зеленый, метиловый синий, но окрашивались неравномерно, причем палочковидные формы окрашивались биполярно.

Все бактерии позитивно окрашивались по методу Грама. Палочковидные формы и реже овоидные окрашивались интенсивнее по полюсам. При окраске по Нейссеру у всех культур выявляли метахроматические зерна (волютин), которые окрашивались в сине-фиолетовый цвет.

Культуральные свойства. При росте на твёрдых питательных средах при температуре +37 °С (рН 7,0-7,4) C. pseudotuberculosis образовывали колонии, характерные для R-, S- и I-форм. На мясо-пептонном агаре рост коринебактерий в 75 % случаев появлялся на первые сутки. Типичным для всех культур являлось образование мелких росинчатых колоний.

У культур R-форм эти колонии имели желто-серый цвет и матовую поверхность, у культур S-форм — серо-белый цвет и блестящую поверхность, у культур, отнесенных к переходным I-формам, колонии имели характеристики обеих форм. На вторые и третьи сутки культивирования размеры их увеличивались до 1,5-3,0 мм в диаметре и появлялись четко очерченные конфигурации.

У колоний R-форм края были неравномерно зазубрены, центр слегка приподнят в виде купола, периферия радиально исчерчена, консистенция сухая, структура крупнозернистая. Эти фенотипические признаки (R-формы) были характерными для 201 культуры (37,7 %). Колонии S-форм C. pseudotuberculosis на вторые сутки культивирования достигали размеров от 1 до 4 мм в диаметре.

Цвет их незначительно менялся от серо-белого к желтоватому. Поверхность колоний была блестящая, реже — матовая, куполообразная. Консистенция пастообразная, края ровные. Эти признаки были типичными для 301 культуры (56,4 %). Колонии I-форм имели характеристики обеих форм. Однако они были меньших размеров, от 1 до 2 мм.

Такие формы колоний были характерными для 31 культуры (5,8 %). На МПБ рост культур появлялся через 24-30 часов. R-формы  C. pseudotuberculosis на поверхности бульона образовывали нежную, ломкую, полупрозрачную серо-белую пленку и скудный, в виде манной крупы, осадок. Помутнения среды не отмечалось.

При встряхивании пробирки пленка ломалась и быстро оседала на дно, при этом бульон оставался прозрачным. Культуры, отнесенные к S-формам, при росте на МПБ, в 93,1 % случаев образовывали нежную, еле заметную серовато-белую пленку на поверхности среды и осадок на дне в виде комочка ваты, в первые сутки культивирования. При этом среда была мутной.

При встряхивании осадок и пленка легко разбивались и медленно оседали на дно пробирки. I-форма на поверхности мясо-пептонного бульона образовывала хорошо развитую пленку, скудный зернистый осадок и незначительное помутнение среды.

Все культуры разных диссоциативных форм одинаково хорошо росли на твердых средах с добавлением 10 % дефибрированной крови крупного рогатого скота, лошадей и овец. На 10 % кровяном агаре через 24 часа наблюдали появление колоний серо-желтого цвета также R-, S-, I-формах. На месте появления колоний размерами 1-1,5 мм обнаруживали слабозаметную зону b-гемолиза (83,6 %).

На кровяном теллуритовом и сывороточном теллуритовом агаре (КТА, СТА и КТА с канамицином) через 24-48 часов обнаруживали колонии черного цвета в R-S-I-формах. При росте на среде Школьниковой у 28 культур коринебактерий (77,7 %) была выявлена L-трансформация в молодых, развивающихся и в стареющих культурах.

Биохимические свойства. Выделенные культуры C. pseudotuberculosis R-, S-, I-форм на 2-4 сутки ферментировали с образованием кислоты без газа глюкозу (93,2 %), галактозу (69,5 %), мальтозу (71,7 %), сахарозу (73,2 %). Не ферментировали арабинозу, рамнозу и дульцит; не вызывали гидролиз крахмала, не восстанавливали лакмусовое молоко.

Культуры R-формы, в отличие от S-, не ферментировали рафинозу. Сахаролитическая активность культур S-форм была разнообразна. Так, 97,2 % культур ферментировали глюкозу,  83,7 % — галактозу,  71,3 % — мальтозу,  76,9 % — сахарозу, 45,5 % — маннит. Протеолитические свойства культур R-, S-, I-форм были слабо выражены.

Все исследованные культуры не образовывали индола, редко (5,1 %) образовывали сероводород и свертывали молоко (5,6 %), иногда на 5-6 сутки, вызывали гидролиз желатина (4,0 %). Образование каталазы отмечали у всех культур. Образование уреазы наблюдали только у R-форм в 4,4 % случаев. I- и S- формы были уреазоотрицательными.

Культуры обладали слабыми редуцирующими свойствами. Не восстанавливали нитраты и лакмусовое молоко.

Токсигенные свойства. Наиболее выраженными токсигенными свойствами обладают S-формы C. pseudotuberculosis . R- и I-формы менее токсигенны. Понижение температуры культивирования на МПА до +2…

+4 °С приводит к повышению токсикообразования всех форм культур. Заражение белых мышей фильтратом культур вызывало в 65 % случаев гибель на 3-8 сутки.

При патологоанатомическом вскрытии у мышей обнаруживали отёки, кровоизлияния в брюшной и грудной полостях.

Вирулентные свойства. Расчётным путём были установлены заражающие и 50 % летальные дозы (LD 50) для мышей при заражении их культурами C. pseudotuberculosis. Для культур I-формы LD 50 составляла 112 тыс. м. т., для R-формы — 1,0 млн м. т., и S-формы — 21,8 млн м. т.

Культуры коринебактерий в I-форме оказались более вирулентные, чем культуры в R- и S-формах. При вскрытии погибших мышей находили кровоизлияния в органах грудной и брюшной полостей и экссудат.

На месте инъекции у шести мышей обнаруживали гнойные очаги размером с горошину, при бактериологическом исследовании были выделены ретрокультуры.

Патогенные свойства. Мыши, заражённые взвесью агаровых культур коринебактерий S- , R-, I-форм подкожно, в дозе 0,3´106 м. т. (по ОСМ), погибали на 3-15-е сутки. Культуры R-формы вызывали гибель животных в течение 7,63±0,46, I-формы 7,17 ±0,63, а S-формы — 9,33±0,93 суток.

Патологические изменения выявлены у 87,6 % исследуемых мышей. При этом в 100 % случаев изменения вызывали I-форма; в 97,3 % — R-  и в 93,7 % — S-формы коринебактерий. При вскрытии обнаруживали серозно-геморрагическое воспаление в органах грудной и брюшной полостей. На месте введения культуры находили милиарные узелки.

Исходные культуры были выделены от 88,75 % животных. При внутрибрюшинном заражении морских свинок в дозе 0,5´106 м. т. культурами различных форм гибель наступала в течение 5-20 суток. Характерные патологические изменения выявлены у 88,8 % исследуемых животных.

При этом в 100 % случаев изменения вызывали R- и I-формы и в 91,6 % — S-формы коринебактерий. Для морских свинок более патогенной является R-форма микроба, I- и  S-формы (при р

Гинекологические мазки на флору: как берут, что показывают, как расшифровываются

Процедура взятия мазка на флору известна каждой женщине, посетившей смотровой кабинет. Так как анализ позволяет определить микробиологический состав, выявить гормональные нарушения и воспалительные процессы, мазок берётся независимо от того, имеет ли женщина жалобы на здоровье или нет.

СТОИМОСТЬ МАЗКА НА ФЛОРУ В НАШЕЙ КЛИНИКЕ В САНКТ-ПЕТЕРБУРГЕ

Виды мазков

В зависимости от места взятия, мазки бывают:

• вагинальные (V-vagina);
• с поверхности шейки матки (C-cervix);
• из мочеиспускательного канала (U- uretra).

Как берут мазок из половых органов

С половых губ мазок берётся редко, если только для этого имеются особые показания, например, наличие воспалённых участков. В этом случае мазок заменяют соскобом. Чаще гинекологу нужен влагалищный мазок. Он берётся шпателем из заднего свода влагалища, при воспалении — с видимого участка.

Полученный материал наносится на стекло, подсушивается, сверху наносится несколько капель этанола. Образец маркируется и отправляется в закрытой ёмкости в лабораторию.

При выявлении ИППП (ЗППП) мазок берётся с помощью тампона, который помещается в стерильную пробирку и передаётся на исследование.

Во многих медицинских учреждениях практикуется приём пациенток с одноразовыми диагностическими наборами. Например, часто используется набор «Юнона», предназначенный специально для взятия проб различного характера (венерологические, гинекологические). Все предметы асептично упакованы, и имеют разный состав в зависимости от характера осмотра.

• Набор «Юнона-0» состоит из смотровых перчаток, пелёнки и ложки Фолькмана, которой берётся образец слизистой поверхности влагалища, уретры или шейки матки.
• «Юнона-1» включает вместо ложки Фолькмана зеркало Куско. С его помощью область осмотра увеличивается в 2 раза, можно увидеть отёки, окраску тканей, рубцы. Руки доктора свободны, и он может проводить любую манипуляцию.
• «Юнона №3» имеет как зеркало Куско, так и ложку Фолькмана. Это нужно для того, чтобы была возможность взять мазки как из влагалища, так и из шейки матки или уретры без боязни случайного переноса микрофлоры.
• Набор «Юнона» №4 имеет дополнительно цитощётку, с помощью которой безболезненно берётся мазок из цервикального канала.
• «Юнона-5» дополнена шпателем Эйра с микропорами на конце, с его помощью берётся мазок с любой поверхности. Предметные стёкла нужны для переноса на них материала мазка, но обычно стёкла имеются в каждом смотровом кабинете.

В клинике Диана все одноразовые расходные материалы уже включены в стоимость приема или анализов, поэтому с собой ничего нести не нужно.

Как берут мазок из уретры

Забор мазка из уретры проводится двумя способами:

• Ложка Фолькмана вводится в уретру на несколько сантиметров, делается соскоб эпителиальных клеток путём прижимания аппликатора к стенкам уретры и вращая его в разные стороны. Это довольно болезненная процедура, если имеется травма или воспаление мочеиспускательного канала.
• При сильных выделениях размещать ложку Фолькмана внутрь уретры не нужно. Достаточно надавить а переднюю стенку влагалища, чтобы содержимое мочеиспускательного канала вышло наружу. Затем оно собирается аппликатором и помещается в пробирку.

Как берут мазок из шейки матки

Существует 4 вида мазков из шейки матки:

• исследование на флору;
• обследование на стерильность;
• исследование на скрытые инфекции методом полимеразной цепной реакции;
• ПАП-тест на цитологию.

Мазок на флору из шейки матки выявляет не только болезнетворные бактерии, но и патогенные эпителиальные клетки.

Процедура проводится с помощью зеркала Куско. Это зеркало не в привычном понимании этого слова. Оно больше похоже на прозрачные щипцы, которые раздвигают стенки влагалища, освобождая доступ к шейке матки. Затем шпателем или цитощёткой делается соскоб, по которому оценивается состояние эпителиальных клеток.

Расшифровка результатов анализов гинекологического мазка. Норма

Показатель	Из влагалища	Их уретры	Из шейки матки
Лактобактерии	Палочки Дедерлейна	Нет	Нет
Количество палочковой флоры	от + до ++++	от + до ++++	от + до ++++
Кандида	до 104 КОЕ/мл	отсутствует	отсутствует

Плоский эпителий	5-10	5-10	5-10
Лейкоциты	0-10	0-5	0-30
Эритроциты	0-2	0-2	0-2
Слизь	умеренное количество	отсутствует	умеренное количество
Гонококки Gn	отсутствует	отсутствует	отсутствует
Трихомонада Trich	отсутствует	отсутствует	отсутствует
Ключевые клетки	отсутствуют	отсутствуют	отсутствуют

Что означают отклонения в мазке из влагалища

Отклонения от нормы в мазке из влагалища говорят о следующем:

Низкое содержание палочек Дедерлейна указывает на плохой микробиоценоз с преобладанием болезнетворной микрофлоры.

Палочки Дедерлейна — это вытянутые по форме лактобактерии, которые в качестве продукта жизнедеятельности образуют молочную кислоту.

Благодаря им поддерживается кислая среда во влагалище, защищающая от проникновения патогенных микроорганизмов. Молочная кислота активизирует иммунные клетки, ведущие борьбу с микробами.

При снижении числа палочек Дедерлейна у женщины развивается влагалищный дисбактериоз. Это случается во время болезни, гормональной терапии, приёме антибиотиков и гормонов, сильном или затяжном стрессе, заражении ЗППП.

При обнаружении малого количества лактобактерий женщине дополнительно назначают ПАП-тест на скрытые инфекции. Если он не даст положительного ответа, то пациентки прописывают вагинальные свечи, которые подавляют патогенную микрофлору, помогая палочкам Дедерлейна.

Высокое содержание кокковой флоры и снижение палочковый флоры указывает на ослабление иммунитета или активизацию условно-патогенной микрофлоры. Степень чистоты влагалища определяется от нормоциноза до вагинита.

• При 1 степени (нормоценоз) кислотность влагалища составляет рН 3,8 ̶ 4,2, много палочек Дедерлейна, нет лейкоцитов, имеются единичные клетки эпителия.
• При 2 степени чистоты количество лейкоцитов увеличивается до 10, а клеток эпителия имеется довольно много. Кислотность увеличивается до рН 4,0 ̶ 4,5.
• При 3 степени чистоты кислотная среда сменяется слабощелочной (рН 5,0 ̶ 5,5), кокковая микрофлора доминирует над лактобактериями, лейкоциты в пределах норма. 4 степень чистоты лактобактерий нет вообще, среда во влагалище щелочная (рН 6,0 ̶ 6,5). Помимо различных  кокков, встречаются единичные трихомонады и ключевые клетки.

Нормальный мазок соответствует 1 и 2-й степеням чистоты. В этом случае «население» слизистой поверхности влагалища должно соответствовать параметрам:

• лактобактерии в количестве 107— 109 КОЕ/мл (КОЕ — это одна микробная клетка (колониеобразующая единица), которая в питательной среде активно размножается и образует колонию);
• стрептококки до 105 КОЕ/МЛ;
• кандида, клостридии, стафилококки, превотеллы — до 104 КОЕ/мл;
• уреаплазма, микоплазма — до 103 КОЕ/мл;

При 3 степени чистоты у женщины диагностируется бактериальный вагиноз — нарушение естественного баланса при снижении количества лактобактерий и увеличении содержания грамотрицательных палочек.

Также при 3 и 4 степени чистоты влагалища характерен вагинит (кольпит) — увеличение количества условно-патогенной микрофлоры, сопровождающееся воспалением поверхности влагалища.

Какие патогены и отклонения обнаруживаются в плохих мазках

• Кандида — это грибковое поражение влагалища, уретры или шейки матки, вызванное снижением иммунитета, дисбактериозом влагалища. С заболеванием сталкивалась хотя бы раз каждая женщина. Оно достаточно легко и быстро лечится, но иногда свидетельствует о более серьёзной патологии — сахарном диабете.
• Повышение числа эпителиальный клеток свидетельствует о воспалительном процессе, а полное отсутствие — об атрофии стенок влагалища или дефиците эстрогена. Плоский эпителий -— это отмершие, слущенные с поверхности стенок влагалища слизистые клетки. Они постоянно отпадают, и на их месте зарождаются новые клетки. В норме в мазке не должно быть более 10 эпителиальных клеток.
• Лейкоциты. Это иммунные клетки, которые ведут борьбу с патогенной микрофлорой. В мазке у небеременной женщины их не более 10, у беременной — до 30 штук. Увеличение лейкоцитов выше нормы свидетельствует как о неспецифическом воспалении (при кольпите, вагинозе), так и специфическом (при ИППП). Обязательно нужно найти источник воспаления. Это может быть аднексит (воспаление придатков), эндометрит (воспаление эндометрия), дисбактериоз влагалища, острая форма кандидоза.
• Повышение эритроцитов свидетельствует о сильном воспалении. Эритроциты — это красные кровяные тельца, в норме их количество не должно превышать 2 штуки. Если их больше, это означает, что при соприкосновении цитощётки со стенкой влагалища были повреждены мелкие сосуды. Также число эритроцитов повышается сразу после менструации.
• Большое количество слизи в мазке указывает на воспаление шейки матки, потому что слизь выделяется именно там (влагалище не имеет желез). В норме в сутки у женщины истекает 4 мл слизи. Если она розоватого цвета, и при анализе в ней обнаруживаются лейкоциты, это свидетельствует о воспалении цервикального канала. Также количество слизи увеличивается у беременных женщин.
• Гонококки. Это микроорганизмы, передающиеся половым путём. Этой бактерии в мазке быть не должно. Если к тому же лейкоциты и эритроциты также высоки, то пациентке требуется сдать ПАП-тест и пройти ПРЦ-диагностику на выявление ДНК микроба.
• Трихомонада. Это ИППП, свидетельствующая о заражении трихомониазом. Даже один микроб требует срочного лечения.
• Ключевые клетки указывают на воспалительный процесс, вызванный попаданием внутрь организма ИППП, а также развитием заболеваний детородной системы — эрозии шейки матки, эктопии, полипов эндометрия. Они появляются при изменении кислотной среды влагалища на щелочную. Ключевые клетки (это обычный плоский эпителий, окружённый патогенными микроорганизмами) имеют свойство перерождаться, поэтому при выявлении хотя бы одной из них женщине следует регулярно проходить  обследование.

Нормальные показатели мазков из уретры

При взятии мазка из уретры норма мазка является таковой:

Количество эпителиальных клеток	Лейкоциты	Эритроциты	Кандида	Слизь	Состав флоры
до 10	до 5	до 2	нет	нет	в малом количестве золотистый стафилококк, синегойная палочка, нейссерия

• В норме 95% микрофлору уретры должны составлять лактобактерии. Если условно-патогенная микрофлора доминирует, это говорит об ослаблении иммунитета или о болезнях органов малого таза.
• Большое количество плоского эпителия указывает на перенесённые ранее заболевания воспалительного характера (цистит, болезни почек).
• Эритроциты свидетельствуют о сильном отёке, вызванном воспалительном процессе, а также о повреждении мочеиспускательного канала.
• Лейкоциты выше нормы бывают при воспалении, вызванным переохлаждением, падением иммунитета или инфекцией.
• Дрожжи, в частности, кандида, является следствием переноса инфекции из влагалища, когда заболевание достигает серьёзной формы. В норме никаких дрожжей в уретре быть не должно. Как и слизи, появление которой в мочеиспускательном канале указывает на инфицирование.

Чтобы узнать возбудителя инфекции, у пациентки берётся бактериальный посев — лабораторный анализ, позволяющий найти грамотный антибиотик, к которому имеется хорошая чувствительность.

Нормы мазка из цервикального канала

Мазок из цервикального канала и соскоб с шейки матки имеют разное значение.

Соскоб относится к области цитологии — выявление патологического размножения клеток, способных перерождаться или уже переродившихся в рак. Процедуру проводят девушкам старше 18 лет.

Мазок проводится из самого цервикального канала. Для этого с помощью зеркала раздвигаются стенки влагалища, и из канала берётся биоматериал. Процедура довольно неприятная, но очень информативна.

Результаты мазка должны быть такими:

• Эпителий (отмершие клетки слизистой оболочки) возможен, но не более 10 единиц. Если его больше, это говорит о прогрессивном воспалительном процессе, причём не только на шейке матки, но и в фаллопиевых трубах или самой матке.
• Если во влагалище количество лейкоцитов не должно превышать 10 штук, то в цервикальном канале их число увеличивается до 30. Фагоцитоз (повышенная активность лейкоцитов) указывает на активную деятельность болезнетворных бактерий.
• Палочки Дедерлейна в цервикальном канале отсутствуют.
• Слизь вырабатывается желёзками шейки матки, поэтому содержится в небольшом количестве в цервикальном канале

Что делать, если результаты мазка плохие?

Результаты анализов выдаются на руки или приходят лечащему гинекологу. При наличии отклонений от норм, доктор назначает лечение или дополнительную диагностику.

После прохождения курса лечения, нужно ещё раз сдать анализы, чтобы убедиться, что болезнь полностью ушла. Недолеченные заболевания заканчиваются осложнениями и хроническими формами. Хронические заболевания можно только гасить, а вот полностью избавиться от них нельзя.